荷叶铁线蕨配子体发育及性器官分化过程中DNA甲基化研究

发布时间：2021-08-29 23:02

　　现今对表观遗传的研究不仅涉及动物,也深入到植物方面,表观遗传研究机理中常见的一种为DNA甲基化,主要集中研究在全基因组水平上的DNA甲基化研究及特异性基因各种甲基化与去甲基化作用上。研究全基因组DNA甲基化广泛使用的是甲基化敏感扩增多态性分析（简称MSAP）的方法,这种方法能够从一定水平上准确推测出全基因组甲基化程度,并根据测序结果发掘出有用目的基因,进行后续功能验证反应。MSAP技术主要使用2种同裂酶（对甲基敏感程度不同）切割基因组DNA,通过选择性扩增等PCR反应,分析判断全基因组DNA甲基化程度。荷叶铁线蕨在叶片、株型方面有较高的观赏价值,是蕨类中二级珍稀孑遗植物。由于其较高的观赏价值,目前对其在家庭、花卉市场等领域的应用加深,近年来对荷叶铁线蕨的研究越来越多。但是由于起步迟,且荷叶铁线蕨一般位于深山岩石等处,所以对它的研究从引种开始,研究其快繁体系。对于分子方面研究刚开始起步。本实验选取荷叶铁线蕨无性和有性生殖中各三个时期的样品,做MSAP分析。经MSAP技术分析结果表明,在荷叶铁线蕨无性生殖及有性生殖中存在频繁的DNA甲基化现象,并且随着性器官的分化及分生组织的产生,甲基化水... 

【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：53 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
1. 前言
    1.1 蕨类植物研究概况
        1.1.1 蕨类植物种质资源研究现状
        1.1.2 蕨类植物配子体发育
        1.1.3 蕨类性器官分化
        1.1.4 蕨类植物无配子生殖研究进展
        1.1.5 荷叶铁线蕨研究进展
    1.2 DNA甲基化研究进展
        1.2.1 DNA甲基化研究机理
        1.2.2 DNA甲基转移酶
        1.2.3 DNA甲基化与植物生长发育的关系
        1.2.4 DNA甲基化研究方法
        1.2.5 基因CpG岛预测
    1.3 本研究具体内容
    1.4 本研究的目的及意义
2.材料和方法
    2.1 研究材料
    2.2 实验试剂
    2.3 实验方法
        2.3.1 CTAB法提取DNA
        2.3.2 MSAP分析
        2.3.3 聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)电泳
        2.3.4 差异条带统计
        2.3.5 目的条带切胶回收
        2.3.6 测序
        2.3.7 荧光实时定量分析
3.结果与分析
    3.1 MSAP结果分析
        3.1.1DNA提取结果检测结果
        3.1.2 双酶切及预扩增结果
        3.1.3 选扩结果分析
    3.2 测序结果分析
    3.3 相关基因CpG岛预测
    3.4 S2P家族蛋白和WRKY转录因子qRT-PCR表达
4.讨论
    4.1 实验体系构建
    4.2 荷叶铁线蕨配子体发育及性器官分化中DNA甲基化分析
    4.3 S2P家族蛋白和WRKY转录因子的分析
    4.4 S2P家族蛋白和WRKY转录因子实时定量
5.结论
    5.1 结论
    5.2 展望
参考文献
致谢



本文编号：3371544