基于漆酶活性测量的香菇育种早期筛选技术研究

发布时间：2021-05-15 04:29

　　香菇（Lentinula edodes（Berk.）Pegle）口感鲜美,肉质细嫩,含有丰富的营养物质,是一种食药同源的食物。最近十年间,我国香菇的产量增加了70%,在食用菌总产量中的占比也从17%上升到26%。在我国使用过的香菇栽培品种中,一半来源于国外引进。单孢杂交是香菇品种产生的主要方法,约有60%的栽培品种通过该方法选育获得,然而香菇杂交育种中存在的最大障碍是杂交群体中可正常结实的菌株比例较低。在菌种培养以及出菇阶段都有许多菌株被剔除掉,具有出菇能力的仅占40%。综合考虑其他农艺性状后,优异菌株的比例不足1%。目前香菇育种中后代筛选方法主要还是通过2-3轮的栽培出菇试验进行农艺性状观察并筛选出优良个体。本研究的目的就是通过检测菌株在实验室阶段的早期生理生化或分子生物学特性,获得一种对育种群体中可结实菌株或优良菌株的的早期筛选技术。漆酶是木质素降解酶系中的主体酶,广泛分布于植物、微生物及食用菌中。在香菇的菌丝、菌皮、转色、原基、幼小子实体和成熟子实体阶段都检测到了漆酶活性,并且同一菌株在不同生长、发育阶段的酶活高低不同,不同类型的菌株（如广温种、低温种）之间也存在很大的差异。因此... 

【文章来源】：上海海洋大学上海市

【文章页数】：71 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 引言
    1 香菇
        1.1 香菇概述
        1.2 与香菇生长发育相关基因的研究进展
        1.3 RNA-Seq技术在香菇中的应用
    2 漆酶
        2.1 真菌漆酶的催化反应机制
        2.2 真菌漆酶诱导机制的研究
        2.3 漆酶在食用菌中的作用
        2.4 香菇漆酶的研究进展
    3 漆酶酶活的分析方法
        3.1 定性分析方法
        3.2 定量分析方法
    4 育种技术
        4.1 人工选择育种
        4.2 杂交育种
        4.3 诱变育种
        4.4 原生质体融合育种
    5 课题目的意义及研究内容
        5.1 课题的目的意义
        5.2 研究内容
第二章 材料与方法
    1 供试菌株
    2 主要试剂
        2.1 酶活检测中常用试剂
    3 实验所需培养基
        3.1 菌丝预培养培养基
        3.2 酶活检测培养基的配置
    4 主要仪器
    5 实验方法
        5.1 不同培养基上的菌株预培养
        5.2 木屑培养基中粗酶液提取
        5.3 酶活检测方法的建立
        5.4 最佳扩散反应时间的确定
        5.5 不同培养基上的菌株漆酶活性动态检测
        5.6 菌株生长速度、漆酶酶活、结实能力的相关性分析
        5.7 验证实验
        5.8 转录组测序及基因表达分析
        5.9 原生质体单核体制备新方法的建立
        5.10 平板接种点数对原生质体制备的影响
第三章 结果分析
    1 最佳扩散反应时间的确定
    2 无诱导PDA培养基上的漆酶酶活分析
    3 诱导PDA(PDA-VC)上的漆酶酶活分析
    4 木屑培养基上的漆酶酶活分析
    5 供试菌株的漆酶酶活和结实能力及出菇性状的相关性分析
    6 验证群体的漆酶酶活和结实能力及生长速率的相关性分析
    7 转录组测序组装结果及分析
    8 差异表达基因统计分析及GO分析
        8.1 差异表达基因统计
        8.2 差异表达基因的GO富集分析
    9 14个漆酶同工酶基因在木屑培养料和PDA培养基中表达水平的分析
    10 不同酶活及结实能力中的相关候选基因表达水平分析
    11 相同结实能力不同酶活的漆酶基因的转录表达分析
    12 相同酶活不同结实能力的漆酶基因的转录表达分析
    13 接种点数对原生质体得率的影响
第四章 结论与讨论
    1 新建酶活检测方法的分析讨论
    2 香菇漆酶酶活在不同培养基上的分析讨论
    3 香菇漆酶酶活和菌株结实能力及出菇性状相关性的分析讨论
    4 香菇菌丝生长速率和漆酶酶活和结实能力的分析讨论
    5 香菇的转录组学测序分析讨论
    6 原生质体制备方法分析讨论
第五章 总结与展望
参考文献
附录
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]影响真菌漆酶表达调控因素的研究进展[J]. 王晶晶,李为,胡美.  合肥师范学院学报. 2018(03)
[2]高产漆酶白腐真菌的筛选[J]. 王玉俊,樊忠慧,王长宝,岳丽红.  湖北农业科学. 2017(21)
[3]香菇主要育种技术研究进展[J]. 赵妍,林锋,宋春艳,谭琦,尚晓冬,陈明杰.  生物学杂志. 2015(02)
[4]漆酶的结构与催化反应机理[J]. 靳蓉,张飞龙.  中国生漆. 2012(04)
[5]原生质体融合技术选育香菇菌株[J]. 邢振楠,臧海莲,李滇华,郭兴.  食用菌. 2012(04)
[6]香菇杂交新品种“申香16号”的选育及示范推广[J]. 宋春艳,刘德云,尚晓冬,谭琦,项寿南.  食用菌学报. 2010(04)
[7]真菌漆酶的酶活测定方法评价[J]. 林俊芳,刘志明,陈晓阳,郭丽琼,王杰.  生物加工过程. 2009(04)
[8]漆酶结构与催化机理[J]. 万云洋,杜予民.  化学通报. 2007(09)
[9]白腐真菌的木质素降解酶[J]. 陈素华.  生物学通报. 2005(08)
[10]几种食用菌产木质素降解酶类研究[J]. 宋安东,吕洋,尤晓颜,陈刚,裴红波,汤建华.  中国食用菌. 2005(02)

博士论文
[1]真菌漆酶高产菌株的发酵产酶及酶促降解有机染料的动力学研究[D]. 傅恺.华南理工大学 2013
[2]香菇分子遗传图谱构建和数量性状座位（QTL）分析[D]. 林范学.华中农业大学 2008

硕士论文
[1]白腐真菌漆酶诱导表达的机制研究[D]. 刘丽.西南大学 2015
[2]香菇杂交子生物学特性和基因差异表达类型的初步研究[D]. 王翔.华中农业大学 2012
[3]几株食用菌对秸秆木质纤维素降解能力的研究[D]. 孙江慧.南京农业大学 2012
[4]香菇子实体发育相关基因的克隆及分析[D]. 李海峰.华中农业大学 2010
[5]漆酶高产菌株选育及其降解秸秆木质素机理研究[D]. 李春凤.安徽农业大学 2009
[6]香菇漆酶优化培养[D]. 王鼎.武汉工程大学 2009
[7]野生香菇种质资源的评价及特异种质发掘[D]. 王春莹.福建农林大学 2009
[8]真菌漆酶高产菌株的筛选、发酵及其酶学性质研究[D]. 王剑锋.西北大学 2006



本文编号：3186952