葡萄质膜质子泵VvPMA1在盐碱胁迫条件下选择性剪接及作用机制
发布时间：2021-05-15 10:14
葡萄作为重要的经济作物其产业可持续发展受到土壤盐碱化严重束缚,有关其抗盐碱性研究开始受到关注。在盐碱土中,植物面对的是盐与碱交混的混合胁迫。植物在盐碱环境中最大限度调节pH恒稳态（Homeostasis）尤为关键。而位于根细胞质膜上的质子泵对此有重要作用。本研究中,我们用抗盐碱能力较强的克瑞森无核葡萄为材料,以根质膜质子泵家族成员为目标,探讨葡萄根质膜质子泵活性及调控方式随盐碱胁迫时间的变化,并从葡萄根中克隆了1个响应盐胁迫的基因VvPMA1,测序发现VvPMA1存在两种选择性剪接变体VvPMA1α和VvPMA1β,并对其两个剪接变体在植物生长发育和盐胁迫下的功能进行了探究,主要结果如下:1.50 mmol/L NaHCO3（pH 8.0）处理克瑞森无核葡萄3 d,利用定量PCR技术比较了葡萄质膜H+-ATPase基因家族各成员在葡萄根、茎、叶、果肉、果皮中的转录量,并筛选出在根中表达量高的VvPMA1基因。2.利用RT-PCR技术从葡萄根中克隆到VvPMA1基因全长。并通过测序发现VvPMA1存在两种变体VvPMA1α和VvPMA1β。对V...
【文章来源】：齐鲁工业大学山东省
【文章页数】：74 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第1章 绪论
1.1 植物与盐胁迫
1.1.1 土壤盐渍化的现状
1.1.2 盐碱胁迫对植物的伤害
1.1.3 植物的耐盐机制
1.2 植物质膜质子泵的研究进展
1.2.1 质膜质子泵的生理功能
1.2.2 植物细胞质膜H+-ATPase的分子特性
1.2.3 环境因子对植物质膜H+-ATPase活性的调控
1.3 选择性剪接的研究进展
1.4 本研究的目的意义
第2章 葡萄VvPMA1 选择性剪接事件发现及剪接体基因特性分析
2.1 实验材料
2.1.1 植物材料
2.1.2 菌株
2.1.3 载体
2.2 实验方法
2.2.1 植物总RNA的提取
2.2.2 cDNA第一链合成
2.2.3 荧光定量PCR检测
2.2.4 PCR扩增
2.2.5 回收PCR产物
2.2.6 连接反应
2.2.7 大肠杆菌感受态的转化
2.2.8 测序
2.2.9 质粒DNA的提取(采用质粒小题试剂盒)
2.2.10 质粒DNA的酶切反应
2.2.11 酵母表达载体的构建
2.2.12 酿酒酵母醋酸锂转化方法
2.2.13 VvPMA1α和VvPMA1β的生物信息学分析
2.2.14 VvPMA1-PRI-GFP表达载体的构建
2.2.15 VvPMA1-PRI-GFP表达载体转化农杆菌及瞬时表达烟草
2.3 结果与分析
2.3.1 碱性盐胁迫下葡萄根VvPMA1表达量分析
2.3.2 葡萄VvPMA1基因克隆和序列分析
2.3.3 VvPMA1基因在盐胁迫下选择性剪接事件的验证
2.3.4 VvPMA1基因启动子序列分析
2.3.5 葡萄根质膜VvPMA1选择性剪接体的转录量随盐碱胁迫时间的变化情况
2.3.6 葡萄根质膜VvPMA1蛋白定位分析
2.3.7 葡萄根质膜VvPMA1剪接变体VvPMA1α及VvPMA1β基因功能的初步分析
2.4 讨论
第3章 葡萄VvPMA1选择性剪接变体VvPMA1α和VvPMA1β转基因株系抗盐碱性分析
3.1 实验材料与方法
3.1.1 植物材料与培养
3.1.2 野生型拟南芥的侵染
3.1.3 野生型番茄的侵染
3.1.4 拟南芥过量表达阳性株系的筛选及鉴定
3.1.5 转基因番茄T0 代植株筛选与鉴定
3.1.6 番茄总DNA的提取
3.1.7 转基因番茄过量表达株系Real-time PCR检测
3.1.8 转基因植株表型观察
3.1.9 VvPMA1α转基因番茄T1 代植株盐胁迫处理
3.1.10 VvPMA1α转基因番茄耐盐性生理指标测定
3.2 结果与分析
3.2.1 过量表达拟南芥卡那霉素筛选及转录水平验证
3.2.2 转基因番茄阳性苗的筛选鉴定
3.2.3 VvPMA1β转基因拟南芥T0 代植株表型分析
3.2.4 VvPMA1α和VvPMA1β转基因番茄T0 代植株表型分析
3.2.5 VvPMA1α转基因番茄T1 代植株表型分析
3.2.6 VvPMA1α转基因番茄PMA表达量分析及根质子分泌实验的鉴定
3.2.7 VvPMA1α转基因番茄植株抗盐性分析
3.3 讨论
第4章 结论
参考文献
致谢
在学期间主要科研成果
【参考文献】：
期刊论文
[1]盐碱胁迫对酿酒葡萄“赤霞珠”果实品质形成的影响[J]. 赵攀,李芬,韩伟伟,何熹,赵新节,韩宁. 北方园艺. 2019(02)
[2]NaCl胁迫对耐盐性不同葡萄株系叶片活性氧代谢及清除系统的影响[J]. 付晴晴,谭雅中,翟衡,杜远鹏. 园艺学报. 2018(01)
[3]Effects of Salt Stress on the Contents of Proline in Different Varieties of Lonicera japonica Thunb.[J]. BAO Ya-jing*, JI Jing, WANG Di, SUN Li College of Life Science, Dalian Nationalities University, Dalian, Liaoning 116600, China. Medicinal Plant. 2011(02)
[4]根际pH对水稻细胞膜质子泵基因表达的影响[J]. 沈静,朱毅勇,徐国华. 中国水稻科学. 2009(04)
[5]植物细胞质膜H+-ATPase的调控[J]. 贾毅,王伯初,王秀娟,段传人,阳小成. 植物生理学通讯. 2002(01)
[6]植物细胞质膜H+-ATPase的结构与功能[J]. 邱全胜. 植物学通报. 1999(02)
博士论文
[1]盐地碱蓬膜相关蛋白及其在耐盐中的作用[D]. 陈敏.山东师范大学 2009
本文编号：3187456
【文章来源】：齐鲁工业大学山东省
【文章页数】：74 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第1章 绪论
1.1 植物与盐胁迫
1.1.1 土壤盐渍化的现状
1.1.2 盐碱胁迫对植物的伤害
1.1.3 植物的耐盐机制
1.2 植物质膜质子泵的研究进展
1.2.1 质膜质子泵的生理功能
1.2.2 植物细胞质膜H+-ATPase的分子特性
1.2.3 环境因子对植物质膜H+-ATPase活性的调控
1.3 选择性剪接的研究进展
1.4 本研究的目的意义
第2章 葡萄VvPMA1 选择性剪接事件发现及剪接体基因特性分析
2.1 实验材料
2.1.1 植物材料
2.1.2 菌株
2.1.3 载体
2.2 实验方法
2.2.1 植物总RNA的提取
2.2.2 cDNA第一链合成
2.2.3 荧光定量PCR检测
2.2.4 PCR扩增
2.2.5 回收PCR产物
2.2.6 连接反应
2.2.7 大肠杆菌感受态的转化
2.2.8 测序
2.2.9 质粒DNA的提取(采用质粒小题试剂盒)
2.2.10 质粒DNA的酶切反应
2.2.11 酵母表达载体的构建
2.2.12 酿酒酵母醋酸锂转化方法
2.2.13 VvPMA1α和VvPMA1β的生物信息学分析
2.2.14 VvPMA1-PRI-GFP表达载体的构建
2.2.15 VvPMA1-PRI-GFP表达载体转化农杆菌及瞬时表达烟草
2.3 结果与分析
2.3.1 碱性盐胁迫下葡萄根VvPMA1表达量分析
2.3.2 葡萄VvPMA1基因克隆和序列分析
2.3.3 VvPMA1基因在盐胁迫下选择性剪接事件的验证
2.3.4 VvPMA1基因启动子序列分析
2.3.5 葡萄根质膜VvPMA1选择性剪接体的转录量随盐碱胁迫时间的变化情况
2.3.6 葡萄根质膜VvPMA1蛋白定位分析
2.3.7 葡萄根质膜VvPMA1剪接变体VvPMA1α及VvPMA1β基因功能的初步分析
2.4 讨论
第3章 葡萄VvPMA1选择性剪接变体VvPMA1α和VvPMA1β转基因株系抗盐碱性分析
3.1 实验材料与方法
3.1.1 植物材料与培养
3.1.2 野生型拟南芥的侵染
3.1.3 野生型番茄的侵染
3.1.4 拟南芥过量表达阳性株系的筛选及鉴定
3.1.5 转基因番茄T0 代植株筛选与鉴定
3.1.6 番茄总DNA的提取
3.1.7 转基因番茄过量表达株系Real-time PCR检测
3.1.8 转基因植株表型观察
3.1.9 VvPMA1α转基因番茄T1 代植株盐胁迫处理
3.1.10 VvPMA1α转基因番茄耐盐性生理指标测定
3.2 结果与分析
3.2.1 过量表达拟南芥卡那霉素筛选及转录水平验证
3.2.2 转基因番茄阳性苗的筛选鉴定
3.2.3 VvPMA1β转基因拟南芥T0 代植株表型分析
3.2.4 VvPMA1α和VvPMA1β转基因番茄T0 代植株表型分析
3.2.5 VvPMA1α转基因番茄T1 代植株表型分析
3.2.6 VvPMA1α转基因番茄PMA表达量分析及根质子分泌实验的鉴定
3.2.7 VvPMA1α转基因番茄植株抗盐性分析
3.3 讨论
第4章 结论
参考文献
致谢
在学期间主要科研成果
【参考文献】：
期刊论文
[1]盐碱胁迫对酿酒葡萄“赤霞珠”果实品质形成的影响[J]. 赵攀,李芬,韩伟伟,何熹,赵新节,韩宁. 北方园艺. 2019(02)
[2]NaCl胁迫对耐盐性不同葡萄株系叶片活性氧代谢及清除系统的影响[J]. 付晴晴,谭雅中,翟衡,杜远鹏. 园艺学报. 2018(01)
[3]Effects of Salt Stress on the Contents of Proline in Different Varieties of Lonicera japonica Thunb.[J]. BAO Ya-jing*, JI Jing, WANG Di, SUN Li College of Life Science, Dalian Nationalities University, Dalian, Liaoning 116600, China. Medicinal Plant. 2011(02)
[4]根际pH对水稻细胞膜质子泵基因表达的影响[J]. 沈静,朱毅勇,徐国华. 中国水稻科学. 2009(04)
[5]植物细胞质膜H+-ATPase的调控[J]. 贾毅,王伯初,王秀娟,段传人,阳小成. 植物生理学通讯. 2002(01)
[6]植物细胞质膜H+-ATPase的结构与功能[J]. 邱全胜. 植物学通报. 1999(02)
博士论文
[1]盐地碱蓬膜相关蛋白及其在耐盐中的作用[D]. 陈敏.山东师范大学 2009
本文编号：3187456
本文链接：https://www.wllwen.com/nykjlw/yylw/3187456.html
