基于BSA分析的山葡萄性别位点定位研究
发布时间：2021-07-01 10:09
山葡萄（Vitis amurensis Rupr.）是葡萄属中最抗寒的一个种,对多种欧亚种群易感的病害都有较强的抵抗力。它是目前国内外葡萄抗寒和抗病育种的主要种质资源。而野生山葡萄一般为雌雄异株,两性花类型极为罕见。本研究以山葡萄‘左山一’x‘043’杂交F1代群体为试材,利用SSR分子标记技术结合BSA（集群分离分析法）,进行与山葡萄性别相关的定位研究,以实现山葡萄性别的早期鉴定,加快山葡萄育种进程。本研究取得了以下主要结果:1.应用SSR-PCR技术筛选出两对具有父母本特异性条带的SSR引物,对117株杂交后代进行杂种真实性鉴定,有108株杂交后代中出现了清晰、稳定的亲本特异型条带,结合田间形态学观察,确定真杂种率为92.3%。2.采用SSR分子标记结合BSA技术对山葡萄‘左山一’和‘043’杂交F1代进行性别差异基因筛选。首先构建雌雄基因池（各20株）,然后用190对微卫星引物对其进行扩增,发现3对引物（VMC3B10F、Y-2-11B和VMC2C10-1）能在雌性基因池间扩增出特异性条带。用构建基因池的40株个体对3对引物进行个体验证,3对引物在40株个体上均能扩增出条带,且这...
【文章来源】：沈阳农业大学辽宁省
【文章页数】：48 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
山葡萄雄花和雌能花图
（1）将 117 个个体和 2 个亲本共 119 个 DNA 母液用 Thermo Scientific NANODR000C 检测，结果显示其核酸和蛋白质的吸光度（OD260/OD280）比值均在 1.7-1.9 之机抽取 DNA 样本的检测结果（表 2），说明提取的 DNA 母液纯净，RNA 消化完他蛋白质、多酚类杂质较少。（2）用 0.8%琼脂糖凝胶对 DNA 母液进行电泳检测，记录产物检测成像结果（图 取的各单株 DNA 均为一条清晰完整的亮带，说明基因组 DNA 母液完整性良好，用于后续的试验。表 2 部分 DNA 样本吸光度（OD260/OD280）Table 2 Absorbance of some DNAsamples (OD260/OD280)DNA 母液编号DNAmother fluid number1 8 24 42 56 96 102浓度（μg/μl）concentration（μg/μl）503.3 421.6 480.4 348.1 497.4 533.0 408.5OD260/OD280 1.87 1.83 1.79 1.86 1.86 1.77 1.84
图 3 引物 UDV087 在双亲上的多态性结果图注：父本：043；母本：左山一 ；M：markerFig.3 The result of primer UDV087 in the parentsNote: Parent: 043; Parent: Zuo Shanyi; M:marker图 4 引物 VVIP17B 在双亲上的多态性结果图注：父本：043；母本：左山一 ；M：markerFig.4 The result of some polymorphism SSR primer in the parentsNote: Parent: 043; Parent: Zuo Shanyi; M:marker真假杂种鉴定结果
【参考文献】：
期刊论文
[1]DNA分子标记技术在葡萄砧木改良上的应用[J]. 韩斌,刘长江,袁军伟,马爱红,郭紫娟,赵胜建. 植物遗传资源学报. 2014(03)
[2]荔枝两个F1杂交群体的EST-SSR鉴定及多样性分析[J]. 孙清明,马帅鹏,马文朝,赵俊生,方静,杨晓燕,向旭. 分子植物育种. 2014(01)
[3]SSR分子标记鉴定山葡萄和河岸葡萄种间杂种[J]. 樊秀彩,张颖,姜建福,孙海生,焦建,刘崇怀. 西北植物学报. 2012(11)
[4]玉米性别决定的激素调控[J]. 杨同文,李潮海. 植物学报. 2012(01)
[5]甘薯种质资源遗传稳定性及遗传多样性SSR分析[J]. 赵冬兰,郑立涛,唐君,周志林,曹清河. 植物遗传资源学报. 2011(03)
[6]贵州70份玉米自交系的SSR标记遗传多样性及其杂种优势群分析[J]. 杨文鹏,关琦,杨留启,王伟,张文龙,祝云芳,潘敏娜,沈建华,赵致. 植物遗传资源学报. 2011(02)
[7]23份烟草种质遗传多样性的SSR和ISSR标记分析[J]. 聂琼,刘仁祥. 西南农业学报. 2011(01)
[8]用SSR标记分析福建漳浦野生稻的遗传多样性[J]. 李书柯,江川,王金英. 植物遗传资源学报. 2011(01)
[9]5个粳稻杂交组合及亲本的SSR多态性分析[J]. 程保山,杨加银,洪德林. 西南农业学报. 2010(06)
[10]五叶草莓与凤梨草莓种间杂交F1代的形态学及SSR标记鉴定[J]. 董静,张运涛,王桂霞,金万梅,钟传飞,王丽娜,常琳琳. 西北农业学报. 2010(11)
博士论文
[1]柑橘高密度遗传连锁图谱的构建及落叶性状的QTL定位[D]. 刘升锐.华中农业大学 2016
[2]山葡萄高密度分子遗传图谱构建及抗寒性QTL定位研究[D]. 刘镇东.沈阳农业大学 2012
[3]基于SSR分子标记的山葡萄种质遗传多样性研究与核心种质构建[D]. 温景辉.吉林农业大学 2011
硕士论文
[1]欧亚种葡萄遗传图谱构建和雄性不育基因及部分性状相关QTL的定位[D]. 季晨飞.南京农业大学 2014
[2]CPPU对山葡萄（Vitis amurensis Rupr.）雄花性别转换机理的研究[D]. 焦竹青.中国农业科学院 2012
[3]桃豫农矮砧1号离体快繁体系的研究和SSR-PCR反应体系的优化[D]. 熊明国.河南农业大学 2011
[4]节瓜（Benincasa hispida Cogn.chieh-qua How.）性别分化的生理学研究[D]. 魏秉培.山东农业大学 2008
[5]山葡萄种质遗传多样性的SSR分析及核心种质初步构建[D]. 吴子龙.东北林业大学 2007
[6]美国肥皂荚花性别分化细胞形态学及特异蛋白质研究[D]. 侯亚南.北京林业大学 2005
本文编号：3258942
【文章来源】：沈阳农业大学辽宁省
【文章页数】：48 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
山葡萄雄花和雌能花图
（1）将 117 个个体和 2 个亲本共 119 个 DNA 母液用 Thermo Scientific NANODR000C 检测，结果显示其核酸和蛋白质的吸光度（OD260/OD280）比值均在 1.7-1.9 之机抽取 DNA 样本的检测结果（表 2），说明提取的 DNA 母液纯净，RNA 消化完他蛋白质、多酚类杂质较少。（2）用 0.8%琼脂糖凝胶对 DNA 母液进行电泳检测，记录产物检测成像结果（图 取的各单株 DNA 均为一条清晰完整的亮带，说明基因组 DNA 母液完整性良好，用于后续的试验。表 2 部分 DNA 样本吸光度（OD260/OD280）Table 2 Absorbance of some DNAsamples (OD260/OD280)DNA 母液编号DNAmother fluid number1 8 24 42 56 96 102浓度（μg/μl）concentration（μg/μl）503.3 421.6 480.4 348.1 497.4 533.0 408.5OD260/OD280 1.87 1.83 1.79 1.86 1.86 1.77 1.84
图 3 引物 UDV087 在双亲上的多态性结果图注：父本：043；母本：左山一 ；M：markerFig.3 The result of primer UDV087 in the parentsNote: Parent: 043; Parent: Zuo Shanyi; M:marker图 4 引物 VVIP17B 在双亲上的多态性结果图注：父本：043；母本：左山一 ；M：markerFig.4 The result of some polymorphism SSR primer in the parentsNote: Parent: 043; Parent: Zuo Shanyi; M:marker真假杂种鉴定结果
【参考文献】：
期刊论文
[1]DNA分子标记技术在葡萄砧木改良上的应用[J]. 韩斌,刘长江,袁军伟,马爱红,郭紫娟,赵胜建. 植物遗传资源学报. 2014(03)
[2]荔枝两个F1杂交群体的EST-SSR鉴定及多样性分析[J]. 孙清明,马帅鹏,马文朝,赵俊生,方静,杨晓燕,向旭. 分子植物育种. 2014(01)
[3]SSR分子标记鉴定山葡萄和河岸葡萄种间杂种[J]. 樊秀彩,张颖,姜建福,孙海生,焦建,刘崇怀. 西北植物学报. 2012(11)
[4]玉米性别决定的激素调控[J]. 杨同文,李潮海. 植物学报. 2012(01)
[5]甘薯种质资源遗传稳定性及遗传多样性SSR分析[J]. 赵冬兰,郑立涛,唐君,周志林,曹清河. 植物遗传资源学报. 2011(03)
[6]贵州70份玉米自交系的SSR标记遗传多样性及其杂种优势群分析[J]. 杨文鹏,关琦,杨留启,王伟,张文龙,祝云芳,潘敏娜,沈建华,赵致. 植物遗传资源学报. 2011(02)
[7]23份烟草种质遗传多样性的SSR和ISSR标记分析[J]. 聂琼,刘仁祥. 西南农业学报. 2011(01)
[8]用SSR标记分析福建漳浦野生稻的遗传多样性[J]. 李书柯,江川,王金英. 植物遗传资源学报. 2011(01)
[9]5个粳稻杂交组合及亲本的SSR多态性分析[J]. 程保山,杨加银,洪德林. 西南农业学报. 2010(06)
[10]五叶草莓与凤梨草莓种间杂交F1代的形态学及SSR标记鉴定[J]. 董静,张运涛,王桂霞,金万梅,钟传飞,王丽娜,常琳琳. 西北农业学报. 2010(11)
博士论文
[1]柑橘高密度遗传连锁图谱的构建及落叶性状的QTL定位[D]. 刘升锐.华中农业大学 2016
[2]山葡萄高密度分子遗传图谱构建及抗寒性QTL定位研究[D]. 刘镇东.沈阳农业大学 2012
[3]基于SSR分子标记的山葡萄种质遗传多样性研究与核心种质构建[D]. 温景辉.吉林农业大学 2011
硕士论文
[1]欧亚种葡萄遗传图谱构建和雄性不育基因及部分性状相关QTL的定位[D]. 季晨飞.南京农业大学 2014
[2]CPPU对山葡萄（Vitis amurensis Rupr.）雄花性别转换机理的研究[D]. 焦竹青.中国农业科学院 2012
[3]桃豫农矮砧1号离体快繁体系的研究和SSR-PCR反应体系的优化[D]. 熊明国.河南农业大学 2011
[4]节瓜（Benincasa hispida Cogn.chieh-qua How.）性别分化的生理学研究[D]. 魏秉培.山东农业大学 2008
[5]山葡萄种质遗传多样性的SSR分析及核心种质初步构建[D]. 吴子龙.东北林业大学 2007
[6]美国肥皂荚花性别分化细胞形态学及特异蛋白质研究[D]. 侯亚南.北京林业大学 2005
本文编号：3258942
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