梨休眠相关DAM基因的鉴定及功能分析
发布时间：2021-05-21 19:15
MADS-box转录因子家族是植物中研究最为深入的基因家族之一,在植物的成花诱导、花器官发育、休眠及果实发育等生物学过程中发挥着极其重要的作用。DAM基因属于MADS-box基因家族,与拟南芥中的SVP/AGL24类MADS-box基因同源。目前,DAM基因对果树芽休眠的调控机制已有一些研究,在不同的多年生温带果树如桃、梨、苹果、梅和猕猴桃中进行了克隆分离并进行表达分析及功能鉴定。虽然前人已经通过同源克隆的方法获得3个梨DAM基因,但是,对其的研究主要集中在表达模式分析方面,缺乏功能验证,因此有必要对梨DAM基因展开更全面的研究。本研究通过系统进化分析和共线性分析获得了 5个梨DAM基因,并对其进行了表达分析、互作分析及功能验证等。主要结果如下:1、梨MADS-box基因家族的鉴定在’砀山酥梨’基因组中共鉴定了 100个MADS-box基因家族成员,通过系统进化分析可将其分为17个进化枝。共线性分析表明梨在30-45百万年前经历的全基因组复制事件促进了 MADS-box基因家族成员的扩张。不同的MADS-box基因在梨果实发育和梨芽休眠过程中的表达模式差异较大,扮演着不同的角色。2、梨...
【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：93 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
致谢
摘要
Abstract
缩略语表
1 绪论
1.1 多年生树木芽休眠研究进展
1.1.1 碳水化合物代谢
1.1.2 激素代谢
1.1.3 环境响应相关基因
1.1.4 表观遗传调控
1.2 Dormancy-associated MADS-box(DAM)与SVP同源基因的研究进展
1.2.1 DAM同源基因在李属植物中的研究进展
1.2.2 DAM与SVP同源基因在苹果族植物中的研究进展
1.2.3 DAM与SVP同源基因在非蔷薇科植物中的研究进展
1.3 可变剪接的分子机制
1.4 立题依据及研究内容
2 梨MADS-box基因家族分析
2.1 材料与方法
2.1.1 梨MADS-box基因家族鉴定及染色体定位
2.1.2 梨MADS-box基因家族系统进化分析
2.1.3 共线性分析
2.1.4 转录组分析
2.2 结果与分析
2.2.1 梨MADS-box基因的鉴定、染色体定位及共线性分析
2.2.2 梨MADS-box基因家族系统进化分析
2.2.3 梨MADS-box基因家族的时空表达分析
2.2.3.1 梨MADS-box基因家族在果实发育过程中的表达分析
2.2.3.2 梨MADS-box基因在休眠过程中的表达分析
2.3 讨论
3 梨DAM基因的克隆及分析
3.1 材料与方法
3.1.1 试验材料
3.1.2 试验方法
3.1.2.1 桃、梨基因组共线性分析
3.1.2.2 RNA提取
3.1.2.3 逆转录
3.1.2.4 DAM基因的克隆及分析
3.1.2.5 实时荧光定量PCR
3.1.2.6 酵母双杂交实验(Y2H)
3.1.2.7 双分子荧光互补实验(BiFC)
3.2 结果
3.2.1 梨DAM基因的鉴定
3.2.2 梨DAM基因的克隆及序列分析
3.2.3 梨DAM基因的蛋白互作分析
3.2.4 梨DAM基因的时空表达分析
3.2.4.1 梨DAM基因在梨芽休眠进程的表达分析
3.2.4.2 梨DAM基因在梨开花过程的表达分析
3.3 讨论
4 梨DAM基因的功能验证
4.1 材料与方法
4.1.1 试验材料
4.1.2 试验方法
4.1.2.1 载体构建
4.1.2.2 拟南芥遗传转化
4.1.2.3 拟南芥种子的筛选
4.1.2.4 DNA提取及PCR检测
4.1.2.5 RNA提取,逆转录及qRT-PCR
4.1.2.6 种子萌发实验及ABA处理的种子萌发实验
4.2 结果
4.2.1 获得阳性转基因拟南芥
4.2.2 DAM基因对拟南芥生长发育的影响
4.2.3 转基因拟南芥种子萌发实验
4.3 讨论
5 梨DAM基因可变剪接的初步研究
5.1 材料与方法
5.1.1 试验材料
5.1.2 试验方法
5.1.2.1 DAM基因可变剪接的克隆及序列分析
5.1.2.2 RNA提取、逆转录及实时荧光定量PCR实验
5.1.2.3 酵母双杂实验及双分子荧光互补实验
5.1.2.4 拟南芥转基因及检测
5.2 结果
5.2.1 PpyMADS31基因可变剪接的研究
5.2.1.1 PpyMADS31基因的克隆及序列分析
5.2.1.2 PpyMADS31剪接异构体的表达分析
5.2.1.3 PpyMADS31剪接异构体的蛋白互作
5.2.1.4 PpyMADS31剪接异构体的功能验证
5.2.2 PpyMADS71基因可变剪接的研究
5.2.2.1 PpyMADS71基因的克隆及序列分析
5.2.2.2 PpyMADS71剪接异构体的蛋白互作
5.2.2.3 PpyMADS71剪接异构体的功能验证
5.3 讨论
6 小结与展望
参考文献
作者简历
【参考文献】：
期刊论文
[1]梨属植物分类的历史回顾及新进展[J]. 滕元文,柴明良,李秀根. 果树学报. 2004(03)
[2]木本植物休眠的诱导因子及其细胞内Ca2+水平的调节作用[J]. 简令成,卢存福,邓江明,李积宏,LIPaul H. 应用与环境生物学报. 2004(01)
[3]影响落叶果树芽休眠的因素[J]. 李宪利,袁志友,高东升. 山东农业大学学报(自然科学版). 2001(03)
博士论文
[1]梨花芽休眠转换的分子网络及调控机制[D]. 牛庆丰.浙江大学 2016
[2]梨休眠分子生理机制研究[D]. 刘国琴.浙江大学 2013
[3]七月酥梨休眠期内含物变化及生理代谢研究[D]. 毕磊.河北农业大学 2009
硕士论文
[1]砂梨休眠期花芽碳水化合物代谢及相关基因表达研究[D]. 郑鹏华.浙江大学 2013
本文编号：3200233
【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：93 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
致谢
摘要
Abstract
缩略语表
1 绪论
1.1 多年生树木芽休眠研究进展
1.1.1 碳水化合物代谢
1.1.2 激素代谢
1.1.3 环境响应相关基因
1.1.4 表观遗传调控
1.2 Dormancy-associated MADS-box(DAM)与SVP同源基因的研究进展
1.2.1 DAM同源基因在李属植物中的研究进展
1.2.2 DAM与SVP同源基因在苹果族植物中的研究进展
1.2.3 DAM与SVP同源基因在非蔷薇科植物中的研究进展
1.3 可变剪接的分子机制
1.4 立题依据及研究内容
2 梨MADS-box基因家族分析
2.1 材料与方法
2.1.1 梨MADS-box基因家族鉴定及染色体定位
2.1.2 梨MADS-box基因家族系统进化分析
2.1.3 共线性分析
2.1.4 转录组分析
2.2 结果与分析
2.2.1 梨MADS-box基因的鉴定、染色体定位及共线性分析
2.2.2 梨MADS-box基因家族系统进化分析
2.2.3 梨MADS-box基因家族的时空表达分析
2.2.3.1 梨MADS-box基因家族在果实发育过程中的表达分析
2.2.3.2 梨MADS-box基因在休眠过程中的表达分析
2.3 讨论
3 梨DAM基因的克隆及分析
3.1 材料与方法
3.1.1 试验材料
3.1.2 试验方法
3.1.2.1 桃、梨基因组共线性分析
3.1.2.2 RNA提取
3.1.2.3 逆转录
3.1.2.4 DAM基因的克隆及分析
3.1.2.5 实时荧光定量PCR
3.1.2.6 酵母双杂交实验(Y2H)
3.1.2.7 双分子荧光互补实验(BiFC)
3.2 结果
3.2.1 梨DAM基因的鉴定
3.2.2 梨DAM基因的克隆及序列分析
3.2.3 梨DAM基因的蛋白互作分析
3.2.4 梨DAM基因的时空表达分析
3.2.4.1 梨DAM基因在梨芽休眠进程的表达分析
3.2.4.2 梨DAM基因在梨开花过程的表达分析
3.3 讨论
4 梨DAM基因的功能验证
4.1 材料与方法
4.1.1 试验材料
4.1.2 试验方法
4.1.2.1 载体构建
4.1.2.2 拟南芥遗传转化
4.1.2.3 拟南芥种子的筛选
4.1.2.4 DNA提取及PCR检测
4.1.2.5 RNA提取,逆转录及qRT-PCR
4.1.2.6 种子萌发实验及ABA处理的种子萌发实验
4.2 结果
4.2.1 获得阳性转基因拟南芥
4.2.2 DAM基因对拟南芥生长发育的影响
4.2.3 转基因拟南芥种子萌发实验
4.3 讨论
5 梨DAM基因可变剪接的初步研究
5.1 材料与方法
5.1.1 试验材料
5.1.2 试验方法
5.1.2.1 DAM基因可变剪接的克隆及序列分析
5.1.2.2 RNA提取、逆转录及实时荧光定量PCR实验
5.1.2.3 酵母双杂实验及双分子荧光互补实验
5.1.2.4 拟南芥转基因及检测
5.2 结果
5.2.1 PpyMADS31基因可变剪接的研究
5.2.1.1 PpyMADS31基因的克隆及序列分析
5.2.1.2 PpyMADS31剪接异构体的表达分析
5.2.1.3 PpyMADS31剪接异构体的蛋白互作
5.2.1.4 PpyMADS31剪接异构体的功能验证
5.2.2 PpyMADS71基因可变剪接的研究
5.2.2.1 PpyMADS71基因的克隆及序列分析
5.2.2.2 PpyMADS71剪接异构体的蛋白互作
5.2.2.3 PpyMADS71剪接异构体的功能验证
5.3 讨论
6 小结与展望
参考文献
作者简历
【参考文献】：
期刊论文
[1]梨属植物分类的历史回顾及新进展[J]. 滕元文,柴明良,李秀根. 果树学报. 2004(03)
[2]木本植物休眠的诱导因子及其细胞内Ca2+水平的调节作用[J]. 简令成,卢存福,邓江明,李积宏,LIPaul H. 应用与环境生物学报. 2004(01)
[3]影响落叶果树芽休眠的因素[J]. 李宪利,袁志友,高东升. 山东农业大学学报(自然科学版). 2001(03)
博士论文
[1]梨花芽休眠转换的分子网络及调控机制[D]. 牛庆丰.浙江大学 2016
[2]梨休眠分子生理机制研究[D]. 刘国琴.浙江大学 2013
[3]七月酥梨休眠期内含物变化及生理代谢研究[D]. 毕磊.河北农业大学 2009
硕士论文
[1]砂梨休眠期花芽碳水化合物代谢及相关基因表达研究[D]. 郑鹏华.浙江大学 2013
本文编号：3200233
本文链接：https://www.wllwen.com/nykjlw/yylw/3200233.html
