耐旱复苏植物密罗木（Myrothamnus flabellifolia）脱水诱导转录因子基因MfWRKY41的克隆及功能
发布时间：2021-07-04 17:17
密罗木（Myrothamnus flabellifolia,）是迄今为止发现的唯一木本复苏植物,前人从转录组水平对其耐旱机制进行了初步研究,发现大量转录因子受干旱脱水诱导。本文从密罗木中分离克隆了脱水早期诱导表达的转录因子基因MfWRKY41,并对模式植物拟南芥进行转化,对获得的转基因拟南芥纯系植物进行胁迫试验,以初步验证MfWRKY41基因的功能,主要获得以下研究结果:1、密罗木MfWRKY41基因的克隆及序列分析基于密罗木MfWRKY41 uniGene序列,克隆得到长度为950bp的MfWRKY41基因完整cDNA序列。其推导氨基酸序列中包含高度保守的核定位信号KKRK以及由63个氨基酸残基组成的典型的WRKY结构域。C端包含1个Cx7Cx23HxC型锌指结构,据此推断MfWRKY41基因属于WRKY家族Group Ⅲ类,并构建系统进化树进行了验证。2、MfWRKY41基因在拟南芥中的过量表达及表型差异将目的基因构建至真核表达载体,利用农杆菌介导将其转入模式植物拟南芥,最终获得T2代转基因纯系植株。各转基因植株间除Line A外,生长状况及表型无显著差异,Line A株系植株较W...
【文章来源】：四川农业大学四川省 211工程院校
【文章页数】：62 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１－１正常生长与脱水后的密罗木表型比较??
图２－１密罗木总ＲＮＡ的提取??Ｆｉｇ．２－１?Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ?ｏｆ?ｈｄｙｒｏｔｈａｎｎｍｓ?Ｊｌａｂｅｌｌｉｆｏｌｉａ?ｔｏｔａｌ?ＲＮＡ??
扩增得到长度为ｌＯＯＯｂｐ左右的ＤＮＡ片段，如图２－２。图中条带位置与预期片段长度一??致，对目的条带进行回收纯化后与克隆载体进行连接并转化大肠杆菌，菌液ＰＣＲ进行阳??性检测后挑选阳性菌液进行测序。将测序结果与在ｕｎｉＧｅｎｅ中筛选所得的基因序列做比??对，结果显示所得片段确为均基因。??表２－１?基因ＰＣＲ扩增引物序列??Ｔａｂ?２－１?Ｐｒｉｍｅｒｓ?ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ?ｏｆ?ＭＪＷＲＫＹ４１?ｇｅｎｅ?ＰＣＲ?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ??引物名称?引物序列??上游引物（Ｐｒｉｍｅｒ－Ｆ）?ＴＣＣＣＣＣＧＧＧＡＴＧＧＡＧＣＡＧＡＡＧＡＡＴＴＴＧＡＴ??下游引物（Ｐｉｉｍｅｒ－Ｒ）?ＧＧＡＣＴＡＧＴＴＴＡＡＡＣＴＡＡＧＡＡＣＴＣＴＧＡＧ??图２－２?ＲＴ－ＰＣＲ法扩增Ａｆ／Ｗ７认ｙｖ／基因的电泳检测??Ｆｉｇ．２－２?Ｅｌｃｃｔｒｏｐｈｏｒｏｇｒａｍ?ｏｆ?ｔｈｅ?ＭｆＷＲＫＹ４Ｉ?ｇｅｎｅ?ｕｓｉｎｇ?ＲＴ－ＰＣＲ?ｍｅｔｈｏｄ??２．?３．?２?｝：／／基因序列及结构分析??将克隆的甚闪测序结果与ＵｎｉＧｅｎｅ屮的序列相比对，结果显示本次兑降所得基因确??为Ｍ／Ｗ７认Ｐ／基闪。迸？步对１冈进行迠因序列及结构分析得知，??Ｖ／ＨＷｉＴＷｅＤＮＡ令长９５０ｂｐ，?ＮＣＢＩ的ＯＲＦ?Ｆｉｎｄｅｒ预测包含？个９３３ｂｐ的开放阅读抿，??编码３１０个氨基酸，５’和３’各包含一个９ｂｐ和８ｂｐ的非编码区。利用ＤＮＡＭＡＮ软件对??氨丛酸序列等进行预测（阁２－３），结來显小潘｜＇丨分／＋说为３５．６１＜〇３，等屯点０丨）为丨２．１１，??说明组成该蛋ｆｔ的氨基酸残基中，酸性氨基酸所占比例较大。??利用ＳＭＲＡＴ在线
【参考文献】：
期刊论文
[1]NAC转录因子在植物非生物胁迫相关抗性中的作用[J]. 蔡英杰,张雨,刘彧,田忠平,周蕴薇. 北方园艺. 2015(23)
[2]植物盐胁迫抗性的分子机制研究进展[J]. 蔡晓锋,胡体旭,叶杰,张余洋,李汉霞,叶志彪. 华中农业大学学报. 2015(03)
[3]植物bHLH转录因子参与非生物胁迫信号通路研究进展[J]. 王昕嘉,李昆志. 生命科学. 2015(02)
[4]WRKY转录因子参与植物非生物胁迫应答的研究进展[J]. 王娜,张振葆,黄凤珠,李洪有,张素芝. 核农学报. 2014(10)
[5]干燥密罗木复水过程中光诱导蒸腾拉力变化与复水时间的关系[J]. 朱建军,刘林德,朱路英. 植物学报. 2013(04)
[6]土壤盐渍化研究现状及未来研究热点[J]. 李建国,濮励杰,朱明,张润森. 地理学报. 2012(09)
[7]植物NAC转录因子的研究进展[J]. 邢国芳,张雁明,张魏斌,马新耀,韩渊怀. 山西农业科学. 2012(04)
[8]植物bZIP转录因子在非生物胁迫中的作用[J]. 冉静,邹杰,刘爱玲,陈信波. 湖南农业科学. 2012(07)
[9]拟南芥WRKY2转录调控因子可能参与调控渗透胁迫反应[J]. 江文波,余迪求. 云南植物研究. 2009(05)
硕士论文
[1]黄酮醇在植物盐胁迫应答中的作用[D]. 杨欢欢.山东大学 2015
[2]NaCl胁迫下甜菜光合能力和光保护机制的研究[D]. 程然然.山东师范大学 2014
[3]棉花GhWRKY41基因的分离与功能分析[D]. 褚晓茜.山东农业大学 2014
[4]拟南芥WRKY基因家族的进化研究[D]. 郝博济.天津大学 2014
[5]玉米WRKY家族转录因子基因ZmWRKY33的克隆及功能分析[D]. 黎华.扬州大学 2011
[6]NaCl胁迫下海滨锦葵光保护机制的研究[D]. 张艳.山东师范大学 2008
本文编号：3265208
【文章来源】：四川农业大学四川省 211工程院校
【文章页数】：62 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１－１正常生长与脱水后的密罗木表型比较??
图２－１密罗木总ＲＮＡ的提取??Ｆｉｇ．２－１?Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ?ｏｆ?ｈｄｙｒｏｔｈａｎｎｍｓ?Ｊｌａｂｅｌｌｉｆｏｌｉａ?ｔｏｔａｌ?ＲＮＡ??
扩增得到长度为ｌＯＯＯｂｐ左右的ＤＮＡ片段，如图２－２。图中条带位置与预期片段长度一??致，对目的条带进行回收纯化后与克隆载体进行连接并转化大肠杆菌，菌液ＰＣＲ进行阳??性检测后挑选阳性菌液进行测序。将测序结果与在ｕｎｉＧｅｎｅ中筛选所得的基因序列做比??对，结果显示所得片段确为均基因。??表２－１?基因ＰＣＲ扩增引物序列??Ｔａｂ?２－１?Ｐｒｉｍｅｒｓ?ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ?ｏｆ?ＭＪＷＲＫＹ４１?ｇｅｎｅ?ＰＣＲ?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ??引物名称?引物序列??上游引物（Ｐｒｉｍｅｒ－Ｆ）?ＴＣＣＣＣＣＧＧＧＡＴＧＧＡＧＣＡＧＡＡＧＡＡＴＴＴＧＡＴ??下游引物（Ｐｉｉｍｅｒ－Ｒ）?ＧＧＡＣＴＡＧＴＴＴＡＡＡＣＴＡＡＧＡＡＣＴＣＴＧＡＧ??图２－２?ＲＴ－ＰＣＲ法扩增Ａｆ／Ｗ７认ｙｖ／基因的电泳检测??Ｆｉｇ．２－２?Ｅｌｃｃｔｒｏｐｈｏｒｏｇｒａｍ?ｏｆ?ｔｈｅ?ＭｆＷＲＫＹ４Ｉ?ｇｅｎｅ?ｕｓｉｎｇ?ＲＴ－ＰＣＲ?ｍｅｔｈｏｄ??２．?３．?２?｝：／／基因序列及结构分析??将克隆的甚闪测序结果与ＵｎｉＧｅｎｅ屮的序列相比对，结果显示本次兑降所得基因确??为Ｍ／Ｗ７认Ｐ／基闪。迸？步对１冈进行迠因序列及结构分析得知，??Ｖ／ＨＷｉＴＷｅＤＮＡ令长９５０ｂｐ，?ＮＣＢＩ的ＯＲＦ?Ｆｉｎｄｅｒ预测包含？个９３３ｂｐ的开放阅读抿，??编码３１０个氨基酸，５’和３’各包含一个９ｂｐ和８ｂｐ的非编码区。利用ＤＮＡＭＡＮ软件对??氨丛酸序列等进行预测（阁２－３），结來显小潘｜＇丨分／＋说为３５．６１＜〇３，等屯点０丨）为丨２．１１，??说明组成该蛋ｆｔ的氨基酸残基中，酸性氨基酸所占比例较大。??利用ＳＭＲＡＴ在线
【参考文献】：
期刊论文
[1]NAC转录因子在植物非生物胁迫相关抗性中的作用[J]. 蔡英杰,张雨,刘彧,田忠平,周蕴薇. 北方园艺. 2015(23)
[2]植物盐胁迫抗性的分子机制研究进展[J]. 蔡晓锋,胡体旭,叶杰,张余洋,李汉霞,叶志彪. 华中农业大学学报. 2015(03)
[3]植物bHLH转录因子参与非生物胁迫信号通路研究进展[J]. 王昕嘉,李昆志. 生命科学. 2015(02)
[4]WRKY转录因子参与植物非生物胁迫应答的研究进展[J]. 王娜,张振葆,黄凤珠,李洪有,张素芝. 核农学报. 2014(10)
[5]干燥密罗木复水过程中光诱导蒸腾拉力变化与复水时间的关系[J]. 朱建军,刘林德,朱路英. 植物学报. 2013(04)
[6]土壤盐渍化研究现状及未来研究热点[J]. 李建国,濮励杰,朱明,张润森. 地理学报. 2012(09)
[7]植物NAC转录因子的研究进展[J]. 邢国芳,张雁明,张魏斌,马新耀,韩渊怀. 山西农业科学. 2012(04)
[8]植物bZIP转录因子在非生物胁迫中的作用[J]. 冉静,邹杰,刘爱玲,陈信波. 湖南农业科学. 2012(07)
[9]拟南芥WRKY2转录调控因子可能参与调控渗透胁迫反应[J]. 江文波,余迪求. 云南植物研究. 2009(05)
硕士论文
[1]黄酮醇在植物盐胁迫应答中的作用[D]. 杨欢欢.山东大学 2015
[2]NaCl胁迫下甜菜光合能力和光保护机制的研究[D]. 程然然.山东师范大学 2014
[3]棉花GhWRKY41基因的分离与功能分析[D]. 褚晓茜.山东农业大学 2014
[4]拟南芥WRKY基因家族的进化研究[D]. 郝博济.天津大学 2014
[5]玉米WRKY家族转录因子基因ZmWRKY33的克隆及功能分析[D]. 黎华.扬州大学 2011
[6]NaCl胁迫下海滨锦葵光保护机制的研究[D]. 张艳.山东师范大学 2008
本文编号：3265208
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