黄瓜扩张素蛋白基因CsEXPb1的克隆及功能研究

发布时间：2021-03-24 01:25

　　黄瓜（Cucumis sativus L.）是市场需求量较大的蔬菜作物之一,然而在设施栽培中特别是反季节栽培中,由于湿度大、温度低、雄花少、病害严重等不利因素严重影响了黄瓜的生长及产量,造成经济损失。因此,研究黄瓜果实发育机理、多方面增强黄瓜生长势、增加座果率有利于切实解决生产中所存在的问题。植物生长发育是受多类基因调控的复杂过程,其中有一类扩张蛋白基因（expansin）作用于植物细胞壁,通过引起细胞壁松弛促进细胞伸展与分裂。多年来,关于扩张蛋白影响植物生长发育的报道越来越多。本研究在对黄瓜果实转录组学研究的基础上发现了在果实发育过程中差异表达的Csa5M561760.1基因,且属于β-expansin基因家族。GeneBank登录号为 XP011655449,本研究克隆了此基因,将之命名为CsEXPb1,并开展了此基因相关的功能研究,主要研究内容及结果如下:1.黄瓜扩张素蛋白基因CsEXPb1的克隆及表达分析本研究以黄瓜品种’EC1’雌花cDNA、雄花cDNA以及叶片总DNA为模板,克隆得到目的基因,全长942 bp,其中开放阅读框（ORF）长度为549 bp,共编码182个氨基酸... 

【文章来源】：南京农业大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：93 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图２－１?ｐＧｒｅｅｎ〇〇２９载体质粒图谱??

用基因克隆引物进行ＰＣＲ扩增，以ＰＭＤ１９－Ｔ为克隆载体，将目的基因片段纯化后用??Ｔ４连接酶和酶切开的载体连接，导入大肠杆菌Ｄ／７知，测序，提取质粒，ＰＣＲ扩增检??测（图２－２），３个条带长度相同。检索黄瓜基因组数据库发现目的基因全长９４２?ｂｐ，??包含２５０?ｂｐ?５＇端非翻译区，５４９?ｂｐ开放阅读框（０ＲＦ），１４３?ｂｐ?３＇端非翻译区，共编??码１８２个氨基酸（图２－３），与黄瓜基因组数据库基因编码区序列完??全一致，表明己经成功获得目的基因，且整个ＯＲＦ区域全部为外显子，不含内含子。??｜?■一２０００??■—１０００???７５０??—５００??图２－２?基因ＰＣＲ扩增产物电泳图??１：?‘ＥＣ１，雌花?ｃＤＮＡ；?２：?‘ＥＣ１，雄花?ｃＤＮＡ；?３：叶片总?ＤＮＡ；?Ｍ：?２０００?ｂｐ?ｍａｒｋ。??Ｆｉｇ．?２－２?Ａｇａｒｏｓｅｇｅｌ?ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ?ｏｆ?ＰＣＲ?ａｍｐｌｉｃａｔｉｏｎ?ｐｒｏｄｕｃｔ?ｏｆ?ＣｓＥＸＰｂｌ?ｇｅｎｅ??２９??

个碱性氨基酸（精氨酸和赖氨酸），不稳定系数为３２．８７，为稳定蛋白。??ＥｘＰａｓｙ分析该蛋白的疏水性结构发现蛋白大部分｜＞＜域表现为亲水性（ｓｃｏｒｅ大于??１．５的是疏水部分，＜０的是亲水部分），说明此蛋白为亲水性蛋白（


本文编号：3096782