蜡梅脱腺苷酸酶基因CpCAF1的克隆及功能分析
发布时间：2021-08-14 18:21
蜡梅【Chimonanthus praecox（L.）Link】为蜡梅科蜡梅属的落叶乔灌木植物,是我国特产的传统名花,具有较高的经济价值和观赏价值。CAF1是一种脱腺苷酸酶,在m RNA降解中起着重要作用,脱腺苷酸化作用是大多数真核细胞m RNA降解的第一步。m RNA降解可以对过时的m RNA进行及时清除,同时对发生突变有害的m RNA进行降解,能够保证细胞正常的生命活动,也可以引起基因表达变化、改变生物学性状,作为基因表达转录后调控的关键步骤之一,对生物转录组重建起重要作用。目前仅有拟南芥、辣椒和水稻CAF1基因功能的研究报导,其结果表明该基因在植物的生长发育及生物和非生物胁迫的应答过程中发挥重要作用。1.CpCAF1基因的结构特征和编码蛋白特征在以构建的蜡梅花c DNA文库基础上,通过随机测序的方法获得CpCAF1基因的c DNA序列。DNAstar软件分析发现,获得的c DNA序列包含一个807bp的完整开放阅读框（Open Reading Frame,ORF）;Prot Param软件在线预测结果表明:蜡梅CpCAF1基因编码269个氨基酸,预测分子式为C1371H2087N...
【文章来源】：西南大学重庆市 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：88 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第1章 文献综述
1.1 蜡梅研究进展
1.1.1 我国蜡梅栽培简史
1.1.2 世界蜡梅属植物的种类与分布
1.1.3 中国蜡梅属植物的种类与分布
1.1.4 蜡梅的品种分类研究进展
1.1.5 蜡梅的生物学特性
1.1.6 蜡梅分子生物学研究
1.1.7 蜡梅的应用研究
1.2 mRNA降解的研究进展
1.2.1 mRNA的降解方式
1.3 脱腺苷酸化酶的研究进展
1.4 CAF1基因的研究进展
第2章 引言
2.1 研究背景
2.2 研究目的、内容和意义
2.3 研究技术路线
第3章 蜡梅脱腺苷酸化酶基因CpCAF1的克隆和分子特征分析
3.1 实验材料
3.1.1 蜡梅cDNA文库及植物材料
3.1.2 菌株与载体
3.1.3 主要试剂及试剂盒
3.1.4 主要仪器设备
3.1.5 自配的主要试剂
3.2 实验方法
3.2.1 EST序列特征分析及目标克隆子的鉴定
3.2.2 蜡梅脱腺苷酸酶基因CpCAF1 cDNA序列的获得
3.2.3 蜡梅脱腺苷酸化酶基因CpCAF1的生物信息学分析
3.3 结果与分析
3.3.1 蜡梅CpCAF1基因全长cDNA的获得及其序列特征
3.3.2 蜡梅CpCAF1基因编码蛋白同源性分析
3.3.3 蜡梅CpCAF1基因编码蛋白的基本特征预测分析
3.4 讨论
第4章 蜡梅CpCAF1基因的表达特性分析
4.1 实验材料
4.1.1 植物材料
4.1.2 主要试剂
4.1.3 主要仪器设备
4.2 实验方法
4.2.1 蜡梅不同组织、不同时期及不同胁迫处理材料的采集
4.2.2 总RNA的提取及cDNA第一链的获得
4.2.3 CpCAF1基因表达特性的实时荧光定量分析
4.3 结果与分析
4.3.1 蜡梅总RNA提取
4.3.2 CpCAF1基因的表达特性分析
4.4 讨论
第5章 蜡梅CpCAF1基因表达载体的构建及拟南芥遗传转化研究
5.1 实验材料
5.1.1 植物材料
5.1.2 载体及菌株
5.1.3 试剂盒及主要试剂
5.1.4 自配的主要试剂
5.2 实验方法
5.2.1 蜡梅CpCAF1基因植物超表达载体的构建
5.2.2 农杆菌EHA105冻融法感受态的制备
5.2.3 冻融法转化农杆菌EHA105感受态细胞
5.2.4 农杆菌转化子的PCR鉴定及反转化大肠杆菌鉴定
5.2.5 花序侵染法转化拟南芥
5.2.6 转基因拟南芥的筛选鉴定
5.2.7 转CpCAF1基因拟南芥的表型观察
5.2.8 转CpCAF1基因拟南芥的冷害胁迫研究
5.2.9 非损伤微测技术
5.3 结果与分析
5.3.1 蜡梅CpCAF1基因植物表达载体的构建
5.3.2 转基因拟南芥的筛选鉴定
5.3.3 转基因拟南芥表型观察
5.3.4 转基因拟南芥的冷害胁迫研究
5.3.5 CpCAF1基因对拟南芥钾分子机理
5.4 讨论
5.4.1 蜡梅CpCAF1基因参与拟南芥的生长发育调控
5.4.2 蜡梅CpCAF1基因增强拟南芥抗寒性
5.4.3 蜡梅CpCAF1基因影响拟南芥根系对钾离子吸收
第6章 总结
6.1 主要结果
6.1.1 CpCAF1基因的结构特征和编码蛋白特征
6.1.2 CpCAF1基因在蜡梅中的表达特征分析
6.1.3 CpCAF1基因转拟南芥的遗传研究
6.2 下一步计划
参考文献
致谢
本文编号：3342957
【文章来源】：西南大学重庆市 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：88 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第1章 文献综述
1.1 蜡梅研究进展
1.1.1 我国蜡梅栽培简史
1.1.2 世界蜡梅属植物的种类与分布
1.1.3 中国蜡梅属植物的种类与分布
1.1.4 蜡梅的品种分类研究进展
1.1.5 蜡梅的生物学特性
1.1.6 蜡梅分子生物学研究
1.1.7 蜡梅的应用研究
1.2 mRNA降解的研究进展
1.2.1 mRNA的降解方式
1.3 脱腺苷酸化酶的研究进展
1.4 CAF1基因的研究进展
第2章 引言
2.1 研究背景
2.2 研究目的、内容和意义
2.3 研究技术路线
第3章 蜡梅脱腺苷酸化酶基因CpCAF1的克隆和分子特征分析
3.1 实验材料
3.1.1 蜡梅cDNA文库及植物材料
3.1.2 菌株与载体
3.1.3 主要试剂及试剂盒
3.1.4 主要仪器设备
3.1.5 自配的主要试剂
3.2 实验方法
3.2.1 EST序列特征分析及目标克隆子的鉴定
3.2.2 蜡梅脱腺苷酸酶基因CpCAF1 cDNA序列的获得
3.2.3 蜡梅脱腺苷酸化酶基因CpCAF1的生物信息学分析
3.3 结果与分析
3.3.1 蜡梅CpCAF1基因全长cDNA的获得及其序列特征
3.3.2 蜡梅CpCAF1基因编码蛋白同源性分析
3.3.3 蜡梅CpCAF1基因编码蛋白的基本特征预测分析
3.4 讨论
第4章 蜡梅CpCAF1基因的表达特性分析
4.1 实验材料
4.1.1 植物材料
4.1.2 主要试剂
4.1.3 主要仪器设备
4.2 实验方法
4.2.1 蜡梅不同组织、不同时期及不同胁迫处理材料的采集
4.2.2 总RNA的提取及cDNA第一链的获得
4.2.3 CpCAF1基因表达特性的实时荧光定量分析
4.3 结果与分析
4.3.1 蜡梅总RNA提取
4.3.2 CpCAF1基因的表达特性分析
4.4 讨论
第5章 蜡梅CpCAF1基因表达载体的构建及拟南芥遗传转化研究
5.1 实验材料
5.1.1 植物材料
5.1.2 载体及菌株
5.1.3 试剂盒及主要试剂
5.1.4 自配的主要试剂
5.2 实验方法
5.2.1 蜡梅CpCAF1基因植物超表达载体的构建
5.2.2 农杆菌EHA105冻融法感受态的制备
5.2.3 冻融法转化农杆菌EHA105感受态细胞
5.2.4 农杆菌转化子的PCR鉴定及反转化大肠杆菌鉴定
5.2.5 花序侵染法转化拟南芥
5.2.6 转基因拟南芥的筛选鉴定
5.2.7 转CpCAF1基因拟南芥的表型观察
5.2.8 转CpCAF1基因拟南芥的冷害胁迫研究
5.2.9 非损伤微测技术
5.3 结果与分析
5.3.1 蜡梅CpCAF1基因植物表达载体的构建
5.3.2 转基因拟南芥的筛选鉴定
5.3.3 转基因拟南芥表型观察
5.3.4 转基因拟南芥的冷害胁迫研究
5.3.5 CpCAF1基因对拟南芥钾分子机理
5.4 讨论
5.4.1 蜡梅CpCAF1基因参与拟南芥的生长发育调控
5.4.2 蜡梅CpCAF1基因增强拟南芥抗寒性
5.4.3 蜡梅CpCAF1基因影响拟南芥根系对钾离子吸收
第6章 总结
6.1 主要结果
6.1.1 CpCAF1基因的结构特征和编码蛋白特征
6.1.2 CpCAF1基因在蜡梅中的表达特征分析
6.1.3 CpCAF1基因转拟南芥的遗传研究
6.2 下一步计划
参考文献
致谢
本文编号：3342957
本文链接：https://www.wllwen.com/nykjlw/yylw/3342957.html
