马蔺液泡膜H + -PPase基因IlVP的克隆及其耐盐功能分析
发布时间：2021-07-23 16:00
马蔺（Iris lactea Pall. var. chinensis （Fisch.） Koidz.）是鸢尾科鸢尾属多年草本植物,主要野生分布于我国东北、西北、华北等地,马蔺具有极强抗旱耐盐性,并已经成为退化低地盐生草甸的指示性植物之一,因其叶色青绿,绿期长,花色淡雅倩丽,管理粗放,已经成为城市园林景观配置和郊野公园绿地建设的优良地被植物。本课题组经对马蔺ISSR841-320标记位点测序后,发现与其他植物液泡膜H+-PPase基因VP同源性达60%以上,其中与大麦H+-PPase基因HvVP同源性高达80%。H+-PPase基因定位在液泡膜上,与H+-ATPase共同承担质子泵的作用,构成H+跨膜电化学梯度,将细胞质中多余的无机离子区域化到液泡中,减轻无机离子对植物的伤害。本研究以马蔺为实验材料,采用cDNA末端快速扩增（RACE）技术,获得马蔺IlVP的全长cDNA序列;利用原子吸收分光光度计和real-time RT-PCR技术,对不同浓度NaCl处理下马蔺地下部和地上部中的IlVP表达水平进行定量分析;采用根癌农杆菌介导的叶盘转化法,将马蔺IlVP基因导入烟草W38中,共获得...
【文章来源】：山西农业大学山西省
【文章页数】：75 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
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【参考文献】：
期刊论文
[1]马蔺IlVP基因片段的克隆及序列分析[J]. 郭静雅,李杉杉,郭强,孟林,杨晓盆. 基因组学与应用生物学. 2015(12)
[2]园林造景地被植物——马蔺[J]. 李淑梅. 现代园艺. 2015(08)
[3]梭梭液泡膜焦磷酸酶HaVVP基因克隆及序列分析[J]. 甘晓燕,巩檑,石磊,宋玉霞. 西北农业学报. 2014(11)
[4]海滨雀稗液泡膜H+-PPase（PvVP1）5′端的克隆和序列分析[J]. 宋辉,南志标,蔡小宁,钟小仙,顾洪如. 草业学报. 2014(05)
[5]马蔺种质资源遗传多样性的ISSR分析[J]. 毛培春,孟林,田小霞. 华北农学报. 2013(06)
[6]16份马蔺种质材料苗期耐盐性评价[J]. 毛培春,田小霞,孟林. 草业科学. 2013(01)
[7]马蔺对铅尾砂土壤酶活性和铅形态的影响[J]. 原海燕,佟海英,黄苏珍. 生态环境学报. 2012(11)
[8]Na2CO3胁迫对马蔺幼苗生长量及生理特性的影响[J]. 张天殊,吴建慧,王可心,郭瑶. 东北林业大学学报. 2012(07)
[9]马蔺生物学特性分析[J]. 赵桂云. 吉林农业. 2011(06)
[10]NaCl胁迫对马蔺生长及生理生化指标的影响[J]. 张明轩,黄苏珍,绳仁立,原海燕. 植物资源与环境学报. 2011(01)
博士论文
[1]过量表达盐地碱蓬cDNA文库及SsNHX1-AVP1对拟南芥耐盐性的影响和盐地碱蓬FAD7基因cDNA的克隆与表达分析[D]. 张学杰.山东师范大学 2004
硕士论文
[1]农杆菌介导AVP1基因转化甜菜的研究[D]. 王晓娇.内蒙古农业大学 2011
[2]AVP1基因转化百脉根及其转基因植株的耐盐抗旱性研究[D]. 程星.兰州大学 2009
[3]黄瓜4种α-半乳糖苷酶的Southern杂交及表达分析[D]. 马静静.扬州大学 2008
[4]披碱草（Elymus dahuricus）氢离子焦磷酸化酶基因EdHP1的克隆及功能鉴定[D]. 董建辉.西北农林科技大学 2008
[5]NO供体SNP浸种预处理对盐胁迫下小麦种子萌发及幼苗生长的影响[D]. 段培.山东师范大学 2007
[6]KCl处理对盐地碱蓬液泡膜H～+-ATPase和H～+-PPase活性的影响[D]. 李圆圆.山东师范大学 2005
[7]NaCl胁迫对盐地碱蓬根、茎、叶液泡膜H～+-ATPase和H～+-PPase活性的影响[D]. 包华音.山东师范大学 2004
[8]盐地碱蓬SsVP和SsMAPKK基因的克隆与功能鉴定[D]. 尹海波.山东师范大学 2003
[9]NaCl和KCl胁迫对碱蓬生长及液泡膜质子泵活性的效应[D]. 杨明峰.山东师范大学 2002
本文编号：3299597
【文章来源】：山西农业大学山西省
【文章页数】：75 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２．４?Ｒｅａｌ?Ｔｉｍｅ?ＰＣＲ扩増反应程序??
９５ｔ：?５?Ｓｏ??４Ｘ：保存??图２．４?Ｒｅａｌ?Ｔｉｍｅ?ＰＣＲ扩増反应程序??Ｆｉｇｕｒｅ?２．４?Ｒｅａｌ?Ｔｉｍｅ?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?代ａｃｔｉｏｎ?ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ??３实验结果与分析??３．１马巧总ＲＮＡ提取?，胃＿??Ｗ马商地下部根系为材料提取根部总ＲＮＡ。经检测显示，得到两条清晰条带，分??别为２８ＳＲＮＡ和１８ｓＲＮＡ?（图２．５），２８ｓＲＮＡ约２倍亮于１８ｓＲＮＡ，且无拖尾，可证明??所得到的总ＲＮＡ完整性较好；经核酸蛋白检测仪测得〇〇２８０／〇〇２６０平均值为１．％，可??用于盾续实验。??■??—?２８?泳ＮＡ??＂＊＊＾３—ＩＳｓＲＮＡ??ｆ??图２．５马菌总民ＮＡ凝胶电泳检测??Ｆｉｇｕｒｅ?２．５?Ｔｈｅ?Ａｇａｒｏｓｅ?ｇｅｌ?ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ?ｏｆ?ｔｏｔａｌ?ＲＮＡ?ｆｒｏｍ?／ｒ／ｓ?／ｏｃ化口??３．２马淸／／Ｗ基因核心片段扩増结果??马簡ｃＤＮＡ为模板进行ＰＣＲ扩增。扩増产物经凝胶电泳检测，得到约在９００?ｂｐ长度??的单一亮带，与目的片段的大小一致（图２．６），经测序结果分析发现，阳性克隆序列长??度为８９３?ｂｐ，编码巧７个氨基酸（图２．７）。??２１??
ｂｐ??圓??图２．７阳性克隆ＰＣ民鉴定??Ｆｉｇｕｒｅ?２．７?ＰＣＲ?ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏ打?ｏｆ?ｐｏｓｉｔｉｖｅ?ｃｌｏｎｅｓ??注：２，３－阳性克隆；Ｍａｒｌｃｅｒ－ＤＬ２０００ＤＮＡＭａｒｋｅｒ??Ｎｏｔｅ：?２，?３－Ｐｏｓｉｔｉｖｅ?ｃｌｏｎｅｓ；?Ｍａｒｋｅｒ－ＤＬ２０００?ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ??３．３马窗ＷＦ户基因３＇ＲＡ巧扩增结果??Ｗ３＇ＲＡＣＥｃＤＮＡ为模板，使用３＇ＶＰＦｌ与３＇ＶＰＲｌ引物进行巢式ＰＣＲ，凝胶电泳??检测外侧ＰＣ民产物没有条带，内侧ＰＣ民扩增产物得到约为１０００?ｂｐ的ＤＮＡ特异性目的??片段（图２．８），测序结果显示阳性克隆序列（图２．９）长度为１１１７ｂｐ。??２２??
【参考文献】：
期刊论文
[1]马蔺IlVP基因片段的克隆及序列分析[J]. 郭静雅,李杉杉,郭强,孟林,杨晓盆. 基因组学与应用生物学. 2015(12)
[2]园林造景地被植物——马蔺[J]. 李淑梅. 现代园艺. 2015(08)
[3]梭梭液泡膜焦磷酸酶HaVVP基因克隆及序列分析[J]. 甘晓燕,巩檑,石磊,宋玉霞. 西北农业学报. 2014(11)
[4]海滨雀稗液泡膜H+-PPase（PvVP1）5′端的克隆和序列分析[J]. 宋辉,南志标,蔡小宁,钟小仙,顾洪如. 草业学报. 2014(05)
[5]马蔺种质资源遗传多样性的ISSR分析[J]. 毛培春,孟林,田小霞. 华北农学报. 2013(06)
[6]16份马蔺种质材料苗期耐盐性评价[J]. 毛培春,田小霞,孟林. 草业科学. 2013(01)
[7]马蔺对铅尾砂土壤酶活性和铅形态的影响[J]. 原海燕,佟海英,黄苏珍. 生态环境学报. 2012(11)
[8]Na2CO3胁迫对马蔺幼苗生长量及生理特性的影响[J]. 张天殊,吴建慧,王可心,郭瑶. 东北林业大学学报. 2012(07)
[9]马蔺生物学特性分析[J]. 赵桂云. 吉林农业. 2011(06)
[10]NaCl胁迫对马蔺生长及生理生化指标的影响[J]. 张明轩,黄苏珍,绳仁立,原海燕. 植物资源与环境学报. 2011(01)
博士论文
[1]过量表达盐地碱蓬cDNA文库及SsNHX1-AVP1对拟南芥耐盐性的影响和盐地碱蓬FAD7基因cDNA的克隆与表达分析[D]. 张学杰.山东师范大学 2004
硕士论文
[1]农杆菌介导AVP1基因转化甜菜的研究[D]. 王晓娇.内蒙古农业大学 2011
[2]AVP1基因转化百脉根及其转基因植株的耐盐抗旱性研究[D]. 程星.兰州大学 2009
[3]黄瓜4种α-半乳糖苷酶的Southern杂交及表达分析[D]. 马静静.扬州大学 2008
[4]披碱草（Elymus dahuricus）氢离子焦磷酸化酶基因EdHP1的克隆及功能鉴定[D]. 董建辉.西北农林科技大学 2008
[5]NO供体SNP浸种预处理对盐胁迫下小麦种子萌发及幼苗生长的影响[D]. 段培.山东师范大学 2007
[6]KCl处理对盐地碱蓬液泡膜H～+-ATPase和H～+-PPase活性的影响[D]. 李圆圆.山东师范大学 2005
[7]NaCl胁迫对盐地碱蓬根、茎、叶液泡膜H～+-ATPase和H～+-PPase活性的影响[D]. 包华音.山东师范大学 2004
[8]盐地碱蓬SsVP和SsMAPKK基因的克隆与功能鉴定[D]. 尹海波.山东师范大学 2003
[9]NaCl和KCl胁迫对碱蓬生长及液泡膜质子泵活性的效应[D]. 杨明峰.山东师范大学 2002
本文编号：3299597
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