苹果不定根发生相关加氧酶基因ARRO-1功能探究
发布时间：2021-05-27 11:07
苹果的主要繁殖方式是嫁接,矮化密植由于具有成形快、早果性强、单位面积产量高、树冠小、方便管理、适合机械化作业等优点而逐渐成为苹果产业的主流发展模式。因此,人们对于砧木的选择也发生了一系列变化,最先采用的是实生砧木,其根系发达,固地性和适应性好,但无矮化效果;随之是矮化中间砧,其具有一定的矮化效果,但中间砧苗木繁育需要两次嫁接,程序繁琐;为了简化育苗程序,将矮化砧木直接再生不定根用作矮化自根砧,其矮化效果较好,但矮化砧木不定根的形成困难,并且其根系浅,根系不发达,固地性差。因此,它们对风等自然灾害的抵抗力较弱。倘若能解决矮化自根砧生根困难的问题,这将会带来巨大的经济效益。文献报道不定根发生相关加氧酶基因ARRO-1在不定根诱导阶段上调表达,推测其与木本植物不定根的形成相关,但ARRO-1蛋白的生化功能未知。因此,研究ARRO-1基因的功能对于揭示木本植物不定根形成的分子机制具有重要的意义。本研究主要获得了以下结果:（1）通过对ARRO-1和其在拟南芥中的同系物基因DAO1、DAO2的生物信息学分析,发现ARRO-1、DAO1和DAO2的cDNA序列相似性为78.72%,ARRO-1、DA...
【文章来源】：西北大学陕西省 211工程院校
【文章页数】：86 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
1.1 苹果栽培模式的演变
1.1.1 苹果的起源、功效与苹果产业发展现状
1.1.2 苹果砧木品种
1.2 植物不定根形成的分子机制
1.2.1 生长素与不定根形成
1.2.2 生长素稳态的调节影响AR形成
1.2.3 不定根发生的基因调控
1.3 本研究的目的意义
第二章 ARRO-1的系统进化树和多重氨基酸序列比对分析
2.1 实验方法
2.2 实验内容
2.2.1 ARRO-1的系统进化树分析
2.2.2 ARRO-1、DAO1和DAO2 的多重氨基酸序列比对分析
2.3 结果与分析
2.3.1 ARRO-1的系统进化树分析
2.3.2 ARRO-1、DAO1和DAO2 的多重氨基酸序列比对分析
2.4 讨论
第三章 ARRO-1与DAO1 的亚细胞定位
3.1 实验材料
3.1.1 植物材料
3.1.2 菌株和质粒
3.1.3 主要实验试剂
3.1.4 主要实验仪器
3.2 实验方法
3.2.1 蛋白的跨膜结构预测
3.2.2 载体的构建
3.2.3 根癌农杆菌GV3101感受态细胞的制备
3.2.4质粒DNA转化根癌农杆菌GV3101
3.2.5 烟草的瞬时表达
3.3 结果与分析
3.3.1 ARRO-1和DAO1 的跨膜结构预测
3.3.2 35S::GFP-p LM-B001 载体的构建
3.3.3 GFP连在ARRO-1和DAO1 C端载体的构建
3.3.4 GFP连在ARRO-1和DAO1 N端载体的构建
3.3.5 ARRO-1和DAO1 的亚细胞定位
3.4 讨论
第四章 ARRO-1启动子功能分析
4.1 实验材料
4.1.1 植物材料
4.1.2 质粒及菌株
4.1.3 主要实验试剂
4.1.4 主要实验仪器
4.2 实验方法
4.2.1 农杆菌浸花法侵染拟南芥
4.2.2 1/2MS平板上种子的种植方法
4.2.3 植物基因组DNA的提取
4.2.4 转基因植物的组织化学染色
4.3 结果与分析
4.3.1 转基因植株的获得
4.3.2 ARRO-1组织表达特性研究
4.4 讨论
第五章 拟南芥转基因植株的获得及分析
5.1 实验材料
5.1.1 植物材料及种植方法
5.1.2 菌株和质粒
5.1.3 主要实验试剂
5.1.4 主要实验仪器
5.2 实验方法
5.2.1 ARRO-1抗体的制备
5.2.2 抗体血清的纯化
5.2.3 载体的构建
5.2.4 农杆菌浸花法侵染拟南芥
5.2.5 植物基因组DNA的提取
5.2.6 植物蛋白水平的鉴定
5.2.7 植物总RNA的提取
5.2.8 RT-PCR制备c DNA
5.3 结果与分析
5.3.1 ARRO-1抗体的制备
5.3.2 植物双元表达载体的构建结果
5.3.3 过表达株系的获得及分析
5.3.4 互补株系的获得及分析
5.3.5 转基因植物的表型分析
5.4 讨论
结论
参考文献
附录1 英文缩写与全称对照
附录2 主要溶液配方
攻读硕士学位期间取得的科研成果
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]黄土高原丘陵沟壑区坡面果园的土壤水分特征分析[J]. 王健,吴发启,孟秦倩. 西北林学院学报. 2006(05)
博士论文
[1]中国苹果矮化密植集约栽培模式技术经济评价研究[D]. 邵砾群.西北农林科技大学 2015
硕士论文
[1]拟南芥bHLH转录因子QQ1和QQ2功能的研究[D]. 陈永欢.西北大学 2018
[2]叶绿体PSⅡ中D1前体蛋白C-末端尾巴功能分析[D]. 王军.西北大学 2017
[3]拟南芥CTP蛋白酶家族功能机制研究[D]. 常伟东.西北大学 2016
本文编号：3207454
【文章来源】：西北大学陕西省 211工程院校
【文章页数】：86 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
1.1 苹果栽培模式的演变
1.1.1 苹果的起源、功效与苹果产业发展现状
1.1.2 苹果砧木品种
1.2 植物不定根形成的分子机制
1.2.1 生长素与不定根形成
1.2.2 生长素稳态的调节影响AR形成
1.2.3 不定根发生的基因调控
1.3 本研究的目的意义
第二章 ARRO-1的系统进化树和多重氨基酸序列比对分析
2.1 实验方法
2.2 实验内容
2.2.1 ARRO-1的系统进化树分析
2.2.2 ARRO-1、DAO1和DAO2 的多重氨基酸序列比对分析
2.3 结果与分析
2.3.1 ARRO-1的系统进化树分析
2.3.2 ARRO-1、DAO1和DAO2 的多重氨基酸序列比对分析
2.4 讨论
第三章 ARRO-1与DAO1 的亚细胞定位
3.1 实验材料
3.1.1 植物材料
3.1.2 菌株和质粒
3.1.3 主要实验试剂
3.1.4 主要实验仪器
3.2 实验方法
3.2.1 蛋白的跨膜结构预测
3.2.2 载体的构建
3.2.3 根癌农杆菌GV3101感受态细胞的制备
3.2.4质粒DNA转化根癌农杆菌GV3101
3.2.5 烟草的瞬时表达
3.3 结果与分析
3.3.1 ARRO-1和DAO1 的跨膜结构预测
3.3.2 35S::GFP-p LM-B001 载体的构建
3.3.3 GFP连在ARRO-1和DAO1 C端载体的构建
3.3.4 GFP连在ARRO-1和DAO1 N端载体的构建
3.3.5 ARRO-1和DAO1 的亚细胞定位
3.4 讨论
第四章 ARRO-1启动子功能分析
4.1 实验材料
4.1.1 植物材料
4.1.2 质粒及菌株
4.1.3 主要实验试剂
4.1.4 主要实验仪器
4.2 实验方法
4.2.1 农杆菌浸花法侵染拟南芥
4.2.2 1/2MS平板上种子的种植方法
4.2.3 植物基因组DNA的提取
4.2.4 转基因植物的组织化学染色
4.3 结果与分析
4.3.1 转基因植株的获得
4.3.2 ARRO-1组织表达特性研究
4.4 讨论
第五章 拟南芥转基因植株的获得及分析
5.1 实验材料
5.1.1 植物材料及种植方法
5.1.2 菌株和质粒
5.1.3 主要实验试剂
5.1.4 主要实验仪器
5.2 实验方法
5.2.1 ARRO-1抗体的制备
5.2.2 抗体血清的纯化
5.2.3 载体的构建
5.2.4 农杆菌浸花法侵染拟南芥
5.2.5 植物基因组DNA的提取
5.2.6 植物蛋白水平的鉴定
5.2.7 植物总RNA的提取
5.2.8 RT-PCR制备c DNA
5.3 结果与分析
5.3.1 ARRO-1抗体的制备
5.3.2 植物双元表达载体的构建结果
5.3.3 过表达株系的获得及分析
5.3.4 互补株系的获得及分析
5.3.5 转基因植物的表型分析
5.4 讨论
结论
参考文献
附录1 英文缩写与全称对照
附录2 主要溶液配方
攻读硕士学位期间取得的科研成果
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]黄土高原丘陵沟壑区坡面果园的土壤水分特征分析[J]. 王健,吴发启,孟秦倩. 西北林学院学报. 2006(05)
博士论文
[1]中国苹果矮化密植集约栽培模式技术经济评价研究[D]. 邵砾群.西北农林科技大学 2015
硕士论文
[1]拟南芥bHLH转录因子QQ1和QQ2功能的研究[D]. 陈永欢.西北大学 2018
[2]叶绿体PSⅡ中D1前体蛋白C-末端尾巴功能分析[D]. 王军.西北大学 2017
[3]拟南芥CTP蛋白酶家族功能机制研究[D]. 常伟东.西北大学 2016
本文编号：3207454
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