水通道蛋白在番茄花器官脱落过程中的作用研究

发布时间：2021-06-28 06:56

　　番茄是我国主要种植的蔬菜类经济作物,解决其落花落果对生产有着重要的实际意义。脱落的过程包括细胞膨大分离和程序性死亡PCD（Programmed Cell Death）。细胞的水分运输和膨压保持是其膨大的关键。而稳定的H₂O₂参与PCD的调控,并调控脱落过程中的程序性死亡。而前人报道不同的水通道蛋白参与细胞膨大,H₂O₂的运输。因此为弄清水通道蛋白是否参与了脱落过程进行了相关实验,找出沉默后显著延缓脱落的关键水通道蛋白SlPIP1;3,SlPIP1;5以及SlTIP1;1:1.本文通过病毒诱导基因沉默（VIGS）将前期鉴定出的番茄离区且特异性高度表达水通道蛋白SlPIP1;3,SlPIP1;5,SlPIP2;4,SlPIP2;5,SlTIP4;1,SlTIP1;1分别沉默,其中沉默SlPIP1;3,SlPIP1;5,SlTIP1;1可显著延缓脱落。2.由于这些基因表达模式的相似性,进一步进行双基因沉默及三基因的沉默,获得pTRV2-SlPIP1;3SlPIP1;5双基因沉默株系以及pTRV2-SlPI... 

【文章来源】：沈阳农业大学辽宁省

【文章页数】：51 页

【学位级别】：硕士

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技术路线

质粒 DNAEcoR I 限制性内切酶BamH I 限制性内切酶灭菌水10xK BufferTotal7μL1μL1μL9μL2μL20μL胶回收La 胶回收试剂盒，对目的条带进行回收，以便于下一步的连接 TRV-AQPs 的构建组前期鉴定找出 SlPIP1;3, SlPIP1;5, SlPIP2;4, SlPIP2;5, SlTIP4。于是选取这六个基因并根据 NCBI 上查询到的 SlPIP1;2;5, SlTIP4;1, SlTIP1;1 的基因全长，找到其特异性的片段，并酶切位点要在水通道蛋白和烟草脆裂病毒 TRV2 的质粒上共有BamHⅠ这两种限制性内切酶来进行试验。

图 3-1VIGS 载体双酶切验证Figure 3-1 double enzyme digestion verification of VIG大肠杆菌菌液 PCR 的鉴定与酶切后的载体进行连接后，转到大肠杆菌中筛选。pTRV2-SlTIP1;1pTRV2-SlPIP1;5pTRV2-SlPIP1;3pTRV2-SlPIP2;4pTRV2-SlPIP2;5

【参考文献】：
期刊论文
[1]VIGS技术的研究进展及其在葫芦科作物中的应用[J]. 刘美,刘莉铭,吴会杰,古勤生.  果树学报. 2018(11)
[2]VIGS:植物功能基因组学研究的革命[J]. 姚丹青,张微微,原丽华,潘俊松,何欢乐,蔡润.  分子植物育种. 2009(01)
[3]VIGS诱导番茄果实LeETR4沉默及其对乙烯生成的影响[J]. 张策,谢远红,罗云波,朱本忠.  食品工业科技. 2008(03)
[4]病毒诱导的基因沉默[J]. 徐幼平,徐秋芳,宋晓毅,张志新,蔡新忠.  浙江大学学报(农业与生命科学版). 2008(02)
[5]日光温室番茄落花原因及防治措施[J]. 田起.  农村实用工程技术. 2001(11)



本文编号：3253848