柑橘NAC036互作蛋白的筛选与验证
发布时间：2021-06-02 18:49
我国作为柑橘的重要原产地,拥有数目繁多、品质优良的地方特色品种。―青瓯柑‖是2000年在浙江温州市瓯海区发现的普通瓯柑的芽变,因成熟时果皮仍为绿色而得名,是一个典型的成熟衰老延缓型突变材料。―青瓯柑‖的出现,为我们研究柑橘果实的成熟和衰老提供了珍贵的实验材料。NAC（NAM、ATAF1/2、CUC1/2）转录因子家族不仅成员众多,而且广泛存在于陆生植物中,参与调控植物生命活动中的许多生物学过程。本实验以青瓯柑为材料,克隆NAC转录因子家族成员NAC036,运用酵母双杂交系统及双分子荧光互补技术筛选互作蛋白,并初步预测NAC036的功能,探究其与青瓯柑表型形成之间的关系,以期揭示NAC转录因子调控青瓯柑果实成熟及采后衰老的机制。研究结果如下:1.以花后210 d的青瓯柑果实黄皮层cDNA为模板,PCR扩增NAC036全长及短截ORF片段,构建PGBKT7诱饵载体,自激活及毒性测试后发现,各诱饵载体在AH109和Y187型酵母菌株中均不存在自激活活性,但对两种菌株都存在不同程度的毒性作用从而影响酵母生长。2.利用Mating法筛选酵母双杂交文库,经二次营养压力筛选和测序,NCBI数据库比对...
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：56 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
花后210d的瓯柑与青瓯柑果实
6图 1.2 酵母双杂交模型（Fields and Song 1989）UAS：上游激活序列；X：诱饵蛋白；Y：文库蛋白Fig1.2 Yeast two-hybrid modelUAS: upstream activation sequences; X: Bait protein; Y: Protein library母双杂交系统多运用于检测已知功能的蛋白质间的相互作用，有目的和针所研究的基因进行功能验证，也可将待检测蛋白进行基因突变和缺失处理双杂交系统检测其发生互作的作用位点。只有对代谢网络的大量基因进行步功能预测后才能进行点对点的互作研究，但我们常常对某些代谢网络知8]。所以“点对库”的筛选，即“诱饵”载体对 cDNA 酵母双杂交文库高通重要作用日渐突显。构建功能已知蛋白的 BD 诱饵载体，通过双杂交 cDN选的方法，获得与其存在特异性相互作用的未知蛋白对于揭示生物体代谢
图 1.3 BIFC 模型图（Wong et al 2011)VN：荧光蛋白 N 端；VC：荧光蛋白 C 端；X：蛋白 A；Y：蛋白 BFig1.3 The pattern of BIFCVN:N-terminal of vector; VC: C-terminal of vector; X:protein A; Y: protein B1.3 研究目的及内容近年来发现的 NAC 转录因子是植物特有的最大的转录因子家族之 。该家族成员众多，具有多种生物学功能，且含有 A、B、C、D、E 五个亚结构域，其 N 端高度保守，有约 150 个氨基酸，包含核酸定位信号和 DNA 结合域，C 端高度变异，为转录激活域[61],频繁出现丝氨酸、脯氨酸、谷氨酸等简单氨基酸序列。目前关于 NAC转录因子家族的研究多集中在模式植物中（如拟南芥、水稻等），在拟南芥中，约有1/5 的 NAC 基因与植株衰老相关[62]，柑橘与模式植物相比仍存在 定的研究困难，目前，对于 NAC 转录因子所涉及的植株生长发育过程的调控途径和组成因子还知之甚少，因此，在柑橘中 NAC 基因的功能有待进 步的研究。
【参考文献】：
期刊论文
[1]瓯柑研究进展[J]. 金微微,吴振旺,陈功楷,郜爱玲. 中国南方果树. 2015(02)
[2]浅谈温州瓯柑栽培历史与发展历程[J]. 林羽. 浙江柑橘. 2012(04)
[3]采用酵母双杂交技术研究OsRUS1与OsRUS2.1之间的相互作用[J]. 潘家强,侯学文. 植物生理学报. 2012(11)
[4]酵母双杂交技术的应用及进展[J]. 刘骥,张秀娟,范建平,张子义. 安徽农业科学. 2008(19)
[5]中国柑橘产业可持续发展制约因素与对策[J]. 张玉,赵玉,祁春节. 中国热带农业. 2007(05)
[6]世界柑橘品种改良的进展[J]. 邓秀新. 园艺学报. 2005(06)
[7]植物转录因子的结构与调控作用[J]. 刘强,张贵友,陈受宜. 科学通报. 2000(14)
博士论文
[1]水稻独脚金内酯相关基因的图位克隆与功能分析[D]. 王涛.中国农业科学院 2012
硕士论文
[1]类受体激酶基因StLRPK1在本氏烟中的晚疫病抗性功能鉴定及其介导的可能信号途径分析[D]. 孙春莲.华中农业大学 2014
[2]青瓯柑PAO基因的克隆及分析[D]. 郑丽.华中农业大学 2013
[3]瓯柑新品种‘无籽瓯柑’功能性成分的研究[D]. 陈相涛.浙江农林大学 2010
[4]利用酵母双杂交系统筛选与番茄RIN互作蛋白的初步研究[D]. 侯政.华中农业大学 2009
本文编号：3210560
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：56 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
花后210d的瓯柑与青瓯柑果实
6图 1.2 酵母双杂交模型（Fields and Song 1989）UAS：上游激活序列；X：诱饵蛋白；Y：文库蛋白Fig1.2 Yeast two-hybrid modelUAS: upstream activation sequences; X: Bait protein; Y: Protein library母双杂交系统多运用于检测已知功能的蛋白质间的相互作用，有目的和针所研究的基因进行功能验证，也可将待检测蛋白进行基因突变和缺失处理双杂交系统检测其发生互作的作用位点。只有对代谢网络的大量基因进行步功能预测后才能进行点对点的互作研究，但我们常常对某些代谢网络知8]。所以“点对库”的筛选，即“诱饵”载体对 cDNA 酵母双杂交文库高通重要作用日渐突显。构建功能已知蛋白的 BD 诱饵载体，通过双杂交 cDN选的方法，获得与其存在特异性相互作用的未知蛋白对于揭示生物体代谢
图 1.3 BIFC 模型图（Wong et al 2011)VN：荧光蛋白 N 端；VC：荧光蛋白 C 端；X：蛋白 A；Y：蛋白 BFig1.3 The pattern of BIFCVN:N-terminal of vector; VC: C-terminal of vector; X:protein A; Y: protein B1.3 研究目的及内容近年来发现的 NAC 转录因子是植物特有的最大的转录因子家族之 。该家族成员众多，具有多种生物学功能，且含有 A、B、C、D、E 五个亚结构域，其 N 端高度保守，有约 150 个氨基酸，包含核酸定位信号和 DNA 结合域，C 端高度变异，为转录激活域[61],频繁出现丝氨酸、脯氨酸、谷氨酸等简单氨基酸序列。目前关于 NAC转录因子家族的研究多集中在模式植物中（如拟南芥、水稻等），在拟南芥中，约有1/5 的 NAC 基因与植株衰老相关[62]，柑橘与模式植物相比仍存在 定的研究困难，目前，对于 NAC 转录因子所涉及的植株生长发育过程的调控途径和组成因子还知之甚少，因此，在柑橘中 NAC 基因的功能有待进 步的研究。
【参考文献】：
期刊论文
[1]瓯柑研究进展[J]. 金微微,吴振旺,陈功楷,郜爱玲. 中国南方果树. 2015(02)
[2]浅谈温州瓯柑栽培历史与发展历程[J]. 林羽. 浙江柑橘. 2012(04)
[3]采用酵母双杂交技术研究OsRUS1与OsRUS2.1之间的相互作用[J]. 潘家强,侯学文. 植物生理学报. 2012(11)
[4]酵母双杂交技术的应用及进展[J]. 刘骥,张秀娟,范建平,张子义. 安徽农业科学. 2008(19)
[5]中国柑橘产业可持续发展制约因素与对策[J]. 张玉,赵玉,祁春节. 中国热带农业. 2007(05)
[6]世界柑橘品种改良的进展[J]. 邓秀新. 园艺学报. 2005(06)
[7]植物转录因子的结构与调控作用[J]. 刘强,张贵友,陈受宜. 科学通报. 2000(14)
博士论文
[1]水稻独脚金内酯相关基因的图位克隆与功能分析[D]. 王涛.中国农业科学院 2012
硕士论文
[1]类受体激酶基因StLRPK1在本氏烟中的晚疫病抗性功能鉴定及其介导的可能信号途径分析[D]. 孙春莲.华中农业大学 2014
[2]青瓯柑PAO基因的克隆及分析[D]. 郑丽.华中农业大学 2013
[3]瓯柑新品种‘无籽瓯柑’功能性成分的研究[D]. 陈相涛.浙江农林大学 2010
[4]利用酵母双杂交系统筛选与番茄RIN互作蛋白的初步研究[D]. 侯政.华中农业大学 2009
本文编号：3210560
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