梨砧木云南榅桲离体植株再生及OHF333的遗传转化
发布时间：2021-08-03 07:49
梨是我国的重要果树树种之一,选育具有优良性状的矮化砧木对于梨树生产具有重大的现实意义。利用植物基因工程是扩大现有砧木种质资源的重要途径,但首先要建立稳定的再生系统。为此,本研究分别以梨的矮化砧木云南榅桲（Cydonia oblonga Mill.）和OHF333（Pyrus communis）为实验材料,建立了云南榅桲的叶片再生和薄层细胞（Thin cell layer,TCL）再生体系,并通过农杆菌介导法将参与梨花青苷合成的PbMYB9基因导入OHF333的基因组中。主要结果如下:1.云南榅桲离体叶片高效再生体系的建立以云南榅桲离体叶片为外植体,研究了不同浓度的TDZ和NAA组合、不同暗培养时间及取材部位对叶片再生不定芽的影响。结果表明,云南榅桲叶片再生不定芽的最适组合为选取试管苗顶部幼嫩叶片,放置于含有0.5 mg/L NAA和1.0 mg/L TDZ的MS培养基上,暗培养20d,叶片再生频率最高为88.9%,平均再生芽数为7.97。叶片再生苗在生根培养基1/2 MS+NAA 0.3 mg/L,暗培养5d,生根率为85.6%,平均生根条数为3.1。2.云南榅桲薄层细胞再生体系的建立...
【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：49 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
1.1 梨矮化砧木利用和研究进展
1.1.1 榅桲属砧木的研究
1.1.2 梨属砧木的研究
1.2 榅桲的组织培养研究进展
1.2.1 榅桲离体叶片再生的研究进展
1.2.2 薄层培养的研究进展
1.3 农杆菌介导的梨的遗传转化研究进展
1.3.1 取得转化成功的梨品种
1.3.2 梨中转入的外源基因类型
1.3.3 转化成功的外植体类型
1.3.4 影响梨遗传转化的因素
1.4 MYB转录因子在花青苷合成中的研究进展
1.4.1 花青苷的生物合成
1.4.2 花青苷合成中的MYB转录因子
1.4.3 MYB转录因子的遗传转化研究
1.5 研究的目的和意义
第二章 云南榅桲离体再生体系的建立
2.1 实验材料
2.2 试验方法
2.2.1 云南榅桲茎段离体培养
2.2.2 云南榅桲叶片再生体系的建立
2.2.3 云南榅桲TCL再生体系的建立
2.2.4 培养条件
2.2.5 再生体系的统计分析
2.3 结果与分析
2.3.1 云南榅桲离体叶片不定芽再生动态过程
2.3.2 不同浓度的TDZ和NAA组合对叶片再生不定芽的影响
2.3.3 暗培养时间对叶片再生不定芽的影响
2.3.4 不同取材部位对叶片再生不定芽的影响
2.3.5 不同质量浓度的NAA对不定芽生根的影响
2.3.6 云南榅桲TCL再生的动态过程
2.3.7 不同质量浓度的TDZ和NAA对TCL再生的影响
2.3.8 TCL再生不定芽的倍性检测
2.4 讨论
2.4.1 云南榅桲离体叶片再生体系的优化
2.4.2 薄层培养再生体系的优化
2.5 小结
第三章 OHF333的遗传转化
3.1 实验材料
3.1.1 农杆菌菌株及质粒
3.1.2 植物材料
3.1.3 遗传转化基本培养基
3.1.4 细菌培养基
3.2 方法
3.2.1 农杆菌的活化和工程菌液的制备
3.2.3 侵染与共培养
3.2.4 延时筛选和筛选培养
3.2.5 抗性愈伤的增殖
3.2.6 抗性愈伤的PCR检测
3.3 结果与分析
3.3.1 抗性愈伤的获得
3.3.2 抗性愈伤的PCR检测
3.4 讨论
3.4.1 菌株和受体类型对遗传转化的影响
3.4.2 预培养时间对转化率的影响
3.4.3 共培养时间对遗传转化的影响
3.4.4 受体材料对抗生素的敏感性
3.4.5 诱导抗性愈伤分化不定芽
3.5 小结
第四章 结论
参考文献
英文缩写词
致谢
作者简介
本文编号：3319237
【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：49 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
1.1 梨矮化砧木利用和研究进展
1.1.1 榅桲属砧木的研究
1.1.2 梨属砧木的研究
1.2 榅桲的组织培养研究进展
1.2.1 榅桲离体叶片再生的研究进展
1.2.2 薄层培养的研究进展
1.3 农杆菌介导的梨的遗传转化研究进展
1.3.1 取得转化成功的梨品种
1.3.2 梨中转入的外源基因类型
1.3.3 转化成功的外植体类型
1.3.4 影响梨遗传转化的因素
1.4 MYB转录因子在花青苷合成中的研究进展
1.4.1 花青苷的生物合成
1.4.2 花青苷合成中的MYB转录因子
1.4.3 MYB转录因子的遗传转化研究
1.5 研究的目的和意义
第二章 云南榅桲离体再生体系的建立
2.1 实验材料
2.2 试验方法
2.2.1 云南榅桲茎段离体培养
2.2.2 云南榅桲叶片再生体系的建立
2.2.3 云南榅桲TCL再生体系的建立
2.2.4 培养条件
2.2.5 再生体系的统计分析
2.3 结果与分析
2.3.1 云南榅桲离体叶片不定芽再生动态过程
2.3.2 不同浓度的TDZ和NAA组合对叶片再生不定芽的影响
2.3.3 暗培养时间对叶片再生不定芽的影响
2.3.4 不同取材部位对叶片再生不定芽的影响
2.3.5 不同质量浓度的NAA对不定芽生根的影响
2.3.6 云南榅桲TCL再生的动态过程
2.3.7 不同质量浓度的TDZ和NAA对TCL再生的影响
2.3.8 TCL再生不定芽的倍性检测
2.4 讨论
2.4.1 云南榅桲离体叶片再生体系的优化
2.4.2 薄层培养再生体系的优化
2.5 小结
第三章 OHF333的遗传转化
3.1 实验材料
3.1.1 农杆菌菌株及质粒
3.1.2 植物材料
3.1.3 遗传转化基本培养基
3.1.4 细菌培养基
3.2 方法
3.2.1 农杆菌的活化和工程菌液的制备
3.2.3 侵染与共培养
3.2.4 延时筛选和筛选培养
3.2.5 抗性愈伤的增殖
3.2.6 抗性愈伤的PCR检测
3.3 结果与分析
3.3.1 抗性愈伤的获得
3.3.2 抗性愈伤的PCR检测
3.4 讨论
3.4.1 菌株和受体类型对遗传转化的影响
3.4.2 预培养时间对转化率的影响
3.4.3 共培养时间对遗传转化的影响
3.4.4 受体材料对抗生素的敏感性
3.4.5 诱导抗性愈伤分化不定芽
3.5 小结
第四章 结论
参考文献
英文缩写词
致谢
作者简介
本文编号：3319237
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