香椿γ-谷氨酰胺转肽酶的分离纯化及酶学特性研究
发布时间：2021-03-24 04:50
香椿起源于中国,属于楝科香椿属高大乔木,其嫩芽具有特殊而诱人的香气,是我国的传统高档蔬菜,有2000多年的食用历史,深受广大消费者喜爱。香椿特征性香气产生的机理一直不清楚,不利于优良菜用品种的选育及保风味技术的开展。最近的研究表明,挥发性有机硫化物对于香椿特殊香气的产生有重要影响,其中γ-谷氨酰胺转肽酶（γ-glutamyl-transpeptidase,GGT）处于代谢途径中的重要位置。本论文以香椿嫩芽为材料,通过硫酸铵分级沉淀及层析分离技术等,得到电泳纯级别的GGT,对其酶学性质进行了初步研究,主要结果和结论如下:通过硫酸铵分级沉淀、透析脱盐和Sephadex G-200柱色谱分离纯化,从香椿芽冻干粉中分离得到电泳纯级别的GGT,纯化倍数为40.67,得率为13.40%;SDS-PAGE分析表明,GGT含有两个不同的亚基,分子量分别为26kDa和64kDa。GGT的Km为3.623μmol/mL,最大反应速度Vmax为2.831μmol/mL·min。酶的催化动力学研究表明,GGT最适宜的反应温度为60℃,最适宜pH7.0,Cu2+和Zn2+对GGT有很强的抑制作用,Fe3+有很强...
【文章来源】：天津科技大学天津市
【文章页数】：66 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图３－２对硝基苯胺的标准曲线??２７??
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的提取方法，相??比较其他提取方法不仅保持了天然产物的活忭，而且提高了破碎速度，缩短了提収时??间，极大的提高了提取效率。??３．２．３超声辅助提取法的工艺优化??（１）不同缓冲液体积对提取ＧＧＴ酶含量的影响??６０?－１??ｚ．ｊ．、??５０－??４０?－?ｒ’?、??ｉ?３０?－??＾?／??运?？??２０－??１０－??ｌ?ｌ?ｌ?ｌ?ｌ?ＩＩ??０?５０?１００?１５０?２００?２５０?３００??缓冲液休枳（ｍｌ）??图３４缓冲液体积对提取丫－谷氨酰转肽酶含量的影响??Ｆｉｇ．?３－４?Ｅｆｆｅｃｔ?ｏｆ?ｂｕｆｆｅｒ?ｖｏｌｕｍｅ?ｏｎ?ｔｈｅ?ｃｏｎｔｅｎｔ?ｏｆ?ＧＧＴ??由图３－４可知，随着缓冲液体积的提高，即料液比下降时，提取液中ＧＧＴ的含??量不断增加，当料液比达到ｌ：２００?（ｇ／ｍＬ）时，ＧＧＴ的含量达到了最办位（５３．４２±０．５７??Ｕ／ｇ），之后进一步增加缓冲液体积，ＧＧＴ的穴量相对Ｍ高值有所降低。刍样品量一定??是，溶剂量的增加加大了溶质的扩散空间，从而降低了溶质颗粒周丨丨＿成分浓度，有??利于溶质分子从高浓度到低浓度部位的运动、传递和扩散。因此ＧＧＴ的从样品中溶??２９??
【参考文献】：
期刊论文
[1]面粉中蛋白质二级结构的红外光谱研究[J]. 赵永会,史义静,冯俊霞,秦婷,吴玉静,于宏伟. 光散射学报. 2015(01)
[2]离子交换层析法分离猪股骨降血压肽的研究[J]. 舒一梅,李诚,郑丽君,潘姝璇,陈娜,郭威,王诗熠,付刚. 食品工业科技. 2015(02)
[3]超声时间对米糠蛋白理化和功能特性的影响[J]. 王长远,许凤,张敏. 中国粮油学报. 2014(12)
[4]凝胶层析法分离猪股骨降血压肽及其体外稳定性[J]. 舒一梅,李诚,付刚,陈姝娟,何利,杨勇,胡滨,张志清,苏赵. 食品科学. 2014(24)
[5]大肠杆菌和枯草芽孢杆菌来源γ-谷氨酰转肽酶的克隆表达和性质比较[J]. 房鑫,田思思,姚忠,王浩绮,周治,熊强,孙芸,韦萍. 高校化学工程学报. 2014(02)
[6]血清GGT的测定对肝癌的诊断价值[J]. 叶恒山. 现代养生. 2014(04)
[7]睡莲属植物化学成分及生物活性研究进展[J]. 赵军,徐芳,吉腾飞,顾政一,李晨阳. 天然产物研究与开发. 2014(01)
[8]γ-谷氨酰转肽酶与代谢综合征及其相关组分的研究[J]. 王晶莹,傅晓英. 新医学. 2013(09)
[9]疏水层析法分离多肽类物质的研究进展[J]. 韩婧师,李波,陈旭东. 饲料广角. 2013(17)
[10]冬虫夏草蛋白超声提取工艺研究[J]. 才凤,李双,李杨,李洪江. 实用药物与临床. 2013(07)
本文编号：3097090
【文章来源】：天津科技大学天津市
【文章页数】：66 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图３－２对硝基苯胺的标准曲线??２７??
??３结果１?ｊｉ、ｔ论???Ｆｉｇ．?３－２?Ｔｈｅ?ｓｔａｎｄａｒｄ?ｃｕｒｖｅ?ｏｆ?Ｐ－ｎｉｔｒｏａｎｉｌｉｄｅ??由图３－２可知，标准物对硝基苯胺浓度与其吸光度表现出良好的线性关系，其标??准曲线方程为：ｙ＝６．９９３ｘ?＋０．０２６，Ｒ２?＝?０．９９９。??３．２．２三种不同提取方法对ＧＧＴ提取率的影响??表３－２三种不同的提取方法的比较结果??Ｔａｂｌｅ．?３－２?Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｐｒｏｃｅｓｓ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｔｈｒｅｅ?ｍｅｔｈｏｄｓ??提取温度?提収功率?提取时间?料液比?酶含Ｍ??辅助提取方法??（°Ｃ）?（Ｗ）?（ｍｉｎ）?（ｇ／ｍＬ）?（Ｕ／ｇ）??超卢波提取法?４?２００?２０?１：５０?５．１９±０．０３??机械搅扑提取法?４?２３０?２０?１：５０?３．６０±０．０５??反复冻融提取法?－１８／４?—?５４０?１：５０?２．１９±０．０２??ｅ?＾???＇Ｉ?禮國??媒－齡麵一??超声波机喊描伴反？冻纖??辅肋摁取法?補舫提取法?辅Ｍ掇职法??图３－３三种提取方法下的酶含量变化??Ｆｉｇ．?３－３?Ｃｈａｎｇｅ?ｏｆ?ＧＧＴ?ｃｏｎｔｅｎｔ?ｉｎ?ｔｈｒｅｅ?ｍｅｔｈｏｄｓ??由上述实验结果（表３－２，图３－３）可知，目前普遍采用的机械搅拌辅助提取法，??ＧＧＴ的酶含量结果为３．６０±０．０５Ｕ／ｇ，而采用超声波辅助提取法得到的ＧＧＴ酶含量高??达５．１９±０．０３Ｕ／ｇ，对比常用的机械搅拌辅助提取法的结果提高了将近１．５倍，而反复??冻融辅助提取法工艺得到的ＧＧＴ酶含量为２．１９±０．０２Ｕ／ｇ，低于机
的提取方法，相??比较其他提取方法不仅保持了天然产物的活忭，而且提高了破碎速度，缩短了提収时??间，极大的提高了提取效率。??３．２．３超声辅助提取法的工艺优化??（１）不同缓冲液体积对提取ＧＧＴ酶含量的影响??６０?－１??ｚ．ｊ．、??５０－??４０?－?ｒ’?、??ｉ?３０?－??＾?／??运?？??２０－??１０－??ｌ?ｌ?ｌ?ｌ?ｌ?ＩＩ??０?５０?１００?１５０?２００?２５０?３００??缓冲液休枳（ｍｌ）??图３４缓冲液体积对提取丫－谷氨酰转肽酶含量的影响??Ｆｉｇ．?３－４?Ｅｆｆｅｃｔ?ｏｆ?ｂｕｆｆｅｒ?ｖｏｌｕｍｅ?ｏｎ?ｔｈｅ?ｃｏｎｔｅｎｔ?ｏｆ?ＧＧＴ??由图３－４可知，随着缓冲液体积的提高，即料液比下降时，提取液中ＧＧＴ的含??量不断增加，当料液比达到ｌ：２００?（ｇ／ｍＬ）时，ＧＧＴ的含量达到了最办位（５３．４２±０．５７??Ｕ／ｇ），之后进一步增加缓冲液体积，ＧＧＴ的穴量相对Ｍ高值有所降低。刍样品量一定??是，溶剂量的增加加大了溶质的扩散空间，从而降低了溶质颗粒周丨丨＿成分浓度，有??利于溶质分子从高浓度到低浓度部位的运动、传递和扩散。因此ＧＧＴ的从样品中溶??２９??
【参考文献】：
期刊论文
[1]面粉中蛋白质二级结构的红外光谱研究[J]. 赵永会,史义静,冯俊霞,秦婷,吴玉静,于宏伟. 光散射学报. 2015(01)
[2]离子交换层析法分离猪股骨降血压肽的研究[J]. 舒一梅,李诚,郑丽君,潘姝璇,陈娜,郭威,王诗熠,付刚. 食品工业科技. 2015(02)
[3]超声时间对米糠蛋白理化和功能特性的影响[J]. 王长远,许凤,张敏. 中国粮油学报. 2014(12)
[4]凝胶层析法分离猪股骨降血压肽及其体外稳定性[J]. 舒一梅,李诚,付刚,陈姝娟,何利,杨勇,胡滨,张志清,苏赵. 食品科学. 2014(24)
[5]大肠杆菌和枯草芽孢杆菌来源γ-谷氨酰转肽酶的克隆表达和性质比较[J]. 房鑫,田思思,姚忠,王浩绮,周治,熊强,孙芸,韦萍. 高校化学工程学报. 2014(02)
[6]血清GGT的测定对肝癌的诊断价值[J]. 叶恒山. 现代养生. 2014(04)
[7]睡莲属植物化学成分及生物活性研究进展[J]. 赵军,徐芳,吉腾飞,顾政一,李晨阳. 天然产物研究与开发. 2014(01)
[8]γ-谷氨酰转肽酶与代谢综合征及其相关组分的研究[J]. 王晶莹,傅晓英. 新医学. 2013(09)
[9]疏水层析法分离多肽类物质的研究进展[J]. 韩婧师,李波,陈旭东. 饲料广角. 2013(17)
[10]冬虫夏草蛋白超声提取工艺研究[J]. 才凤,李双,李杨,李洪江. 实用药物与临床. 2013(07)
本文编号：3097090
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