细交链孢菌诱导下的枣SSH文库的构建
发布时间：2021-10-25 15:02
枣树（Zizyphus jujube Mill.）是中国第一大干果树种,在干果产业中具有十分重要的地位。由细交链孢菌（Alternaria alternata（Fr.）Keissler）等引起的枣缩果病是危害枣树最严重的病害之一。病原菌侵染规律的复杂性和病原菌的多样性造成了防治上的困难。常规的药剂防治不仅污染环境,而且无法从根本上解决问题。人工杂交育种又存在授粉困难与败育现象。因此筛选抗性基因进行转基因育种才可能建立有效的防治枣缩果病的方法。本研究运用抑制消减杂交技术（SSH）构建了c DNA文库,了解枣果与细交链孢菌互作后的基因表达情况,分析了与防卫反应相关的基因特性,从分子水平来研究枣抗缩果病的机制,为育种奠定理论基础。本试验主要结果如下:1.本研究以抗病品种蜂蜜罐白熟期时的枣果作为试验材料,经细交链孢菌侵染后分别于12 h、24 h、48 h、72 h、96 h采集枣果,将5次采样提取的RNA混合后反转录为c DNA作为为试验方,同理,以不接菌的对照枣果为驱动方,构建SSH-c DNA文库,保存了1000个阳性克隆,随机挑选200个进行测序,共有182条序列测通,将这些表达序列标...
【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：61 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
1.1 枣树的栽培现状与价值
1.2 枣缩果病的研究现状
1.2.1 枣缩果病的分布及造成的危害
1.2.2 枣缩果病发生规律
1.2.3 枣缩果病原菌的研究
1.3 植物的抗病机制
1.3.1 植物的抗病性
1.3.2 寄主-病原物互作
1.3.3 抗病信号转导
1.4. 抑制消减杂交技术（SSH）
1.4.1 抑制消减杂交技术原理及技术流程
1.4.2 抑制消减杂交技术的优缺点
1.4.3 抑制性消减杂交技术在抗病基因研究中的应用
1.5 表达序列标签（EST）
1.5.1 EST的应用
1.5.2 研究的局限性
1.5.3 序列同源产物的功能分类
1.6 本研究的目的和意义
第二章 材料与方法
2.1 试验材料与试剂
2.1.1 试验材料
2.1.2 主要仪器、试剂（盒）及耗材的处理
2.2 试验方法
2.2.1 实验材料的制备
2.2.2 总RNA提取
2.2.3 c DNA合成
2.2.4 差异片段的富集
2.2.5 SSH文库的构建
2.2.6 阳性克隆测序及序列生物信息学分析
第三章 结果与分析
3.1 枣果总RNA的提取
3.2 双链合成的最优循环数确定及c DNA的纯化
3.3 RsaⅠ酶切
3.4 接头连接效率分析
3.5 差减效率的检测
3.6 差减杂交后两轮PCR产物扩増结果分析
3.7 阳性克隆的筛选
3.8 文库质量的检测
3.9 ESTs序列分析及功能分类
3.9.1 ESTs序列分析
3.9.2 功能分类
第四章 讨论与分析
4.1 关于RNA的提取
4.2 EST的功能分类
4.2.1 信号转导相关的基因
4.2.2 转录因子相关的基因
4.2.3 抗病相关的基因
4.3 下一步研究计划
结论
参考文献
附录
致谢
作者简介
【参考文献】：
期刊论文
[1]E3泛素连接酶调控植物抗病分子机理研究进展[J]. 杨玖霞,张浩,王志龙,王旭丽,王国梁. 植物保护. 2015(04)
[2]小麦CPP转录因子基因的电子克隆及生物信息学分析[J]. 孟超敏,姬俊华,李雪林,尚家. 生物技术. 2014(04)
[3]中国红枣加工及产业发展现状[J]. 周禹含,毕金峰,陈芹芹,刘璇,吴昕烨,陈瑞娟,邵春霖. 食品与机械. 2013(04)
[4]小麦Cyp450基因的电子克隆与生物信息学分析[J]. 武安泉,王俊生,张玉玺,殷贵鸿. 中国农学通报. 2013(18)
[5]Research and Comparison of Anti-oxidation of Polyphenols of Chinese Dates from North of Shaanxi[J]. Xiao LI,Yanzhi ZHU,Yanping CAO,Xiangrong MA,Wenlan HUO,Yajun MA. Medicinal Plant. 2013(05)
[6]小麦F-box蛋白基因的电子克隆和生物信息学分析[J]. 王俊生,李俐俐,杨欢,谭光轩,殷贵鸿. 河南农业科学. 2013(02)
[7]我国枣树病害防治研究进展[J]. 姚太梅,张朝红,武媛林. 中国森林病虫. 2013(01)
[8]小麦种质N9820抗白粉病的特异基因表达谱分析[J]. 吴金华,马峙英,张西平,吉万全. 植物病理学报. 2012(04)
[9]水稻CBB30Ⅰ抗白叶枯病相关基因的差异表达分析[J]. 董旭,张晓平,赵开军,王春连. 作物杂志. 2012(04)
[10]红河地区枣树主要病害种类调查[J]. 刘春国,洪亮,雷祖禄,林丽飞,江茜,周萍. 宁夏农林科技. 2011(07)
硕士论文
[1]植原体胁迫下枣SSH文库的构建及表达序列标签分析[D]. 王洋.河北农业大学 2012
本文编号：3457647
【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：61 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
1.1 枣树的栽培现状与价值
1.2 枣缩果病的研究现状
1.2.1 枣缩果病的分布及造成的危害
1.2.2 枣缩果病发生规律
1.2.3 枣缩果病原菌的研究
1.3 植物的抗病机制
1.3.1 植物的抗病性
1.3.2 寄主-病原物互作
1.3.3 抗病信号转导
1.4. 抑制消减杂交技术（SSH）
1.4.1 抑制消减杂交技术原理及技术流程
1.4.2 抑制消减杂交技术的优缺点
1.4.3 抑制性消减杂交技术在抗病基因研究中的应用
1.5 表达序列标签（EST）
1.5.1 EST的应用
1.5.2 研究的局限性
1.5.3 序列同源产物的功能分类
1.6 本研究的目的和意义
第二章 材料与方法
2.1 试验材料与试剂
2.1.1 试验材料
2.1.2 主要仪器、试剂（盒）及耗材的处理
2.2 试验方法
2.2.1 实验材料的制备
2.2.2 总RNA提取
2.2.3 c DNA合成
2.2.4 差异片段的富集
2.2.5 SSH文库的构建
2.2.6 阳性克隆测序及序列生物信息学分析
第三章 结果与分析
3.1 枣果总RNA的提取
3.2 双链合成的最优循环数确定及c DNA的纯化
3.3 RsaⅠ酶切
3.4 接头连接效率分析
3.5 差减效率的检测
3.6 差减杂交后两轮PCR产物扩増结果分析
3.7 阳性克隆的筛选
3.8 文库质量的检测
3.9 ESTs序列分析及功能分类
3.9.1 ESTs序列分析
3.9.2 功能分类
第四章 讨论与分析
4.1 关于RNA的提取
4.2 EST的功能分类
4.2.1 信号转导相关的基因
4.2.2 转录因子相关的基因
4.2.3 抗病相关的基因
4.3 下一步研究计划
结论
参考文献
附录
致谢
作者简介
【参考文献】：
期刊论文
[1]E3泛素连接酶调控植物抗病分子机理研究进展[J]. 杨玖霞,张浩,王志龙,王旭丽,王国梁. 植物保护. 2015(04)
[2]小麦CPP转录因子基因的电子克隆及生物信息学分析[J]. 孟超敏,姬俊华,李雪林,尚家. 生物技术. 2014(04)
[3]中国红枣加工及产业发展现状[J]. 周禹含,毕金峰,陈芹芹,刘璇,吴昕烨,陈瑞娟,邵春霖. 食品与机械. 2013(04)
[4]小麦Cyp450基因的电子克隆与生物信息学分析[J]. 武安泉,王俊生,张玉玺,殷贵鸿. 中国农学通报. 2013(18)
[5]Research and Comparison of Anti-oxidation of Polyphenols of Chinese Dates from North of Shaanxi[J]. Xiao LI,Yanzhi ZHU,Yanping CAO,Xiangrong MA,Wenlan HUO,Yajun MA. Medicinal Plant. 2013(05)
[6]小麦F-box蛋白基因的电子克隆和生物信息学分析[J]. 王俊生,李俐俐,杨欢,谭光轩,殷贵鸿. 河南农业科学. 2013(02)
[7]我国枣树病害防治研究进展[J]. 姚太梅,张朝红,武媛林. 中国森林病虫. 2013(01)
[8]小麦种质N9820抗白粉病的特异基因表达谱分析[J]. 吴金华,马峙英,张西平,吉万全. 植物病理学报. 2012(04)
[9]水稻CBB30Ⅰ抗白叶枯病相关基因的差异表达分析[J]. 董旭,张晓平,赵开军,王春连. 作物杂志. 2012(04)
[10]红河地区枣树主要病害种类调查[J]. 刘春国,洪亮,雷祖禄,林丽飞,江茜,周萍. 宁夏农林科技. 2011(07)
硕士论文
[1]植原体胁迫下枣SSH文库的构建及表达序列标签分析[D]. 王洋.河北农业大学 2012
本文编号：3457647
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