农杆菌介导金针菇FIP-fve基因沉默的遗传转化和血红铆钉菇FIP基因克隆及重组表达
发布时间：2021-11-22 07:48
真菌免疫调节蛋白家族（FIPs）,是从大型真菌中发现的一类小分子量蛋白质,其结构与天然免疫球蛋白相似,具有与植物凝集素相似的生物学活性。目前已有十余种真菌免疫调节蛋白相继被发现。虽然存在于不同的物种当中,但其结构具有高度同源性,在体外均具有抗肿瘤、抗过敏、凝集血细胞等生物学免疫活性。本论文由两部分组成。第一部分为农杆菌介导金针菇FIP-fve基因沉默的遗传转化,包括构建金针菇免疫调节蛋白FIP-fve的RNAi载体,转化农杆菌LBA4404并以农杆菌为介导转化金针菇菌丝体,建立金针菇遗传转化体系。为了考证FIP-fve对金针菇自身的生物学功能,我们以金针菇免疫调节蛋白FIP-fve为研究对象,克隆FIP-fve基因正反片段并构建其RNAi载体。用农杆菌LBA4404菌株介导转化至金针菇菌丝体内。优化转化筛选条件,利用潮霉素抗性筛选转化的金针菇菌丝体,获得FIP-fve基因沉默表达的阳性转化子。对比野生型金针菇进行菌丝体培养和表型观察,初步推测出FIP-fve对金针菇本身的生物学功能。双酶切检测结果证明己成功构建RNAi载体pTCK303-fve（F）-fve（R）。用液氮转化法获得重组...
【文章来源】：沈阳农业大学辽宁省
【文章页数】：70 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 文献综述
1.1 真菌概述
1.2 真菌免疫调节蛋白FIPs研究进展
1.2.1 真菌免疫调节蛋白的结构特征
1.2.2 FIPs的生物学功能
1.3 蛋白重组表达
1.3.1 原核表达系统
1.3.2 昆虫细胞表达系统
1.3.3 酵母表达系统
1.3.4 其他重组表达系统
1.3.5 FIPs重组表达研究进展
1.4 大型真菌遗传转化体系的构建
1.4.1 遗传转化方法
1.4.2 金针菇遗传转化研究进展
1.5 本论文的研究意义
第二章 农杆菌介导金针菇FIP-fve基因沉默的遗传转化
2.1 试验材料
2.1.1 菌种与质粒
2.1.2 试剂
2.1.3 仪器
2.1.4 培养基
2.2 试验方法
2.2.1 金针菇子实体中FIP-fve的前期检测
2.2.2 金针菇FIP-fve基因正反片段的克隆
2.2.3 金针菇FIP-fve的RNAi载体构建
2.2.4 农杆菌介导金针菇遗传转化体系的构建
2.3 结果与分析
2.3.1 金针菇子实体FIP-fve的前期检测
2.3.2 金针菇免疫调节蛋白基因正反片段的克隆
2.3.3 金针菇免疫调节蛋白基因RNAi载体构建
2.3.4 农杆菌LBA4404介导转化金针菇的遗传转化体系
2.4 讨论与结论
第三章 血红铆钉菇FIP基因克隆及重组表达
3.1 试验材料
3.1.1 菌种与质粒
3.1.2 酶及试剂
3.1.3 试验仪器
3.1.4 培养基
3.2 试验方法
3.2.1 血红铆钉菇FIP-cru的克隆及生物信息学分析
3.2.2 重组表达载体构建
3.2.3 重组酵母转化子的获得与筛选
3.2.4 rFIP-cru的表达与检测
3.2.5 rFIP-cru生物活性检测
3.3 试验结果与分析
3.3.1 血红铆钉菇FIP-cru克隆及生物信息学分析
3.3.2 重组表达载体构建
3.3.3 重组酵母转化子获得与鉴定
3.3.4 rFIP-cru蛋白的表达、纯化与检测
3.3.5 rFIP-cru蛋白生物活性检测
3.4 讨论与结论
参考文献
致谢
附录：英文缩略词
攻读学位期间发表的学术文章
【参考文献】：
期刊论文
[1]食药用真菌药理作用及草菇潜在的致癌性探讨[J]. 刘棒,高菊. 中国卫生工程学. 2015(05)
[2]运用基因枪法进行蛹虫草遗传转化的研究[J]. 茅文俊,鲍大鹏,周陈力,李燕,谭琦,汪滢. 园艺学报. 2015(09)
[3]农杆菌介导的刺芹侧耳遗传转化体系的建立[J]. 盛立柱,宋冰,戴月婷,李丹,付永平,李玉. 菌物学报. 2015(04)
[4]云芝免疫调节蛋白基因克隆及酵母重组表达[J]. 张春玉. 吉林农业大学学报. 2015(03)
[5]农杆菌介导一个内源HMG-box转录因子fvhom1转化金针菇[J]. 施乐乐,van Peer A.F.,郭丽,陈仁良,王威,严俊杰,邓优锦,谢宝贵. 基因组学与应用生物学. 2014(06)
[6]金针菇、灵芝混菌发酵型饮料的制备及其活性物质的检测[J]. 董玉玮,苗敬芝,曹泽虹,刘辉. 食品科技. 2014(08)
[7]金针菇子实体多糖分离纯化及结构和免疫活性研究[J]. 许晓燕,余梦瑶,魏巍,江南,伍明,郑林用,罗霞. 菌物学报. 2014(02)
[8]根癌农杆菌介导的食用菌转化研究[J]. 孙运奇,张津京,冯志勇,陈明杰,汪虹,陈辉. 食用菌学报. 2014(01)
[9]金针菇多糖的抗氧化活性研究[J]. 张丽霞,赵丽娟. 西南农业学报. 2014(01)
[10]基于RAPD和ITS分子标记对血红铆钉菇菌株的鉴别研究[J]. 王守现,刘宇,张英春,许峰,赵爽,王兰青,耿小丽,孟莉莉. 食用菌学报. 2013(03)
博士论文
[1]真菌免疫调节蛋白（FIP）在毕赤酵母（Pichia pastoris）GS115中的重组表达及其生物学活性的研究[D]. 林景卫.东北师范大学 2009
[2]银耳遗传转化系统的建立及三个品质基因的转化[D]. 谢宝贵.福建农林大学 2004
硕士论文
[1]两种真菌免疫调节蛋白基因的克隆以及在毕赤酵母GS115中的重组表达[D]. 贾佳.沈阳农业大学 2014
[2]杏鲍菇遗传转化体系的建立与pyrG基因的克隆[D]. 尹永刚.河北农业大学 2012
[3]农杆菌介导的香菇遗传转化体系构建[D]. 喻晶晶.华中农业大学 2012
[4]平菇遗传转化体系和转漆酶工程菌株的构建[D]. 董晓雅.河南农业大学 2010
[5]农杆菌介导人胰岛素基因BCA转化银耳研究[D]. 郭益童.福建农林大学 2010
本文编号：3511253
【文章来源】：沈阳农业大学辽宁省
【文章页数】：70 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 文献综述
1.1 真菌概述
1.2 真菌免疫调节蛋白FIPs研究进展
1.2.1 真菌免疫调节蛋白的结构特征
1.2.2 FIPs的生物学功能
1.3 蛋白重组表达
1.3.1 原核表达系统
1.3.2 昆虫细胞表达系统
1.3.3 酵母表达系统
1.3.4 其他重组表达系统
1.3.5 FIPs重组表达研究进展
1.4 大型真菌遗传转化体系的构建
1.4.1 遗传转化方法
1.4.2 金针菇遗传转化研究进展
1.5 本论文的研究意义
第二章 农杆菌介导金针菇FIP-fve基因沉默的遗传转化
2.1 试验材料
2.1.1 菌种与质粒
2.1.2 试剂
2.1.3 仪器
2.1.4 培养基
2.2 试验方法
2.2.1 金针菇子实体中FIP-fve的前期检测
2.2.2 金针菇FIP-fve基因正反片段的克隆
2.2.3 金针菇FIP-fve的RNAi载体构建
2.2.4 农杆菌介导金针菇遗传转化体系的构建
2.3 结果与分析
2.3.1 金针菇子实体FIP-fve的前期检测
2.3.2 金针菇免疫调节蛋白基因正反片段的克隆
2.3.3 金针菇免疫调节蛋白基因RNAi载体构建
2.3.4 农杆菌LBA4404介导转化金针菇的遗传转化体系
2.4 讨论与结论
第三章 血红铆钉菇FIP基因克隆及重组表达
3.1 试验材料
3.1.1 菌种与质粒
3.1.2 酶及试剂
3.1.3 试验仪器
3.1.4 培养基
3.2 试验方法
3.2.1 血红铆钉菇FIP-cru的克隆及生物信息学分析
3.2.2 重组表达载体构建
3.2.3 重组酵母转化子的获得与筛选
3.2.4 rFIP-cru的表达与检测
3.2.5 rFIP-cru生物活性检测
3.3 试验结果与分析
3.3.1 血红铆钉菇FIP-cru克隆及生物信息学分析
3.3.2 重组表达载体构建
3.3.3 重组酵母转化子获得与鉴定
3.3.4 rFIP-cru蛋白的表达、纯化与检测
3.3.5 rFIP-cru蛋白生物活性检测
3.4 讨论与结论
参考文献
致谢
附录：英文缩略词
攻读学位期间发表的学术文章
【参考文献】：
期刊论文
[1]食药用真菌药理作用及草菇潜在的致癌性探讨[J]. 刘棒,高菊. 中国卫生工程学. 2015(05)
[2]运用基因枪法进行蛹虫草遗传转化的研究[J]. 茅文俊,鲍大鹏,周陈力,李燕,谭琦,汪滢. 园艺学报. 2015(09)
[3]农杆菌介导的刺芹侧耳遗传转化体系的建立[J]. 盛立柱,宋冰,戴月婷,李丹,付永平,李玉. 菌物学报. 2015(04)
[4]云芝免疫调节蛋白基因克隆及酵母重组表达[J]. 张春玉. 吉林农业大学学报. 2015(03)
[5]农杆菌介导一个内源HMG-box转录因子fvhom1转化金针菇[J]. 施乐乐,van Peer A.F.,郭丽,陈仁良,王威,严俊杰,邓优锦,谢宝贵. 基因组学与应用生物学. 2014(06)
[6]金针菇、灵芝混菌发酵型饮料的制备及其活性物质的检测[J]. 董玉玮,苗敬芝,曹泽虹,刘辉. 食品科技. 2014(08)
[7]金针菇子实体多糖分离纯化及结构和免疫活性研究[J]. 许晓燕,余梦瑶,魏巍,江南,伍明,郑林用,罗霞. 菌物学报. 2014(02)
[8]根癌农杆菌介导的食用菌转化研究[J]. 孙运奇,张津京,冯志勇,陈明杰,汪虹,陈辉. 食用菌学报. 2014(01)
[9]金针菇多糖的抗氧化活性研究[J]. 张丽霞,赵丽娟. 西南农业学报. 2014(01)
[10]基于RAPD和ITS分子标记对血红铆钉菇菌株的鉴别研究[J]. 王守现,刘宇,张英春,许峰,赵爽,王兰青,耿小丽,孟莉莉. 食用菌学报. 2013(03)
博士论文
[1]真菌免疫调节蛋白（FIP）在毕赤酵母（Pichia pastoris）GS115中的重组表达及其生物学活性的研究[D]. 林景卫.东北师范大学 2009
[2]银耳遗传转化系统的建立及三个品质基因的转化[D]. 谢宝贵.福建农林大学 2004
硕士论文
[1]两种真菌免疫调节蛋白基因的克隆以及在毕赤酵母GS115中的重组表达[D]. 贾佳.沈阳农业大学 2014
[2]杏鲍菇遗传转化体系的建立与pyrG基因的克隆[D]. 尹永刚.河北农业大学 2012
[3]农杆菌介导的香菇遗传转化体系构建[D]. 喻晶晶.华中农业大学 2012
[4]平菇遗传转化体系和转漆酶工程菌株的构建[D]. 董晓雅.河南农业大学 2010
[5]农杆菌介导人胰岛素基因BCA转化银耳研究[D]. 郭益童.福建农林大学 2010
本文编号：3511253
本文链接：https://www.wllwen.com/nykjlw/yylw/3511253.html
