蜻蜓凤梨AfSBP7旳克隆及功能鉴定

发布时间：2021-08-13 02:49

　　观赏凤梨为多年生草本植物,在我国的热带、亚热带地区都有种植,是仅次于兰花和红掌的重要热带花卉。观赏凤梨在自然生长的条件下开花慢,因此目前市场上,多用乙烯及其衍生物诱导其开花。由于乙烯催花机理尚不清楚,所以生产上常常有因乙烯催花质量不佳而造成经济损失的情况发生。因此,探究并阐明观赏凤梨开花机理尤为重要。蜻蜒凤梨（Aechmea fasciata）为观赏凤梨的一种,花呈粉红色,故又名斑粉菠萝。本实验以蜻蜒凤梨为材料,对蜻蜒凤梨的转录组数据进行分析,获得一个与拟南芥（Arabidopsis thaliana）SQUAMOSA Promoter-binding Protein-like（SPL）家族同源的序列片段,通过RACE（rapid amplification of cDNA ends）技术狭得3’和5’端序列,拼接得到cDNA序列全长2438 bp,开放阅读框全长1194 bp,编码398个氨基酸,并将其命名为AfS8P7。对AfSBP7的蛋白结构进行分析,发现它有SPL家族独有的SBP结构域,属于蜻蜒凤梨SPL家族。将它与拟南芥SPL家族成员进行进化树分析,结果显示它与拟南芥AtSP... 

【文章来源】：海南大学海南省 211工程院校

【文章页数】：64 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
1. 前言
    1.1 文献综述
        1.1.1 蜻蜓凤梨
        1.1.2 植物的开花及其调控
        1.1.3 SPL是一类重要的转录因子
        1.1.4 拟南芥中的SPL家族
        1.1.5 SPL基因家族在其他物种中的重要作用
    1.2 酵母单杂交实验原理
    1.3 实时荧光定量PCR技术
    1.4 研究的目的与意义
    1.5 研究的技术路线
2 材料和方法
    2.1 材料
        2.1.1 植物材料与菌种质粒
        2.1.2 药品与试剂
    2.2 方法
        2.2.1 蜻蜓凤梨总RNA的提取
        2.2.2 RACE拼接获得AfSBP7基因全长
        2.2.3 AfSBP7的生物信息学分析
        2.2.4 AfSBP7转录活性的验证
        2.2.5 使用荧光定量对蜻蜓凤梨AfSBP7的表达量进行分析
        2.2.6 CaMV35S::AfSBP7过表达载体的构建
        2.2.7 将构建成功的过表达载体转化到农杆菌中
        2.2.8 拟南芥的遗传转化
3 结果与分析
    3.1 蜻蜓凤梨总RNA的提取
    3.2 蜻蜓凤梨AfSBP7编码区序列全长的获得
    3.3. AfSBP7的生物信息学分析
        3.3.1 阅读框
        3.3.2 基因系统进化树分析、同源性比对分析和结构域分析
    3.4 AfSBP7转录激活结构域的验证
        3.4.1 酵母pGBKT7-AfSBP7表达载体的构建
        3.4.2. 鉴定AfSBP7是否具有转录激活结构域
    3.5 AfSBP7的组织特异性表达分析
        3.5.1 溶解曲线分析
        3.5.2 标准曲线制作结果
        3.5.3 AfSBP7成株幼株昼夜节律表达分析
        3.5.4 AfSBP7在组织器官里的表达分析
        3.5.5 AfSBP7在不同时期里根、茎、叶的表达分析
        3.5.6 AfSBP7成株幼株对乙烯的响应
    3.6 AfSBP7基因的功能分析
        3.6.1. CaMV35S::AfSBP7表达载体的构建
        3.6.2 CaMV35S::AfSBP7转拟南芥植株的分子鉴定
        3.6.3 CaMV35S::AfSBP7表型分析
4 讨论
    4.1 蜻蜓凤梨AfSBP7蛋白相关的生物信息学分析
    4.2 AfSBP7转录激活结构域分析
    4.3 AfSBP7组织特异性分析
    4.4 AfSBP7基因的功能分析
5 结论
6 参考文献
7 中英文缩略语
8 附录
    附录1 引物序列
    附录2：实验中常用的培养基及药瓶配方
    附录3：实验中所用到的实验设备
    附录4：酵母单杂交结果
    附录5：作者简历
9. 致谢



本文编号：3339590