清橄榄与普通橄榄果实差异氨基酸及其相关酶活性研究
发布时间：2021-05-06 17:32
本研究以普通橄榄’长营’与清橄榄’清榄1号’为试验材料,通过超高效液相色谱法测定其果实发育过程中氨基酸含量,并通过多元统计分析方法得出差异氨基酸,研究差异氨基酸相关酶活性,探讨它们之间的相关性。主要研究结果如下:1.探索出一种适于橄榄果实游离氨基酸含量测定的方法。通过单因素实验初筛茚三酮显色法中的条件,包括pH、显色剂含量、加热温度和加热时间,并通过稳定性、精密性、重复性和加样回收试验进行方法学验证。结果发现,茚三酮显色法的最佳反应条件为:最大吸收波长568 nm、pH 6.6磷酸缓冲液、0.5 mL茚三酮溶液、加热温度100 ℃和加热时间25 min,在30 min内OD值改变0.41%,稳定性 RSD=0.34%（n=9）、精密性 RSD=0.09%（n=9）、重复性 RSD=1.80%（n=6）,回收率达100.34%、RSD=2.21%（n=6）。表明茚三酮显色法测定橄榄果实游离氨基酸含量在此条件下稳定且精密性、重复性和回收率良好,可用于橄榄果实游离氨基酸的快速简便测定。2.优化出橄榄果实游离氨基酸的最佳提取工艺。以橄榄果实为实验材料,通过单因素试验、Plackett-Burm...
【文章来源】：福建农林大学福建省
【文章页数】：102 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
英文缩略词表
摘要
ABSTRACT
第一章 前言
1 氨基酸概述
1.1 氨基酸分类
1.2 氨基酸风味
1.3 氨基酸的作用
2 氨基酸的提取方法
2.1 游离氨基酸的提取方法
2.2 水解氨基酸的提取方法
2.2.1 酸水解
2.2.2 碱水解
2.2.3 酶解法
3 氨基酸的测定方法
3.1 分光光度计法
3.2 色谱法
3.2.1 气相色谱法
3.2.2 液相色谱法
4 植物中氨基酸的研究
4.1 橄榄中氨基酸的研究进展
4.2 其它植物中氨基酸的研究进展
5 主成分分析概述
6 本研究的目的与意义
7 研究内容
第二章 橄榄果实游离氨基酸测定方法优化
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
1.2 仪器与设备
1.3 方法
1.3.1 橄榄果实游离氨基酸溶液的提取
1.3.2 试剂配制
1.3.3 茚三酮显色法
1.3.4 橄榄果实游离氨基酸测定的单因素试验
1.3.5 亮氨酸标准品标准曲线的制作
1.3.6 茚三酮显色法橄榄果实游离氨基酸的方法学验证
1.3.7 橄榄果实游离氨基酸含量的测定与计算
1.3.8 数据处理
2 结果与分析
2.1 影响橄榄果实游离氨基酸测定的单因素试验
2.1.1 最大波长的选择
2.1.2 pH值的选择
2.1.3 显色剂用量的选择
2.1.4 加热温度的选择
2.1.5 加热时间的选择
2.2 茚三酮显色法橄榄果实游离氨基酸的方法学验证
2.2.1 稳定性试验
2.2.2 精密性试验
2.2.3 重复性试验
2.2.4 加样回收试验
3 讨论
4 结论
第三章 响应面试验优化超声法提取橄榄果实游离氨基酸工艺
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
1.2 仪器与设备
1.3 方法
1.3.1 橄榄果实游离氨基酸的制备
1.3.2 亮氨酸溶液标准曲线的绘制
1.3.3 橄榄果实游离氨基酸提取量的测定与计算
1.3.4 超声法提取橄榄果实游离氨基酸的单因素试验
1.3.5 超声法提取橄榄果实游离氨基酸的Plackett-Burman试验
1.3.6 超声法提取橄榄果实游离氨基酸的最陡爬坡试验
1.3.7 超声法提取橄榄果实游离氨基酸的响应面试验设计
1.3.8 数据处理
2 结果与分析
2.1 超声法提取橄榄果实游离氨基酸的单因素试验
2.1.1 超声温度对游离氨基酸提取量的影响
2.1.2 超声功率对游离氨基酸提取量的影响
2.1.3 超声时间对游离氨基酸提取量的影响
2.1.4 料液比对游离氨基酸提取量的影响
2.1.5 乙醇浓度对游离氨基酸提取量的影响
2.1.6 提取次数对游离氨基酸提取量的影响
2.2 超声法提取橄榄果实游离氨基酸的PB试验
2.3 超声法提取橄榄果实游离氨基酸的最陡爬坡试验
2.4 超声法提取橄榄果实游离氨基酸的响应面试验
2.4.1 Box-Behnken试验设计结果及方差分析
2.4.2 响应面分析
2.4.3 最佳工艺的确定与验证实验
3 讨论
4 结论
第四章 超高效液相色谱-串联质谱法定量分析橄榄果实氨基酸成分
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
1.2 仪器与设备
1.3 方法
1.3.1 果实若干品质的测定
1.3.2 标准样品的制备
1.3.3 橄榄果实粉末的制备
1.3.4 橄榄果实水解氨基酸样品的提取
1.3.5 橄榄果实游离氨基酸样品的提取
1.3.6 色谱条件
1.3.7 质谱条件
1.3.8 氨基酸评价指标计算方法
1.4 数据处理
2 结果与分析
2.1 橄榄果实发育过程若干品质的比较
2.1.1 单果重
2.1.2 含水率
2.1.3 纵横径、厚度和果形指数
2.2 氨基酸检测数据的线性关系、检测限和定量限
2.3 橄榄果实水解氨基酸组分与含量
2.3.1 橄榄果实各发育时期水解氨基酸含量和组成的变化
2.3.2 必需氨基酸与FAO/WHO推荐的氨基酸模式谱的比较
2.3.3 氨基酸比值系数法对橄榄果实各发育时期蛋白质营养价值的评价
2.4 橄榄果实游离氨基酸组分与含量
2.4.1 橄榄果实各发育时期游离氨基酸含量和组成
2.4.2 橄榄果实不同时期游离氨基酸RCT值
3 讨论
第五章 普通橄榄和清橄榄果实游离氨基酸差异成分及其相关酶活性研究
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
1.2 仪器与设备
1.3 方法
1.3.1 标准样品的制备
1.3.2 橄榄粉末的制备
1.3.3 橄榄果实游离氨基酸样品的提取
1.3.4 色谱条件
1.3.5 质谱条件
1.3.6 谷氨酰胺代谢相关酶活性测定
1.3.7 蔗糖、可溶性糖和还原糖含量测定
1.3.8 数据处理
2 结果与分析
2.1 橄榄果实游离氨基酸的主成分分析
2.2 橄榄果实游离氨基酸的偏最小二乘投影判别分析
2.3 普通橄榄和清橄榄果实差异氨基酸含量比较
2.4 普通橄榄和清橄榄果实谷氨酰胺及其代谢相关酶活性变化
2.4.1 谷氨酰胺代谢相关酶酶活变化
2.4.2 谷氨酰胺与其代谢相关酶活性相关性分析
2.5 普通橄榄和清橄榄果实谷氨酰胺与蔗糖、可溶性糖和还原糖含量变化
2.5.1 蔗糖、可溶性糖和还原糖含量变化
2.5.2 谷氨酰胺与蔗糖、可溶性糖和还原糖含量相关性分析
3 讨论
第六章 结论与展望
1 结论
2 展望
3 创新点
参考文献
附录A '长营'与'清榄1号'花后30 d~190 d果实
附录B 标准品谱图
硕士学习期间发表的论文
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]锦绣杜鹃花游离氨基酸的提取工艺研究[J]. 张梅. 化学工程与装备. 2016(12)
[2]响应面法对3,5-二硝基水杨酸比色法测定水果中还原糖含量条件的优化[J]. 李志霞,聂继云,闫震,李静,匡立学,沈友明. 分析测试学报. 2016(10)
[3]不同保存方法对秋石斛叶片抗寒生理指标的影响[J]. 何嘉琦,张东雪,尹俊梅,陆顺教. 黑龙江农业科学. 2016(09)
[4]萱草修复石油烃污染土壤的根际机制和根系代谢组学分析[J]. 王亚男,程立娟,周启星. 环境科学. 2016(05)
[5]植物鲜样中游离氨基酸提取方法的比较[J]. 李梅,刘金华,楼兵干,高其康. 实验室研究与探索. 2016(04)
[6]南五味子中氨基酸类成分分析评价[J]. 杨文潮,杨洁,段金廒,钱大玮,朱振华,唐志书. 中药材. 2016(02)
[7]套袋对‘库尔勒香梨’果实中游离脂肪酸和游离氨基酸含量的影响[J]. 何子顺,李芳芳,张绍铃,白茹,张虎平. 果树学报. 2016(07)
[8]山茶属3种植物花药超低温保存研究[J]. 常维霞,姚小华,龙伟. 中国油料作物学报. 2016(01)
[9]低温保存对4种作物种子ATP含量与种子活力的影响[J]. 段乃彬,李群,田茜,戴双,张文兰. 山东农业科学. 2016(02)
[10]高效液相色谱法测定桂花叶片中游离氨基酸浓度[J]. 高肖飞,肖化云,张忠义,郑能建. 地球与环境. 2016(01)
博士论文
[1]橄榄酚类化合物的分离纯化和结构研究[D]. 何志勇.江南大学 2007
硕士论文
[1]橄榄果实品质特性及其代谢组学的初步研究[D]. 池毓斌.福建农林大学 2017
[2]橄榄（Canarium album（Lour.）Raeusch）果实成熟发育蔗糖代谢变化研究[D]. 李泽坤.福建农林大学 2016
[3]植物叶片中游离氨基酸的测定及其对大气氮沉降的响应[D]. 高肖飞.南昌大学 2015
[4]山野菜发酵过程中乳酸菌群和风味物质的变化及其发酵调节技术研究[D]. 张婷.宁夏大学 2015
[5]鹿药游离氨基酸的提取及在化妆品中的应用[D]. 朱玉婷.吉林农业大学 2014
[6]橄榄（Canarium album（Lour.）Raeusch.）果实发育成熟过程多酚及相关酶活性研究[D]. 谢倩.福建农林大学 2014
[7]液相色谱及液质联用法测定三种山西特色食品中游离氨基酸[D]. 车兰兰.山西大学 2013
[8]福建橄榄（Canarium album（Lour.）Raeusch.）若干功能成分和品质相关指标的研究[D]. 林玉芳.福建农林大学 2012
[9]大肠杆菌BL21（DE3）氨基葡萄糖代谢调控关键酶的初步研究[D]. 涂宇鹏.复旦大学 2011
[10]响应面法在生物过程优化中的应用[D]. 黄新仁.湖南大学 2011
本文编号：3172338
【文章来源】：福建农林大学福建省
【文章页数】：102 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
英文缩略词表
摘要
ABSTRACT
第一章 前言
1 氨基酸概述
1.1 氨基酸分类
1.2 氨基酸风味
1.3 氨基酸的作用
2 氨基酸的提取方法
2.1 游离氨基酸的提取方法
2.2 水解氨基酸的提取方法
2.2.1 酸水解
2.2.2 碱水解
2.2.3 酶解法
3 氨基酸的测定方法
3.1 分光光度计法
3.2 色谱法
3.2.1 气相色谱法
3.2.2 液相色谱法
4 植物中氨基酸的研究
4.1 橄榄中氨基酸的研究进展
4.2 其它植物中氨基酸的研究进展
5 主成分分析概述
6 本研究的目的与意义
7 研究内容
第二章 橄榄果实游离氨基酸测定方法优化
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
1.2 仪器与设备
1.3 方法
1.3.1 橄榄果实游离氨基酸溶液的提取
1.3.2 试剂配制
1.3.3 茚三酮显色法
1.3.4 橄榄果实游离氨基酸测定的单因素试验
1.3.5 亮氨酸标准品标准曲线的制作
1.3.6 茚三酮显色法橄榄果实游离氨基酸的方法学验证
1.3.7 橄榄果实游离氨基酸含量的测定与计算
1.3.8 数据处理
2 结果与分析
2.1 影响橄榄果实游离氨基酸测定的单因素试验
2.1.1 最大波长的选择
2.1.2 pH值的选择
2.1.3 显色剂用量的选择
2.1.4 加热温度的选择
2.1.5 加热时间的选择
2.2 茚三酮显色法橄榄果实游离氨基酸的方法学验证
2.2.1 稳定性试验
2.2.2 精密性试验
2.2.3 重复性试验
2.2.4 加样回收试验
3 讨论
4 结论
第三章 响应面试验优化超声法提取橄榄果实游离氨基酸工艺
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
1.2 仪器与设备
1.3 方法
1.3.1 橄榄果实游离氨基酸的制备
1.3.2 亮氨酸溶液标准曲线的绘制
1.3.3 橄榄果实游离氨基酸提取量的测定与计算
1.3.4 超声法提取橄榄果实游离氨基酸的单因素试验
1.3.5 超声法提取橄榄果实游离氨基酸的Plackett-Burman试验
1.3.6 超声法提取橄榄果实游离氨基酸的最陡爬坡试验
1.3.7 超声法提取橄榄果实游离氨基酸的响应面试验设计
1.3.8 数据处理
2 结果与分析
2.1 超声法提取橄榄果实游离氨基酸的单因素试验
2.1.1 超声温度对游离氨基酸提取量的影响
2.1.2 超声功率对游离氨基酸提取量的影响
2.1.3 超声时间对游离氨基酸提取量的影响
2.1.4 料液比对游离氨基酸提取量的影响
2.1.5 乙醇浓度对游离氨基酸提取量的影响
2.1.6 提取次数对游离氨基酸提取量的影响
2.2 超声法提取橄榄果实游离氨基酸的PB试验
2.3 超声法提取橄榄果实游离氨基酸的最陡爬坡试验
2.4 超声法提取橄榄果实游离氨基酸的响应面试验
2.4.1 Box-Behnken试验设计结果及方差分析
2.4.2 响应面分析
2.4.3 最佳工艺的确定与验证实验
3 讨论
4 结论
第四章 超高效液相色谱-串联质谱法定量分析橄榄果实氨基酸成分
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
1.2 仪器与设备
1.3 方法
1.3.1 果实若干品质的测定
1.3.2 标准样品的制备
1.3.3 橄榄果实粉末的制备
1.3.4 橄榄果实水解氨基酸样品的提取
1.3.5 橄榄果实游离氨基酸样品的提取
1.3.6 色谱条件
1.3.7 质谱条件
1.3.8 氨基酸评价指标计算方法
1.4 数据处理
2 结果与分析
2.1 橄榄果实发育过程若干品质的比较
2.1.1 单果重
2.1.2 含水率
2.1.3 纵横径、厚度和果形指数
2.2 氨基酸检测数据的线性关系、检测限和定量限
2.3 橄榄果实水解氨基酸组分与含量
2.3.1 橄榄果实各发育时期水解氨基酸含量和组成的变化
2.3.2 必需氨基酸与FAO/WHO推荐的氨基酸模式谱的比较
2.3.3 氨基酸比值系数法对橄榄果实各发育时期蛋白质营养价值的评价
2.4 橄榄果实游离氨基酸组分与含量
2.4.1 橄榄果实各发育时期游离氨基酸含量和组成
2.4.2 橄榄果实不同时期游离氨基酸RCT值
3 讨论
第五章 普通橄榄和清橄榄果实游离氨基酸差异成分及其相关酶活性研究
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
1.2 仪器与设备
1.3 方法
1.3.1 标准样品的制备
1.3.2 橄榄粉末的制备
1.3.3 橄榄果实游离氨基酸样品的提取
1.3.4 色谱条件
1.3.5 质谱条件
1.3.6 谷氨酰胺代谢相关酶活性测定
1.3.7 蔗糖、可溶性糖和还原糖含量测定
1.3.8 数据处理
2 结果与分析
2.1 橄榄果实游离氨基酸的主成分分析
2.2 橄榄果实游离氨基酸的偏最小二乘投影判别分析
2.3 普通橄榄和清橄榄果实差异氨基酸含量比较
2.4 普通橄榄和清橄榄果实谷氨酰胺及其代谢相关酶活性变化
2.4.1 谷氨酰胺代谢相关酶酶活变化
2.4.2 谷氨酰胺与其代谢相关酶活性相关性分析
2.5 普通橄榄和清橄榄果实谷氨酰胺与蔗糖、可溶性糖和还原糖含量变化
2.5.1 蔗糖、可溶性糖和还原糖含量变化
2.5.2 谷氨酰胺与蔗糖、可溶性糖和还原糖含量相关性分析
3 讨论
第六章 结论与展望
1 结论
2 展望
3 创新点
参考文献
附录A '长营'与'清榄1号'花后30 d~190 d果实
附录B 标准品谱图
硕士学习期间发表的论文
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]锦绣杜鹃花游离氨基酸的提取工艺研究[J]. 张梅. 化学工程与装备. 2016(12)
[2]响应面法对3,5-二硝基水杨酸比色法测定水果中还原糖含量条件的优化[J]. 李志霞,聂继云,闫震,李静,匡立学,沈友明. 分析测试学报. 2016(10)
[3]不同保存方法对秋石斛叶片抗寒生理指标的影响[J]. 何嘉琦,张东雪,尹俊梅,陆顺教. 黑龙江农业科学. 2016(09)
[4]萱草修复石油烃污染土壤的根际机制和根系代谢组学分析[J]. 王亚男,程立娟,周启星. 环境科学. 2016(05)
[5]植物鲜样中游离氨基酸提取方法的比较[J]. 李梅,刘金华,楼兵干,高其康. 实验室研究与探索. 2016(04)
[6]南五味子中氨基酸类成分分析评价[J]. 杨文潮,杨洁,段金廒,钱大玮,朱振华,唐志书. 中药材. 2016(02)
[7]套袋对‘库尔勒香梨’果实中游离脂肪酸和游离氨基酸含量的影响[J]. 何子顺,李芳芳,张绍铃,白茹,张虎平. 果树学报. 2016(07)
[8]山茶属3种植物花药超低温保存研究[J]. 常维霞,姚小华,龙伟. 中国油料作物学报. 2016(01)
[9]低温保存对4种作物种子ATP含量与种子活力的影响[J]. 段乃彬,李群,田茜,戴双,张文兰. 山东农业科学. 2016(02)
[10]高效液相色谱法测定桂花叶片中游离氨基酸浓度[J]. 高肖飞,肖化云,张忠义,郑能建. 地球与环境. 2016(01)
博士论文
[1]橄榄酚类化合物的分离纯化和结构研究[D]. 何志勇.江南大学 2007
硕士论文
[1]橄榄果实品质特性及其代谢组学的初步研究[D]. 池毓斌.福建农林大学 2017
[2]橄榄（Canarium album（Lour.）Raeusch）果实成熟发育蔗糖代谢变化研究[D]. 李泽坤.福建农林大学 2016
[3]植物叶片中游离氨基酸的测定及其对大气氮沉降的响应[D]. 高肖飞.南昌大学 2015
[4]山野菜发酵过程中乳酸菌群和风味物质的变化及其发酵调节技术研究[D]. 张婷.宁夏大学 2015
[5]鹿药游离氨基酸的提取及在化妆品中的应用[D]. 朱玉婷.吉林农业大学 2014
[6]橄榄（Canarium album（Lour.）Raeusch.）果实发育成熟过程多酚及相关酶活性研究[D]. 谢倩.福建农林大学 2014
[7]液相色谱及液质联用法测定三种山西特色食品中游离氨基酸[D]. 车兰兰.山西大学 2013
[8]福建橄榄（Canarium album（Lour.）Raeusch.）若干功能成分和品质相关指标的研究[D]. 林玉芳.福建农林大学 2012
[9]大肠杆菌BL21（DE3）氨基葡萄糖代谢调控关键酶的初步研究[D]. 涂宇鹏.复旦大学 2011
[10]响应面法在生物过程优化中的应用[D]. 黄新仁.湖南大学 2011
本文编号：3172338
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