农杆菌介导的葡萄风信子遗传转化体系建立的研究

发布时间：2021-07-01 12:13

　　葡萄风信子（Muscari）是风信子科葡萄风信子属的单子叶草本球根花卉,花为串铃状,花朵较小倒置,花期长,绿叶期也较长,是良好的林下地被与园林花卉,且适于切花和与盆栽观赏,因此它具有较高的观赏、生态、科研价值。在已知的40多个种和栽培品种中,花色除了少数白色突变体以外,都以单一的蓝色为主,因此葡萄风信子花色遗传基础简单,这使它成为一种研究单子叶蓝色花形成模式的典型材料。但是葡萄风信子传统的杂交育种人工去雄和授粉困难,而且从播种到实生苗开花至少需要3年的时间,这在一定程度上限制了对植物基因功能验证工作的进展,从而阻碍了利用分子生物技术进行花色育种的研究。本试验以葡萄风信子 ‘亚美尼亚’和 ‘粉日出’为材料,建立了葡萄风信子植株再生体系,确定了葡萄风信子愈伤组织对卡那霉素和潮霉素的耐受力。并采用农杆菌介导法将T-DNA区携带GUS （β-）葡萄糖苷酸酶)和Hyg（潮霉素磷酸转移酶）选择标记基因的pCAMBIA1301载体转化到葡萄风信子,对其转化条件进行优化,并用最佳条件转化葡萄风信子,获得抗性植株。试验取得的主要结果如下：1.本研究探讨了葡萄风信子‘亚美尼亚’和‘粉日出’叶片分化愈伤组织... 

【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：53 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 文献综述
    1.1 葡萄风信子及其组织培养研究
        1.1.1 葡萄风信子概述
        1.1.2 葡萄风信子器官发生与植株再生
        1.1.3 葡萄风信子体细胞胚发生研究进展
        1.1.4 葡萄风信子基因转化受体系统的建立
    1.2 单子叶植物遗传转化
        1.2.1 单子叶植物遗传转化方法及其研究进展
        1.2.2. 农杆菌介导的单子叶植物遗传转化的影响因素及提高转化率的方法
    1.3 农杆菌介导的葡萄风信子遗传转化的现状
    1.4 目的和意义
    1.5 研究内容和技术路线
第二章 葡萄风信子愈伤组织遗传转化受体系统建立
    2.1 材料和方法
        2.1.1 植物材料
    2.2 试验方法
        2.2.1 葡萄风信子遗传转化植株再生体系建立
        2.2.2 葡萄风信子愈伤组织对不同抗生素的敏感性试验
    2.3 结果与分析
        2.3.1 葡萄风信子遗传转化植株再生体系建立
        2.3.2 葡萄风信子愈伤组织对不同抗生素的敏感性试验
    2.4 讨论
    2.5 小结
第三章 葡萄风信子愈伤组织转化条件优化的研究
    3.1 材料和方法
        3.1.1 植物材料
        3.1.2 菌株和载体
    3.2 试剂和仪器
        3.2.1 主要试剂
        3.2.2 主要仪器
    3.3 方法
        3.3.1 农杆菌菌液制备
        3.3.2 转化及侵染
        3.3.3 葡萄风信子转化愈伤组织的GUS组织化学检测
    3.4 影响葡萄风信子遗传转化效率的因素
        3.4.1 菌液浓度对遗传转化效率的影响
        3.4.2 共培养时间对遗传转化效率的影响
        3.4.3 侵染时间对遗传转化效率的影响
        3.4.4 超声波预处理时间对遗传转化效率的影响
    3.5 数据统计分析方法
    3.6 结果与分析
        3.6.1 农杆菌菌液浓度遗传转化效率的影响
        3.6.2 共培养时间对遗传转化效率的影响
        3.6.3 侵染时间对遗传转化效率的影响
        3.6.4 超声波预处理时间对遗传转化效率的影响
    3.7. 讨论
    3.8 小结
第四章 农杆菌介导的葡萄风信子愈伤组织的转化
    4.1 材料和方法
        4.1.1 植物材料
        4.1.2 菌株和载体
    4.2 试剂和仪器
        4.2.1 主要试剂
        4.2.2 主要仪器
    4.3 方法
        4.3.1 农杆菌菌液制备
        4.3.2 转化及侵染
        4.3.3 脱菌和筛选培养
    4.4 转基因植株PCR检测
        4.4.1 GUS组织化学分析
        4.4.2 葡萄风信子基因组DNA的提取(CTAB法)
        4.4.3 转基因植株PCR检测
    4.5 结果与分析
        4.5.1 GUS组织化学染色
        4.5.2 转基因植株PCR检测
    4.6 讨论
    4.7 小结
第五章 结论
参考文献
缩略词
致谢
作者简介


【参考文献】：
期刊论文
[1]农杆菌介导的墨兰遗传转化[J]. 谢利,王芬,曾瑞珍,郭和蓉,周玉亮,张志胜.  生物工程学报. 2015(04)
[2]葡萄风信子体细胞胚再生体系的建立及抗生素敏感性试验[J]. 杨凤美,王飞,张雯,酒立君,罗静,吴楠,吴恒.  西北农林科技大学学报(自然科学版). 2013(06)
[3]超声波辅助农杆菌转化OT百合‘罗宾娜’的研究[J]. 王岚,刘雅莉,娄倩,田菲菲.  西北农林科技大学学报(自然科学版). 2013(06)
[4]提高植物农杆菌转化效率辅助策略研究进展[J]. 叶兴国,王新敏,王轲,杜丽璞,林志珊,徐惠君.  中国农业科学. 2012(15)
[5]农杆菌介导的唐菖蒲遗传转化体系的建立[J]. 张自由,连青龙,辛海波,钟雄辉,罗弦,义鸣放.  中国农业大学学报. 2011(06)
[6]植物体细胞胚发生的研究进展[J]. 潘晓,徐春香,陈厚彬.  江西农业学报. 2009(10)
[7]葡萄风信子的研究进展[J]. 王远,罗凤霞,沈健,魏哲虎,周魏魏.  金陵科技学院学报. 2008(04)
[8]负压处理对农杆菌介导小麦成熟胚转化效率的影响[J]. 毕瑞明.  生物技术. 2008(01)
[9]葡萄风信子基因转化受体系统的建立[J]. 许胜,王飞,刘雅莉.  西北农林科技大学学报(自然科学版). 2007(10)
[10]葡萄风信子[J]. 蔡曾煜.  中国花卉盆景. 2007(06)

硕士论文
[1]葡萄风信子植株再生体系研究[D]. 何旭东.南京林业大学 2007
[2]花色基因Delila转化葡萄风信子的研究[D]. 许胜.西北农林科技大学 2007



本文编号：3259117