‘魁绿’、‘绿王’等六份软枣猕猴桃资源超低温保存方法研究
发布时间：2021-08-17 02:09
软枣猕猴桃（Actinidia arguta）是我国珍贵的抗寒果树之一,是猕猴桃品种改良的重要种质资源,其果实富含Vc,营养丰富,是新兴的珍贵果品。目前,其野生资源遭到严重破坏,天然基因库受到威胁,而常规保存方法如异地保存与组织培养等易受环境及人为影响,保存能力有限,且占用资源大,因此,探索新的中长期保存方法具有重要意义。超低温保存是目前最为理想且应用最为广泛的种质资源长期保存的方法。本研究分别以软枣猕猴桃休眠芽、茎尖和花粉为试材,研究了休眠芽玻璃化超低温保存方法、组培苗茎尖小滴玻璃化超低温保存方法和花粉的离体保存,旨在建立简单、高效的软枣猕猴桃种质资源保存体系,以期为软枣猕猴桃生产、育种和资源保存提供参考。1.建立了软枣猕猴桃休眠芽玻璃化法超低温保存体系。‘魁绿’单芽茎段最佳的灭菌方法是茎段去皮后用75%酒精浸泡30 s,无菌水洗涤45次,然后用0.1%HgCl2灭菌30 min,无菌水洗涤45次。灭菌后剥取休眠芽放入0.3 mol·L-1蔗糖+1 mol·L-1甘油的MS预培养液中震荡培养2 d,常温下用2 mol·L-1甘油+0.4 m...
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：61 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
灭菌前不同单芽茎段处理方式及接种Fig.2-1Differentsingletreatmentmethodsofbudstemsandinoculationbeforesterilization
??诰テぶ校?虼嗣鹁?笨山?邪?テご?恚?休眠枝条不同处理方式的灭菌效果如表2-3所示。从表中可知，用0.1%HgCl2灭菌，带皮茎段灭菌后接种的休眠芽的污染率均较高，在77.78%以上，最高可达90.56%，均显著高于去皮茎段（最高27.42%）和裸露休眠芽（最高18.33%）灭菌组的污染率。通过比较去皮茎段和裸露休眠芽两组之间的未污染芽成活率和总成活率可以看出，裸露休眠芽灭菌后未污染芽成活率最高仅为54.17%，总成活率最高为43.89%，均显著低于去皮茎段各处理组。因此，去皮茎段的灭菌效果最佳。灭菌后休眠芽培养5天就开始萌发（图2-2a），且均能发育为植株（图2-2b）。图2-2灭菌后休眠芽发育成活Fig.2-2Dormantbudsdevelopandsurviveaftersterilizationa灭菌后休眠芽萌发；b休眠芽发育为植株。aDormantbudsgerminateaftersterilization;bDormantbudsdevelopintoplants.2.2.1.2灭菌剂种类对灭菌效果的影响本试验中去皮茎段和裸露休眠芽均采用0.1%HgCl2和5%NaClO两种灭菌剂进行灭菌。灭菌相同时间，0.1%HgCl2灭菌组的污染率均低于5%NaClO灭菌组，且去皮茎段用0.1%HgCl2灭菌后的总成活率也较5%NaClO灭菌组高，说明用0.1%HgCl2灭菌的效果优于用5%NaClO灭菌的
中国农业科学院硕士学位论文第二章软枣猕猴桃休眠芽玻璃化法超低温保存技术研究152.2.2玻璃化法对冻后休眠芽成活率的影响2.2.2.1预培养液对超低温保存后‘魁绿’休眠芽成活率的影响高浓度的蔗糖可诱导细胞脱水，从而增加细胞的抗冻能力，在培养液中也可加入冷冻保护剂DMSO、甘油等提高冷冻成活率（冯超红，2014）。预培养液选择蔗糖和甘油为渗透保护物质，将休眠芽置于含不同浓度的蔗糖和甘油的MS预培养液中进行震荡培养，结果如图2-3所示。试验结果表明，不同浓度蔗糖和甘油的预培养液对‘魁绿’休眠芽的成活率影响较大，随着预培养液中蔗糖浓度的增加，休眠芽成活率呈下降趋势。在0.3mol·L-1蔗糖和0.3mol·L-1蔗糖+1mol·L-1甘油的MS预培养液中培养的休眠芽成活率最高，分别为75.93%和84.72%，两者之间无显著差异。含0.7mol·L-1蔗糖和不同浓度甘油的MS预培养液中培养的休眠芽成活率均较低。分析结果表明蔗糖浓度是影响休眠芽成活率的主要因素，甘油作为渗透保护液起部分作用。含2mol·L-1甘油和不同浓度蔗糖的MS预培养液中培养的休眠芽成活率较低，可能原因是渗透保护物质浓度较高，对休眠芽产生了渗透胁迫，破坏了细胞结构，使一部分细胞失去活力。图2-3不同预培养液对冻后休眠芽成活率的影响Fig.2-3Effectofdifferentpreculturedfluidsonsurvivalrateofdormantbudsaftercryopreservation不同字母表示在0.05水平上差异显著。下同。Differentlettersindicatesignificantdifferenceatthe0.05level.Thesamebelow.2.2.2.2预培养时间对超低温保存后‘魁绿’休眠芽成活率的影响张延红（2013）研究表明，预培养可以改善植物材料的生理状态，一定时间的预培养有利于提高保存材料的成活率。研究发现，预培养不同时间超低温保存后休眠芽的成活率存在差异?
本文编号：3346845
【文章来源】：中国农业科学院北京市
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【学位级别】：硕士
【部分图文】：
灭菌前不同单芽茎段处理方式及接种Fig.2-1Differentsingletreatmentmethodsofbudstemsandinoculationbeforesterilization
??诰テぶ校?虼嗣鹁?笨山?邪?テご?恚?休眠枝条不同处理方式的灭菌效果如表2-3所示。从表中可知，用0.1%HgCl2灭菌，带皮茎段灭菌后接种的休眠芽的污染率均较高，在77.78%以上，最高可达90.56%，均显著高于去皮茎段（最高27.42%）和裸露休眠芽（最高18.33%）灭菌组的污染率。通过比较去皮茎段和裸露休眠芽两组之间的未污染芽成活率和总成活率可以看出，裸露休眠芽灭菌后未污染芽成活率最高仅为54.17%，总成活率最高为43.89%，均显著低于去皮茎段各处理组。因此，去皮茎段的灭菌效果最佳。灭菌后休眠芽培养5天就开始萌发（图2-2a），且均能发育为植株（图2-2b）。图2-2灭菌后休眠芽发育成活Fig.2-2Dormantbudsdevelopandsurviveaftersterilizationa灭菌后休眠芽萌发；b休眠芽发育为植株。aDormantbudsgerminateaftersterilization;bDormantbudsdevelopintoplants.2.2.1.2灭菌剂种类对灭菌效果的影响本试验中去皮茎段和裸露休眠芽均采用0.1%HgCl2和5%NaClO两种灭菌剂进行灭菌。灭菌相同时间，0.1%HgCl2灭菌组的污染率均低于5%NaClO灭菌组，且去皮茎段用0.1%HgCl2灭菌后的总成活率也较5%NaClO灭菌组高，说明用0.1%HgCl2灭菌的效果优于用5%NaClO灭菌的
中国农业科学院硕士学位论文第二章软枣猕猴桃休眠芽玻璃化法超低温保存技术研究152.2.2玻璃化法对冻后休眠芽成活率的影响2.2.2.1预培养液对超低温保存后‘魁绿’休眠芽成活率的影响高浓度的蔗糖可诱导细胞脱水，从而增加细胞的抗冻能力，在培养液中也可加入冷冻保护剂DMSO、甘油等提高冷冻成活率（冯超红，2014）。预培养液选择蔗糖和甘油为渗透保护物质，将休眠芽置于含不同浓度的蔗糖和甘油的MS预培养液中进行震荡培养，结果如图2-3所示。试验结果表明，不同浓度蔗糖和甘油的预培养液对‘魁绿’休眠芽的成活率影响较大，随着预培养液中蔗糖浓度的增加，休眠芽成活率呈下降趋势。在0.3mol·L-1蔗糖和0.3mol·L-1蔗糖+1mol·L-1甘油的MS预培养液中培养的休眠芽成活率最高，分别为75.93%和84.72%，两者之间无显著差异。含0.7mol·L-1蔗糖和不同浓度甘油的MS预培养液中培养的休眠芽成活率均较低。分析结果表明蔗糖浓度是影响休眠芽成活率的主要因素，甘油作为渗透保护液起部分作用。含2mol·L-1甘油和不同浓度蔗糖的MS预培养液中培养的休眠芽成活率较低，可能原因是渗透保护物质浓度较高，对休眠芽产生了渗透胁迫，破坏了细胞结构，使一部分细胞失去活力。图2-3不同预培养液对冻后休眠芽成活率的影响Fig.2-3Effectofdifferentpreculturedfluidsonsurvivalrateofdormantbudsaftercryopreservation不同字母表示在0.05水平上差异显著。下同。Differentlettersindicatesignificantdifferenceatthe0.05level.Thesamebelow.2.2.2.2预培养时间对超低温保存后‘魁绿’休眠芽成活率的影响张延红（2013）研究表明，预培养可以改善植物材料的生理状态，一定时间的预培养有利于提高保存材料的成活率。研究发现，预培养不同时间超低温保存后休眠芽的成活率存在差异?
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