低温胁迫下金针菇差异蛋白组学研究

发布时间：2024-07-02 03:07

　　金针菇[Flammulina velutipes (Fr.) Sing]是我国最先进行工厂化栽培的蕈菌,从始至今不乏对其栽培技术和栽培模式的研究,对其栽培过程中的生理机制以及深入的研究还有待进一步的探索。菌丝达到生理菌龄后,经过定期的低温刺激,才能进行子实体的分化和生长,对其低温刺激的分子机制研究还处于初级阶段,导致深层次的研究和生产技术革新基础理论滞后。鉴于金针菇不同生长发育阶段的生物学特性及栽培过程中对低温的敏感性,金针菇是可应用于大型食用真菌低温胁迫下分子水平研究的理想材料。本研究将固体PDA加富培养基置于90mm培养皿中,经过短期和长期低温刺激菌丝后收集菌丝样品,运用iTRAQ结合二维液相色谱串联质谱技术,对金针菇对照菌丝、短期低温刺激菌丝和长期低温刺激菌丝的蛋白质样品进行分离、鉴定及定量分析;最后采用RT-PCR对全部差异蛋白质基因的转录水平进行了分析,对基于iTRAQ结合2DLC-MS/MS鉴定出的蛋白质数据的准确性进行了验证。主要研究结果如下：1.通过出菇实验、细胞质纯化和细胞核纯化得到了可用于实验的优良菌株。2.采用甲醇-醋酸铵法对菌丝样品进行蛋白质提取和SDS-PAG...

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【部分图文】：

图２－１金針猜单核菌株和核配菌株制备??

的四株极性不同的初生菌丝两两杂交，镜检锁状联合，对初步获得的四级性初生菌株进??行验证。获得具有来源于亲本不同极性的两个细胞核，得到纯化了细胞核的优良菌株。??具体试验流程如下图２－１所示。??－１０－??

图３－１不同菌丝蛋白样品的电泳图??注：Ｍ为ＰｒｏｔｅｉｎＭａｒｋｅｒ?（１４－１００?ｋＤａ）；泳道１为样品１，泳道２为样品２，泳道３为样品３??

３．１电泳检测结果??电泳检测采用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ进行图示化，总蛋白提化结果经成像系统成像后结果如??图３－１。结果表明Ｈ个样品的蛋白质条带较完整，条带清晰且分离效果较好，初步判定??蛋白质样品存在差异。??Ｍ?Ｉ?：?３??－：．ｋＤａ＿??＇＇酒Ｅ??５ＤｋＤａ＊＿?ｊｆｅＳ....

图３－３金针窥３个菌丝样品蛋白质組的表达量分布范围分祈??．－

Ｎｏｔｅ：?Ａ?ｉｎｄｉｃａｌｉｅｄ?ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｌ；?Ｂｉｎｄｉｃａ化ｄ?ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ；?Ｃ?ｉｎｄｉｃａ１：ｅｄ?ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ??３．３．３鉴定蛋白质的表达量特异性分析??表达量箱型图显示（图３－４）?：３个样品间的基线变化较大，处于核也区域的蛋白....

图３－５金针茹不同菌竺样品蛋白废组的的分层聚类图??；，

Ｆｉｇ．３－５?Ｈｉｅｒａｒｃｈｙ?ｃｌｕｓｔｅｒｉｎｇ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｐｒｏｔｅｏｍｅｓ?ｉｎ?Ｆｌａｍｍｕｌｉｎａ?ｖｅｌｕｔｉｐｅｓ??Ｎｏｔｅ：?Ｕｐ－ｒｅｇｕｌａｔｅｄ?ａｎｄ?ｄｏｗｎ－巧邑ｕｌａｔｅｄ?ｗｅｒｅ?ｍａｒｋｅｄ?ｉｎ?ｒｅｄ?ａｎｄ?....

本文编号：3999594