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转录因子CsMYB77遗传转化功能验证及其互作基因挖掘

发布时间:2021-11-08 14:33
  柑橘鲜果周年供应、丰富早晚熟柑橘品种是我国柑橘产业重点研究内容之一。由于柑橘童期长,且常规育种手段效率极低,因此利用分子技术进行柑橘熟期育种成为了重要的育种手段,解析柑橘果实成熟调控分子机理对柑橘产业的发展具有重要的研究意义和应用价值。前人对转录因子Cs MYB77(Cs3g23950)遗传转化番茄,初步确定该基因具有延迟果实成熟的功能。本研究在此基础上,对Cs MYB77遗传转化山金柑,进行q RT-PCR分析、双分子荧光互补和双荧光素酶等互作验证实验,确定转录因子Cs MYB77的下游靶基因,进一步阐释了该转录因子调控柑橘果实成熟的分子机制,为柑橘的熟期育种提供一定的理论基础。主要结果如下:1.对Cs MYB77超表达遗传转化番茄株系T3代进行表型观察与统计,果实破色期比野生型(WT)和空载对照组(Control)延迟了3-5天,经过3代观察,Cs MYB77超表达番茄株系延迟果实成熟性状稳定。对番茄ARFs家族基因进行q RT-PCR实验,结果显示基因Sl ARF6与番茄果实破色相关,基因Sl ARF8与Sl ARF14上调表达明显。2.将Cs MYB77-OE、Cs MYB77... 

【文章来源】:华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】:56 页

【学位级别】:硕士

【部分图文】:

转录因子CsMYB77遗传转化功能验证及其互作基因挖掘


技术路线图

形态图,番茄,形态


华中农业大学2020届硕士研究生学位(毕业)论文102.材料与方法2.1实验材料2.1.1植物材料本研究遗传转化采用山金柑,山金柑定植于华中农业大学国家柑橘育种中心;Mic-Tom番茄来源于本实验,包括野生型(WT)、空载对照(Control)和CsMYB77T3代超表达株系。2.1.2主要试剂ExTaq酶和Trizol购自大连Takara公司,反转录试剂盒HiFiScriptgDNARemovalcDNASynthesisKit购于北京康为世纪,AppliedBiosystemsPowerUpSYBRGreen预混液购于赛默飞世尔公司,所用引物由武汉天一辉远公司合成。2.2方法2.2.1番茄表型统计观察2.2.1.1番茄开花到果实着色时间统计番茄材料开花后,选取盛花期花朵人工挂牌并标注日期(图2-1),选择与图中12.6形态一致的花朵作为番茄的盛花期即0DAF进行挂牌。统计野生型、空载对照及转基因材料从盛花到果实开始着色所需时间,即破色天数。图2-1番茄盛花0DAF起始形态选择(徐阳,2018)Fig.2-1Tomatoflower0DAFinitialmorphologyselection2.2.2番茄果实的基因表达分析

照片,果实,表型,番茄


转录因子CsMYB77遗传转化功能验证及其互作基因挖掘213.结果与分析3.1CsMYB77番茄超表达株系T3代表型分析3.1.1番茄果实表型观察与统计CsMYB77番茄超表达T2代株系果实出现性状分离,因此继续播种T3代持续观察番茄超表达株系表型。统计T3代野生型(WT)、空载对照(Control)和CsMYB77-OE番茄果实的破色天数,结果显示,超表达株系的破色天数全部显著高于野生型(WT),而与Control相比,CsMYB77-13株系的破色天数显著高于Control,其余超表达株系与Control相比有差异,但差异不太显著(图3-1,A)。超表达番茄T3代各株系果实照片如图3-1B,WT和Control果实分别在34DAF和35DAF开始着色,CsMYB77-13株系果实着色起始时间在38DAF,CsMYB77-22株系和CsMYB77-31株系的番茄果实均在37DAF开始着色。结果表明,超表达番茄果实的破色天数相较于野生型(WT)和空载对照组(Control)延迟了3-4天,经过3代观察,该基因延迟番茄果实成熟性状稳定。图3-1T3代WT、Control和CsMYB77-OE株系果实表型A:WT、Control和超表系的果实破色天数统计,其中,nWT=18,nControl=25,nCsMYB77-13=13,nCsMYB77-22=24,nCsMYB77-31=9,ABC表示P≤0.01水平差异

【参考文献】:
期刊论文
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硕士论文
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[3]柑橘生长素响应因子ARF基因家族的表达分析及功能验证[D]. 李斯贝.华中农业大学 2016
[4]意大利观赏番茄引种栽培研究[D]. 周天恩.福建农林大学 2007



本文编号:3483886

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