SlSWEET12c和SlSWEET14在番茄果实成熟期糖转运与积累中的作用
发布时间：2021-09-22 22:23
SWEETs（Sugars Will Eventually Be Exported Transporters）是一类糖转运蛋白,参与植物生物进程,对植物生长发育、响应各种胁迫、宿主-病原体的互作中发挥作用。SlSWEET12c和SlSWEET14属于均属于SWEETs家族CladeIII分支,主要转运蔗糖。为了更好的了解SlSWEET12c和SlSWEET14基因的功能,本研究以Micro-Tom（Solanum lycopersicum）番茄为试材,利用RT-PCR技术从果实中克隆出SlSWEET12c和Sl SWEET14基因全长编码序列。利用实时定量PCR技术探明其在果实成熟期的时空表达特征,并构建基因的沉默和过表达载体,通过农杆菌介导的果实注射法进行瞬时表达检测构建载体的表达效率;然后进行番茄的遗传转化,获得转基因株系,利用实时定量PCR技术检测SlSWEET12c和SlSWEET14的表达,通过高效液相色谱法检测转基因源叶和果实中糖组成与含量的变化。主要研究结果如下:1)时空表达特征分析显示,Sl SWEET12c基因在番茄果实成熟过程中红熟期的表达最显著,呈现上调,红熟期果...
【文章来源】：沈阳农业大学辽宁省
【文章页数】：55 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
番茄果实成熟过程中不同部位SlSWEET12c的相对表达水平Fig.1TherelativeexpressionlevelofSlSWEET12catdifferentdevelopmentalstagesintomato以根为对照，每组数据进行3次试验重复.采用Statistics17.0软件分析
图 2 番茄果实成熟过程中不同部位 SlSWEET14 的相对表达水平Fig.2 The relative expression level of SlSWEET14 at different developmental stages in t3.2 SlSWEET12c 和 SlSWEET14 过表达载体的构建与检测3.2.1 SlSWEET12c 和 SlSWEET14 cDNA 全长的获得根据已获得的 SlSWEET12c 的 cDNA 全长，设计过表达引物 OE12c-F 和（引物序列见附录 1），进行 PCR 片段扩增，获得 1086 bp 的目的片段（图用设计的过表达引物 OE14-F 和 OE14-R（引物序列见附录 1），进行 SlSWEET片段扩增，电泳检测获得 1002 bp 的目的片段（图 3-B）。将目的条带进行胶到的纯化产物进行测序，测序成功得到的序列用 NCBI 软件进行 Blast 分析，全长完全匹配。
图 2 番茄果实成熟过程中不同部位 SlSWEET14 的相对表达水平Fig.2 The relative expression level of SlSWEET14 at different developmental stages in tomato3.2 SlSWEET12c 和 SlSWEET14 过表达载体的构建与检测3.2.1 SlSWEET12c 和 SlSWEET14 cDNA 全长的获得根据已获得的 SlSWEET12c 的 cDNA 全长，设计过表达引物 OE12c-F 和 OE12c-R（引物序列见附录 1），进行 PCR 片段扩增，获得 1086 bp 的目的片段（图 3-A）。采用设计的过表达引物 OE14-F 和 OE14-R（引物序列见附录 1），进行 SlSWEET14 的 PCR片段扩增，电泳检测获得 1002 bp 的目的片段（图 3-B）。将目的条带进行胶回收，得到的纯化产物进行测序，测序成功得到的序列用 NCBI 软件进行 Blast 分析，与 cDNA全长完全匹配。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Genome-wide identification, characterization, and expression analysis of the SWEET gene family in cucumber[J]. HU Li-ping,ZHANG Feng,SONG Shu-hui,TANG Xiao-wei,XU Hui,LIU Guang-min,WANG Ya-qin,HE Hong-ju. Journal of Integrative Agriculture. 2017(07)
[2]植物SWEET基因家族的相关研究进展[J]. 陈慧敏,李威,马雄风,张飞,杨代刚,胡守林. 中国农学通报. 2017(19)
[3]番茄在非生物胁迫下实时定量RT-PCR中内参基因的筛选[J]. 韩晓雪,韩佳轩,姜晶. 分子植物育种. 2015(04)
[4]拟南芥、水稻和番茄SW EET/MtN3/saliva基因家族的分析[J]. 韩佳轩,姜晶. 分子植物育种. 2015(03)
[5]植物体内糖分子的长距离运输及其分子机制[J]. 张懿,张大兵,刘曼. 植物学报. 2015(01)
[6]植物中SWEET基因家族研究进展[J]. 刘畅,姜晶,韩晓雪,韩佳轩. 植物生理学报. 2014(09)
[7]转基因植物中外源基因的沉默及应对策略[J]. 常丽娟,刘勇,宋君,刘文娟,张富丽,王东,尹全,雷绍荣. 生物技术通讯. 2013(06)
[8]夜间低温对薄皮甜瓜果实糖积累及代谢相关酶活性的影响[J]. 郝敬虹,李天来,孟思达,赵博,孙利萍. 中国农业科学. 2009(10)
[9]重组DNA技术的应用和新进展[J]. 冯爱娟,杨太成,刘耘. 实用医学杂志. 2005(17)
[10]利用重组DNA技术进行植物遗传改良[J]. 易小平,周开达. 西南农业学报. 1998(S2)
本文编号：3404481
【文章来源】：沈阳农业大学辽宁省
【文章页数】：55 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
番茄果实成熟过程中不同部位SlSWEET12c的相对表达水平Fig.1TherelativeexpressionlevelofSlSWEET12catdifferentdevelopmentalstagesintomato以根为对照，每组数据进行3次试验重复.采用Statistics17.0软件分析
图 2 番茄果实成熟过程中不同部位 SlSWEET14 的相对表达水平Fig.2 The relative expression level of SlSWEET14 at different developmental stages in t3.2 SlSWEET12c 和 SlSWEET14 过表达载体的构建与检测3.2.1 SlSWEET12c 和 SlSWEET14 cDNA 全长的获得根据已获得的 SlSWEET12c 的 cDNA 全长，设计过表达引物 OE12c-F 和（引物序列见附录 1），进行 PCR 片段扩增，获得 1086 bp 的目的片段（图用设计的过表达引物 OE14-F 和 OE14-R（引物序列见附录 1），进行 SlSWEET片段扩增，电泳检测获得 1002 bp 的目的片段（图 3-B）。将目的条带进行胶到的纯化产物进行测序，测序成功得到的序列用 NCBI 软件进行 Blast 分析，全长完全匹配。
图 2 番茄果实成熟过程中不同部位 SlSWEET14 的相对表达水平Fig.2 The relative expression level of SlSWEET14 at different developmental stages in tomato3.2 SlSWEET12c 和 SlSWEET14 过表达载体的构建与检测3.2.1 SlSWEET12c 和 SlSWEET14 cDNA 全长的获得根据已获得的 SlSWEET12c 的 cDNA 全长，设计过表达引物 OE12c-F 和 OE12c-R（引物序列见附录 1），进行 PCR 片段扩增，获得 1086 bp 的目的片段（图 3-A）。采用设计的过表达引物 OE14-F 和 OE14-R（引物序列见附录 1），进行 SlSWEET14 的 PCR片段扩增，电泳检测获得 1002 bp 的目的片段（图 3-B）。将目的条带进行胶回收，得到的纯化产物进行测序，测序成功得到的序列用 NCBI 软件进行 Blast 分析，与 cDNA全长完全匹配。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Genome-wide identification, characterization, and expression analysis of the SWEET gene family in cucumber[J]. HU Li-ping,ZHANG Feng,SONG Shu-hui,TANG Xiao-wei,XU Hui,LIU Guang-min,WANG Ya-qin,HE Hong-ju. Journal of Integrative Agriculture. 2017(07)
[2]植物SWEET基因家族的相关研究进展[J]. 陈慧敏,李威,马雄风,张飞,杨代刚,胡守林. 中国农学通报. 2017(19)
[3]番茄在非生物胁迫下实时定量RT-PCR中内参基因的筛选[J]. 韩晓雪,韩佳轩,姜晶. 分子植物育种. 2015(04)
[4]拟南芥、水稻和番茄SW EET/MtN3/saliva基因家族的分析[J]. 韩佳轩,姜晶. 分子植物育种. 2015(03)
[5]植物体内糖分子的长距离运输及其分子机制[J]. 张懿,张大兵,刘曼. 植物学报. 2015(01)
[6]植物中SWEET基因家族研究进展[J]. 刘畅,姜晶,韩晓雪,韩佳轩. 植物生理学报. 2014(09)
[7]转基因植物中外源基因的沉默及应对策略[J]. 常丽娟,刘勇,宋君,刘文娟,张富丽,王东,尹全,雷绍荣. 生物技术通讯. 2013(06)
[8]夜间低温对薄皮甜瓜果实糖积累及代谢相关酶活性的影响[J]. 郝敬虹,李天来,孟思达,赵博,孙利萍. 中国农业科学. 2009(10)
[9]重组DNA技术的应用和新进展[J]. 冯爱娟,杨太成,刘耘. 实用医学杂志. 2005(17)
[10]利用重组DNA技术进行植物遗传改良[J]. 易小平,周开达. 西南农业学报. 1998(S2)
本文编号：3404481
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