核桃sHSP家族基因筛
发布时间：2021-10-25 16:13
核桃（Juglans regia）属胡桃科胡桃属植物,是世界著名的‘四大干果’之一,富含有益于身体健康的不饱和脂肪酸,目前在我国分布广泛,是重要的经济果树林木。目前对核桃的研究主要集中在核桃品质、品种选育、丰产栽培及加工利用等方面,很少从分子水平探讨核桃的生理调控机制。近年来,全球温度的变化导致我国西北地区“倒春寒”现象频发,对核桃生产和经济效益造成了严重的影响。小分子热激蛋白（sHSPs）是重要的抗逆响应蛋白,但在木本植物中研究较少,特别是在核桃中的研究鲜有报道。本研究从‘香玲’核桃转录组中筛选获得若干sHSP基因。通过实时荧光定量PCR（qRT-PCR）技术分析其在不同温度胁迫下的表达模式。通过构建酵母表达载体转入酵母中分析其在低温、高温及盐胁迫下对酵母生长的影响;构建植物过表达载体瞬时表达核桃,分析不同温度胁迫下的相关生理指标来探讨核桃sHSP蛋白的逆境响应功能。本研究的主要结果如下:（1）通过分析核桃叶片组织转录组数据,得到15条sHSP基因序列,通过BLAST、进化分析及多序比对分析,对这些蛋白的序列特征进行了初步分析。通过定量表达分析发现其中JrsHSP17.3和JrsHS...
【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：77 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
1.1 引言
1.2 低温对植物的影响
1.3 热激蛋白的研究概述
1.3.1 热激蛋白简介
1.3.2 热激蛋白的功能
1.3.3 小分子热激蛋白（sHSPs）的结构
1.3.4 小分子热激蛋白（sHSP）的分类
1.3.5 小分子热激蛋白（sHSP）简介与功能
1.4 本研究的目的、意义
1.5 本研究的内容及技术路线
第二章 核桃sHSP家族基因筛选及确认
2.1 试验材料
2.1.1 植物材料
2.1.2 菌种与载体
2.1.3 主要试剂
2.1.4 溶液配制
2.2 试验方法
2.2.1 核桃sHSP家族基因的筛选
2.2.2 JrsHSP17.3 和JrsHSP20-1 基因的克隆
2.2.3 实时定量PCR
2.3 结果与分析
2.3.1 sHSP家族基因的序列特征
2.3.2 核桃sHSP家族基因的跨膜区预测
2.3.3 核桃sHSP家族蛋白序列分析
2.3.4 核桃sHSP家族基因的进化分析
2.3.5 核桃sHSP家族基因蛋白结构预测
2.3.6 核桃sHSP家族基因的表达特征
2.3.7 JrsHSP17.3 基因和JrsHSP20-1 基因的定量表达分析
2.4 讨论
2.5 本章小结
第三章 转JrsHSP17.3 和JrsHSP20-1 的酵母抗逆性分析
3.1 试验材料
3.1.1 菌株和载体
3.1.2 主要试剂
3.2 试验方法
3.2.1 酵母表达载体的构建
3.2.2 重组质粒和pYES2质粒的酵母转化及鉴定
3.2.3 重组酵母的胁迫实验
3.3 结果与分析
3.3.1 表达载体及酵母重组子的获得
3.3.2 重组酵母的抗性分析
3.4 讨论
3.5 本章小结
第四章 JrsHSP17.3 基因在核桃中的瞬时表达分析
4.1 试验材料
4.1.1 植物材料
4.1.2 菌种与载体
4.1.3 主要试剂
4.1.4 培养基和溶液的配制
4.2 试验方法
4.2.1 核桃JrsHSP17.3 基因的过表达载体的构建
4.2.2 瞬时侵染核桃叶
4.2.3 瞬时转化核桃JrsHSP17.3 基因的表达分析
4.2.4 瞬时转化核桃的Southern杂交鉴定
4.2.5 Evans blue染色
4.2.6 瞬时转化核桃JrsHSP17.3 基因的生理指标测定
4.3 结果与分析
4.3.1 核桃过表达载体的构建
4.3.2 转JrsHSP17.3 核桃的southern杂交分析
4.3.3 JrsHSP17.3 基因的瞬时表达分析
4.3.4 利用Evans blue研究瞬时侵染核桃幼苗细胞受损情况
4.3.5 转JrsHSP17.3 基因核桃的生理指标分析
4.6 讨论
4.7 本章小结
结论
参考文献
致谢
作者简介
【参考文献】：
期刊论文
[1]中国“倒春寒”天气的发生及对树木春季生长影响[J]. 王梓,徐军亮,魏红旭. 北方园艺. 2015(16)
[2]倒春寒发生时期和次数对冬小麦产量性状的影响[J]. 高艳,唐建卫,殷贵鸿,韩玉林,黄峰,王丽娜,于海飞,李楠楠,张倩,杨光宇,李新平. 麦类作物学报. 2015(05)
[3]人工模拟倒春寒对杨树叶片活力的影响[J]. 邱念伟,周峰,张士超,杨东,刘媛,宋贤慧,郑媛. 林业科学. 2014(07)
[4]低温胁迫对油棕叶片养分含量变化的影响[J]. 刘勇,冯美利,曹红星,李新国,王永. 热带农业科学. 2014(06)
[5]小麦倒春寒发生特点及防御措施初探[J]. 陈襄礼,李林峰,王重锋,邵瑞鑫. 河南农业科学. 2014(02)
[6]超氧化物歧化酶（SOD）的应用研究进展[J]. 董亮,何永志,王远亮,董志扬. 中国农业科技导报. 2013(05)
[7]植物抗寒相关功能与调控基因研究进展[J]. 姚晓华. 中国农学通报. 2013(27)
[8]过去50年中国东部温带地区木本植物花期霜冻风险在降低（英文）[J]. 戴君虎,王焕炯,葛金胜. Journal of Geographical Sciences. 2013(04)
[9]提高植物抗寒性的机理研究进展[J]. 徐呈祥. 生态学报. 2012(24)
[10]刚毛柽柳Dof基因的克隆及盐胁迫表达谱[J]. 杨桂燕,王玉成,王超,高彩球. 东北林业大学学报. 2011(12)
博士论文
[1]过量表达LeHSP21.5减缓番茄的UPR应答并增强其耐逆性[D]. 赵春梅.山东师范大学 2006
硕士论文
[1]逆境胁迫下水稻（Oryza sativa L.）rHsp90基因的克隆及功能分析[D]. 刘大丽.东北林业大学 2006
本文编号：3457754
【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：77 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
1.1 引言
1.2 低温对植物的影响
1.3 热激蛋白的研究概述
1.3.1 热激蛋白简介
1.3.2 热激蛋白的功能
1.3.3 小分子热激蛋白（sHSPs）的结构
1.3.4 小分子热激蛋白（sHSP）的分类
1.3.5 小分子热激蛋白（sHSP）简介与功能
1.4 本研究的目的、意义
1.5 本研究的内容及技术路线
第二章 核桃sHSP家族基因筛选及确认
2.1 试验材料
2.1.1 植物材料
2.1.2 菌种与载体
2.1.3 主要试剂
2.1.4 溶液配制
2.2 试验方法
2.2.1 核桃sHSP家族基因的筛选
2.2.2 JrsHSP17.3 和JrsHSP20-1 基因的克隆
2.2.3 实时定量PCR
2.3 结果与分析
2.3.1 sHSP家族基因的序列特征
2.3.2 核桃sHSP家族基因的跨膜区预测
2.3.3 核桃sHSP家族蛋白序列分析
2.3.4 核桃sHSP家族基因的进化分析
2.3.5 核桃sHSP家族基因蛋白结构预测
2.3.6 核桃sHSP家族基因的表达特征
2.3.7 JrsHSP17.3 基因和JrsHSP20-1 基因的定量表达分析
2.4 讨论
2.5 本章小结
第三章 转JrsHSP17.3 和JrsHSP20-1 的酵母抗逆性分析
3.1 试验材料
3.1.1 菌株和载体
3.1.2 主要试剂
3.2 试验方法
3.2.1 酵母表达载体的构建
3.2.2 重组质粒和pYES2质粒的酵母转化及鉴定
3.2.3 重组酵母的胁迫实验
3.3 结果与分析
3.3.1 表达载体及酵母重组子的获得
3.3.2 重组酵母的抗性分析
3.4 讨论
3.5 本章小结
第四章 JrsHSP17.3 基因在核桃中的瞬时表达分析
4.1 试验材料
4.1.1 植物材料
4.1.2 菌种与载体
4.1.3 主要试剂
4.1.4 培养基和溶液的配制
4.2 试验方法
4.2.1 核桃JrsHSP17.3 基因的过表达载体的构建
4.2.2 瞬时侵染核桃叶
4.2.3 瞬时转化核桃JrsHSP17.3 基因的表达分析
4.2.4 瞬时转化核桃的Southern杂交鉴定
4.2.5 Evans blue染色
4.2.6 瞬时转化核桃JrsHSP17.3 基因的生理指标测定
4.3 结果与分析
4.3.1 核桃过表达载体的构建
4.3.2 转JrsHSP17.3 核桃的southern杂交分析
4.3.3 JrsHSP17.3 基因的瞬时表达分析
4.3.4 利用Evans blue研究瞬时侵染核桃幼苗细胞受损情况
4.3.5 转JrsHSP17.3 基因核桃的生理指标分析
4.6 讨论
4.7 本章小结
结论
参考文献
致谢
作者简介
【参考文献】：
期刊论文
[1]中国“倒春寒”天气的发生及对树木春季生长影响[J]. 王梓,徐军亮,魏红旭. 北方园艺. 2015(16)
[2]倒春寒发生时期和次数对冬小麦产量性状的影响[J]. 高艳,唐建卫,殷贵鸿,韩玉林,黄峰,王丽娜,于海飞,李楠楠,张倩,杨光宇,李新平. 麦类作物学报. 2015(05)
[3]人工模拟倒春寒对杨树叶片活力的影响[J]. 邱念伟,周峰,张士超,杨东,刘媛,宋贤慧,郑媛. 林业科学. 2014(07)
[4]低温胁迫对油棕叶片养分含量变化的影响[J]. 刘勇,冯美利,曹红星,李新国,王永. 热带农业科学. 2014(06)
[5]小麦倒春寒发生特点及防御措施初探[J]. 陈襄礼,李林峰,王重锋,邵瑞鑫. 河南农业科学. 2014(02)
[6]超氧化物歧化酶（SOD）的应用研究进展[J]. 董亮,何永志,王远亮,董志扬. 中国农业科技导报. 2013(05)
[7]植物抗寒相关功能与调控基因研究进展[J]. 姚晓华. 中国农学通报. 2013(27)
[8]过去50年中国东部温带地区木本植物花期霜冻风险在降低（英文）[J]. 戴君虎,王焕炯,葛金胜. Journal of Geographical Sciences. 2013(04)
[9]提高植物抗寒性的机理研究进展[J]. 徐呈祥. 生态学报. 2012(24)
[10]刚毛柽柳Dof基因的克隆及盐胁迫表达谱[J]. 杨桂燕,王玉成,王超,高彩球. 东北林业大学学报. 2011(12)
博士论文
[1]过量表达LeHSP21.5减缓番茄的UPR应答并增强其耐逆性[D]. 赵春梅.山东师范大学 2006
硕士论文
[1]逆境胁迫下水稻（Oryza sativa L.）rHsp90基因的克隆及功能分析[D]. 刘大丽.东北林业大学 2006
本文编号：3457754
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