梅花成熟胚子叶再生体系的优化及PmMYBs基因转化研究
发布时间：2021-08-03 07:06
梅花（Prunus mume Sieb.et Zucc.）属于蔷薇科（Rosaceae）李属（Prunus）的落叶小乔木,在园林应用中具有十分重要的观赏价值。梅花喜温暖湿润的气候条件,在我国华北以及东北、西北的大部分地区很难安全露地越冬。通过遗传转化的方法能够快速获得符合人们意愿的新种质,而遗传转化的前提条件是完善再生体系。本研究主要以’雪梅’和’粉皮宫粉’杂交获得的梅花成熟胚子叶为材料,探索适合成熟胚子叶再生的最适基本培养基、激素组合、激素浓度以及培养条件,在前人研究的基础上进一步提高梅花子叶再生率;同时以梅花未成熟胚子叶和成熟胚子叶为受体,将PmMYBs基因转入梅花,获得了梅花转化植株。主要的研究成果如下:（1）成熟胚子叶再生体系的优化根据前人对李属植物子叶再生的研究状况,探索诱导梅花成熟胚子叶再生的最适培养基。经过比较激素TDZ、BA和IBA以及它们之间的交互作用,筛选出适合梅花成熟胚子叶再生的培养激素种类以及浓度组合,结果表明:以1/2 MS为基本培养基,在添加0.5 mg/L的BA、1.0 mg/L的TDZ和1.0 mg/L的IBA的培养基上可诱导子叶再生,添加500mg/L...
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：56 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１成熟胚子叶不定芽发生部位??Ａ：培养３ｄ后，子叶近胚芽端膨大；Ｂ：培养１４ｄ后，从子叶近胚芽端形成不定芽
待成熟胚子叶发芽至〇．５ｃｍ左右，放在伸长培养基中培养３０ｄ的实验结果表明，??在?１／２?ＭＳ＋ＢＡ?０．５?ｍｇ／Ｌ＋ＴＤＺ?１．０?ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ?１．０?ｍｇ／Ｌ＋ＣＨ?５００?ｍｇ／Ｌ?中，开始再生苗??长势较好，叶片翠绿，茎段正常增殖伸长，并没有叶片黄化现象（图２）。继续在原??培养基中培养２０ｄ，叶片边缘开始出现黄化，少部分再生苗出现茎尖枯萎现象，转??移到培养基?ＱＬ＋ＢＡ?０．１ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ?０．１?ｍｇ／Ｌ?生长较在?１／２?ＭＳ＋ＢＡ?０．５?ｍｇ／Ｌ＋ＴＤＺ１．０??ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ?１．０?ｍｇ／Ｌ＋ＣＨ?５００?ｍｇ／Ｌ培养基中长势有所改善
至丨Ｊ?９０．００％以上。将子叶转到培养基?１／２?ＭＳ＋ＢＡ?２．０?ｍｇ／Ｌ＋ＴＤＺ?０．２?ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ?０．５??ｍｇ／Ｌ＋Ｃｅｆ３００ｍｇ／Ｌ＋Ｋｍ２０ｉｎｇ／Ｌ，经过Ｋｍ筛选，７ｄ后，有部分子叶的诱导芽变为??白色，抗性芽在含有Ｋｍ的培养基上生长正常，叶片展开，颜色嫩绿（图３），筛选??３０ｄ后，在所获得的不定芽中８５．００％的芽已被筛死，统计所得到的抗性芽只有７６??株，抗性芽诱导率为０．７６％。??图３从梅花未成熟胚子叶中诱导抗性芽??Ａ：经过７ｄ的筛选，部分芽变为白色；Ｂ：经过３０ｄ的筛选，抗性芽在含有Ｋｍ的培养基上正常生长，叶片展??开。??Ｆｉｇ．３?Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ?ｏｆ?ｒｅｓｉｓｔａｎｔ?ｂｕｄｓ?ｆｒｏｍ?ｉｍｍａｔｕｒｅ?ｅｍｂｒｙｏ?ｃｏｔｙｌｅｄｏｎｓ??Ａ：?Ｐａｒｔｌｙ?ｂｕｄｓ?ｔｕｒｎｓ?ｗｈｉｔｅ?ａｆｔｅｒ?７ｄ?ｃｕｌｔｕｒｅｄ?ｉｎ?ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ?ｍｅｄｉｕｍ；?Ｂ：?ｒｅｓｉｓｔａｎｔ?ｂｕｄｓ?ｇｒｏｗｉｎｇ?ｎｏｒｍａｌｌｙ?ａｆｔｅｒ?３０ｄ?ｃｕｌｔｕｒｅｄ??ｉｎ?ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ?ｍｅｄｉｕｍ?ａｎｄ?ｌｅａｖｅｓ?ｅｘｐｌａｎｄ．??３０??
【参考文献】：
期刊论文
[1]根瘤农杆菌基因工程[J]. 柴志坚,张芳,黄园园,张春翔. 分子植物育种. 2016(01)
[2]‘雪梅’未成熟合子胚体胚发生与植株再生[J]. 杨洁,闻娟,晏晓兰,包满珠,张俊卫. 北京林业大学学报. 2013(S1)
[3]植物次生生长相关MYB转录因子研究进展[J]. 薛英喜,魏建华,姜廷波,王宏芝. 安徽农业科学. 2012(13)
[4]4个梅花品种的胚培养及愈伤组织诱导研究[J]. 石文芳,郝瑞杰,王史琴,张启翔. 中国农学通报. 2012(10)
[5]论梅花景观植物配置与造景[J]. 梁英梅. 中国园艺文摘. 2011(08)
[6]外源激素配比对樱桃叶片再生体系的影响[J]. 侯思宇,孙朝霞,王玉国. 山西农业大学学报(自然科学版). 2011(02)
[7]梅花不同外植体离体培养及体细胞胚诱导植株再生[J]. 宁国贵,吕海燕,张俊卫,包满珠. 园艺学报. 2010(01)
[8]桃下胚轴高频离体再生体系的建立及优化[J]. 康卓慧,田国栋,赵彩平,韩明玉,刘航空,田玉命. 西北植物学报. 2009(12)
[9]中国梅花品种群分类新方案并论种间杂交起源品种群之发展优势[J]. 陈俊愉,陈瑞丹. 园艺学报. 2009(05)
[10]赤霉素作用机制研究进展[J]. 张国华,张艳洁,丛日晨,赵琦,董克奇,古润泽. 西北植物学报. 2009(02)
博士论文
[1]沙冬青ErbB3结合蛋白基因转化杏的研究[D]. 牛庆霖.山东农业大学 2014
[2]李离体再生体系的建立及愈伤组织分化相关microRNA分析[D]. 姚延兴.华中农业大学 2011
[3]桃主要性状遗传分析与再生体系的建立[D]. 韩明玉.西北农林科技大学 2009
[4]桃组织培养及遗传转化的研究[D]. 吴延军.浙江大学 2004
[5]抗寒梅花品种区域试验及离体培养的研究[D]. 张秦英.北京林业大学 2004
硕士论文
[1]毛桃离体再生体系优化及遗传转化初探[D]. 王秀.华中农业大学 2014
[2]真梅系梅花再生体系研究[D]. 朱丹红.北京林业大学 2013
[3]梅花快繁体系的建立及其影响因子的研究[D]. 杨丽青.华中农业大学 2013
[4]茶树组织培养再生体系优化与遗传转化的研究[D]. 许益娟.南京农业大学 2012
[5]中国樱桃组培快繁及再生体系的建立[D]. 郑巧娜.山东农业大学 2011
[6]中国李‘Nubiana’愈伤组织诱导、保存及植株再生研究[D]. 孙源蔚.华中农业大学 2010
[7]桃再生体系的优化与反义PG基因遗传转化的研究[D]. 张亚林.甘肃农业大学 2010
[8]桃（Prunus persica（L.）Batsch）子叶和下胚轴再生体系的建立[D]. 康卓慧.西北农林科技大学 2010
[9]李叶柄（叶片）离体培养与植株再生的研究[D]. 张陆阳.华中农业大学 2009
[10]桃（Prunus persica（L.）Batsch）离体快繁体系的建立及叶片再生研究[D]. 丛芳.西北农林科技大学 2009
本文编号：3319185
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：56 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１成熟胚子叶不定芽发生部位??Ａ：培养３ｄ后，子叶近胚芽端膨大；Ｂ：培养１４ｄ后，从子叶近胚芽端形成不定芽
待成熟胚子叶发芽至〇．５ｃｍ左右，放在伸长培养基中培养３０ｄ的实验结果表明，??在?１／２?ＭＳ＋ＢＡ?０．５?ｍｇ／Ｌ＋ＴＤＺ?１．０?ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ?１．０?ｍｇ／Ｌ＋ＣＨ?５００?ｍｇ／Ｌ?中，开始再生苗??长势较好，叶片翠绿，茎段正常增殖伸长，并没有叶片黄化现象（图２）。继续在原??培养基中培养２０ｄ，叶片边缘开始出现黄化，少部分再生苗出现茎尖枯萎现象，转??移到培养基?ＱＬ＋ＢＡ?０．１ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ?０．１?ｍｇ／Ｌ?生长较在?１／２?ＭＳ＋ＢＡ?０．５?ｍｇ／Ｌ＋ＴＤＺ１．０??ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ?１．０?ｍｇ／Ｌ＋ＣＨ?５００?ｍｇ／Ｌ培养基中长势有所改善
至丨Ｊ?９０．００％以上。将子叶转到培养基?１／２?ＭＳ＋ＢＡ?２．０?ｍｇ／Ｌ＋ＴＤＺ?０．２?ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ?０．５??ｍｇ／Ｌ＋Ｃｅｆ３００ｍｇ／Ｌ＋Ｋｍ２０ｉｎｇ／Ｌ，经过Ｋｍ筛选，７ｄ后，有部分子叶的诱导芽变为??白色，抗性芽在含有Ｋｍ的培养基上生长正常，叶片展开，颜色嫩绿（图３），筛选??３０ｄ后，在所获得的不定芽中８５．００％的芽已被筛死，统计所得到的抗性芽只有７６??株，抗性芽诱导率为０．７６％。??图３从梅花未成熟胚子叶中诱导抗性芽??Ａ：经过７ｄ的筛选，部分芽变为白色；Ｂ：经过３０ｄ的筛选，抗性芽在含有Ｋｍ的培养基上正常生长，叶片展??开。??Ｆｉｇ．３?Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ?ｏｆ?ｒｅｓｉｓｔａｎｔ?ｂｕｄｓ?ｆｒｏｍ?ｉｍｍａｔｕｒｅ?ｅｍｂｒｙｏ?ｃｏｔｙｌｅｄｏｎｓ??Ａ：?Ｐａｒｔｌｙ?ｂｕｄｓ?ｔｕｒｎｓ?ｗｈｉｔｅ?ａｆｔｅｒ?７ｄ?ｃｕｌｔｕｒｅｄ?ｉｎ?ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ?ｍｅｄｉｕｍ；?Ｂ：?ｒｅｓｉｓｔａｎｔ?ｂｕｄｓ?ｇｒｏｗｉｎｇ?ｎｏｒｍａｌｌｙ?ａｆｔｅｒ?３０ｄ?ｃｕｌｔｕｒｅｄ??ｉｎ?ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ?ｍｅｄｉｕｍ?ａｎｄ?ｌｅａｖｅｓ?ｅｘｐｌａｎｄ．??３０??
【参考文献】：
期刊论文
[1]根瘤农杆菌基因工程[J]. 柴志坚,张芳,黄园园,张春翔. 分子植物育种. 2016(01)
[2]‘雪梅’未成熟合子胚体胚发生与植株再生[J]. 杨洁,闻娟,晏晓兰,包满珠,张俊卫. 北京林业大学学报. 2013(S1)
[3]植物次生生长相关MYB转录因子研究进展[J]. 薛英喜,魏建华,姜廷波,王宏芝. 安徽农业科学. 2012(13)
[4]4个梅花品种的胚培养及愈伤组织诱导研究[J]. 石文芳,郝瑞杰,王史琴,张启翔. 中国农学通报. 2012(10)
[5]论梅花景观植物配置与造景[J]. 梁英梅. 中国园艺文摘. 2011(08)
[6]外源激素配比对樱桃叶片再生体系的影响[J]. 侯思宇,孙朝霞,王玉国. 山西农业大学学报(自然科学版). 2011(02)
[7]梅花不同外植体离体培养及体细胞胚诱导植株再生[J]. 宁国贵,吕海燕,张俊卫,包满珠. 园艺学报. 2010(01)
[8]桃下胚轴高频离体再生体系的建立及优化[J]. 康卓慧,田国栋,赵彩平,韩明玉,刘航空,田玉命. 西北植物学报. 2009(12)
[9]中国梅花品种群分类新方案并论种间杂交起源品种群之发展优势[J]. 陈俊愉,陈瑞丹. 园艺学报. 2009(05)
[10]赤霉素作用机制研究进展[J]. 张国华,张艳洁,丛日晨,赵琦,董克奇,古润泽. 西北植物学报. 2009(02)
博士论文
[1]沙冬青ErbB3结合蛋白基因转化杏的研究[D]. 牛庆霖.山东农业大学 2014
[2]李离体再生体系的建立及愈伤组织分化相关microRNA分析[D]. 姚延兴.华中农业大学 2011
[3]桃主要性状遗传分析与再生体系的建立[D]. 韩明玉.西北农林科技大学 2009
[4]桃组织培养及遗传转化的研究[D]. 吴延军.浙江大学 2004
[5]抗寒梅花品种区域试验及离体培养的研究[D]. 张秦英.北京林业大学 2004
硕士论文
[1]毛桃离体再生体系优化及遗传转化初探[D]. 王秀.华中农业大学 2014
[2]真梅系梅花再生体系研究[D]. 朱丹红.北京林业大学 2013
[3]梅花快繁体系的建立及其影响因子的研究[D]. 杨丽青.华中农业大学 2013
[4]茶树组织培养再生体系优化与遗传转化的研究[D]. 许益娟.南京农业大学 2012
[5]中国樱桃组培快繁及再生体系的建立[D]. 郑巧娜.山东农业大学 2011
[6]中国李‘Nubiana’愈伤组织诱导、保存及植株再生研究[D]. 孙源蔚.华中农业大学 2010
[7]桃再生体系的优化与反义PG基因遗传转化的研究[D]. 张亚林.甘肃农业大学 2010
[8]桃（Prunus persica（L.）Batsch）子叶和下胚轴再生体系的建立[D]. 康卓慧.西北农林科技大学 2010
[9]李叶柄（叶片）离体培养与植株再生的研究[D]. 张陆阳.华中农业大学 2009
[10]桃（Prunus persica（L.）Batsch）离体快繁体系的建立及叶片再生研究[D]. 丛芳.西北农林科技大学 2009
本文编号：3319185
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