山核桃RCA基因克隆、表达及其在抗高温中的作用

发布时间：2021-03-24 14:42

　　山核桃（Carya cathayensis Sarg.）是重要的木本油料作物,生产中易受到自然逆境胁迫因素影响,尤其是高温,高温下严重限制植物光合作用致使山核桃生长,结实,有机物积累等都受到影响。因此,对山核桃光合作用相关基因的开发和利用具有重要的意义。在高等植物中光合作用关键步骤固定CO2过程需要Rubisco酶的催化,Rubisco酶的活性由植物体内复杂的机制进行调控,其中大量研究已证实Rubisco activase（RCA）能够活化并维持Rubisco酶的催化活性。同时RCA也被认为是植物在各种不同环境胁迫下对光合作用的关键调控因素。因此,Rubisco活化酶的功能研究对于增强植物体内Rubisco酶活性稳定光合作用系统,进而提高植物适应逆境的能力具有重要作用。本试验通过应用RACE技术,克隆得到了山核桃2个RCA基因的全长cDNA序列,命名为CcRCAα和CcRCAβ。序列开放阅读框长度分别为1419bp、1302bp,推测编码472和433个氨基酸。利用DNAMAN软件对山核桃RCA基因与葡萄等物种的RCA氨基酸序列进行的多重序列比对,结果表明,两者氨基酸序列相似性很高,且... 

【文章来源】：浙江农林大学浙江省

【文章页数】：66 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

山核桃总RNA提取（M:DL2000marker;1:RNA条带）

2.2 内参β-actin 检验 cDNA(M:DL2000 marker;1: β-actinphoresis map of cDNAband for house-keeping gene β-actin.β-actin band)化酶基因中间片段获取RNA 反转录合成的 cDNA 第一条链为模板，根据比对，结合部分山核桃转录组序列设计的特异性T-PCR 扩增。扩增产物经 1.5%琼脂糖凝胶电泳检存在一清晰的泳带。该泳带的大小与预测片段大片段。PCR 产物凝胶回收后克隆到 PMD-vector1通过 GenBank 数据库 BLASTn，表明其与其他物

3 RCA 基因中间片段扩增(M:DL2000 maker;1:RCA 基因片trophoresis map of PCR amplification product of partial RCA gmaker;1:RCA band) 和 3’RACE的 RCA 序列，设计 5’RACE 所需的锚定引物，即扩的 5’RACE-Ready cDNA 为模板，以 GSP1 和 UPM按 1:100 稀释，然后以稀释的 PCR 产物为模板进行电泳检测，有2条泳带，分析其它植物RCA的大小后带。同样方法进行 3’RACE，以 3’RACE-Ready cD引物进行两次 PCR，琼脂糖凝胶电泳检测有 3 条泳的是特异条带。将两次 PCR 产物回收测序后，发现，重复试验两次，结果相同。预测可能是 RCA 家族

【参考文献】：
期刊论文
[1]用相互嫁接和定量PCR分析棉花对棉花黄萎病的抗性[J]. 郝俊杰,胡雨薇,郭晓琴,赵付安,贾新合,郭利娟,张志新,王庆东.  作物学报. 2013(07)
[2]嫁接辣椒对青枯病的抗性及其与渗透调节物质的关系[J]. 刘业霞,姜飞,张宁,王洪涛,艾希珍.  园艺学报. 2011(05)
[3]嫁接辣椒根腐病抗性及其与苯丙烷类物质代谢的关系[J]. 姜飞,刘业霞,刘伟,郑楠,王洪涛,艾希珍.  中国蔬菜. 2010(08)
[4]嫁接对蔬菜抗逆性影响的研究进展[J]. 董明伟,李晓慧.  长江蔬菜. 2009(20)
[5]高温胁迫下西瓜嫁接苗耐热性和保护酶活性的研究[J]. 刘成静,王崇启,焦自高,张志忠,王艳艳,董玉梅,肖守华.  长江蔬菜. 2009(04)
[6]不同砧木嫁接对墨茄生长及黄萎病抗性影响的研究[J]. 郑阳霞,李能芳,刘乃森,宋玉美.  长江蔬菜. 2005(06)
[7]番茄不同砧木材料幼苗对低温胁迫的反应[J]. 张娟,徐坤,孙杰.  西北农业学报. 2004(02)
[8]低温胁迫对嫁接西瓜耐冷性和活性氧清除系统的影响[J]. 刘慧英,朱祝军,吕国华.  应用生态学报. 2004(04)
[9]水稻抽穗后剑叶衰老过程中光合关键酶的基因表达[J]. 翁晓燕,蒋德安,张峰.  植物生理与分子生物学学报. 2002(04)
[10]水稻Rubisco活化酶在调节Rubisco活性和光合日变化中的作用[J]. 翁晓燕,陆庆,蒋德安.  中国水稻科学. 2001(01)

硕士论文
[1]不同砧木嫁接山核桃对高温胁迫的生理响应[D]. 康玉杰.浙江农林大学 2013



本文编号：3097893