杜梨PbNHX1基因的克隆和功能鉴定

发布时间：2021-12-25 03:20

　　梨是我国种植分布最广的水果之一,其年产量仅次于柑橘和苹果,梨产业的发展对地区农业经济的促进起着重要的作用。随着人们水活水平的提高,人们对水果的需求不断扩大,梨产业也迎来了巨大的发展。在生产当中,盐胁迫是一种最常见的环境因素,对植物的生长发育、地理分布、产量有着非常严重的影响。因此,在长期以来如何提高植物耐盐性一直是一个十分重要的研究方向,也是人们最广泛研究的课题之一。虽然采取一些人工的栽培方法可以提高植物的耐盐性,但最有效的解决办法还是培育出耐盐新品种。作为传统育种的补充,当前基因工程已经被证明是一种高效可行的新方法,然而基因工程育种的前提是找到具有耐盐功能的基因。从已有的研究得知,植物NHX1基因在植物的耐盐胁迫当中扮演着重要的角色,所以本研究从杜梨（Pyrus betuLaefolia）中分离克隆得到PbNHX1基因,并对它的抗逆功能进行鉴定。主要目的是为了深入了解PbNHX1基因的抗性机理,从而获得具有自主知识产权的梨抗性基因资源。主要研究结果如下:在本研究中,我们采用电子克隆技术从杜梨当中得到了PbNHX1基因。PbNHX1基因具有完整的1635 bp的开放阅读框,编码544个... 

【文章来源】：南京农业大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：63 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１－１盐胁迫植物的伤害和耐盐性的生理机制（Ｚｈｕ．?２００１）??Ｆｉｇ?１－１?ｔｈｅ?ｈａｒｍｌｅｓｓ?ｏｆ?ｓａｌｔ?ｓｔｒｅｓｓ?ａｎｄ?ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ?ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ?ｏｆ?ｓａｌｔ?ｔｏｌｅｒａｎｃｅ?ｏｆ?ｐｌａｎｔ（Ｚｈｕ，?２００１）??

４．１?Ｐ６Ｗ／／Ｘ／转基因烟草的阳性苗检测??提取经过潮霉素筛选表型正常的的转基因Ｔ〇代苗和野生型（ＷＴ）植株的基因组??ＤＮＡ，提取方法同２．８．１。结果如图３－５所示，所提取的基因组ＤＮＡ结构完整，没有蛋??白污染，纯度较高，适用于ＰＣＲ检测。以基因组ＤＮＡ为模板，基因特异引物ＲＴ－ＰＣＲ??扩增目的条带，目的条带如图３－６，条带单一。从１００株转基因Ｔ（，代幼苗中，鉴定出２５??株阳性苗，但是在野生型当中未检测出。??３０??

?－１６３５ｂｐ??ｉＳＢｆｉｌ??图３－６部分转基因植株基因ＰＣＲ扩增结果??Ｆｉｇ．?３－６?Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ?ｐａｒｔ?ｏｆ?ｔｈｅ?ＰｂＮＨＸｌ?ｇｅｎｅ?ｕｓｉｎｇ?ＰＣＲ??Ｍ：ＤＬ２０００分子量标准；１，２，?４转基因阳性植株；３，?５转基因阴性植株；６质粒阳性对照；７，??８非转基因植株??Ｍ：?ＤＬ２０００?ｍａｒｋｅｒ；?１，?２，?４?ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ?ｐｌａｎｔ；?３，?５?ｎｏ?ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ?ｐｌａｎｔ；?６?ｐｏｓｉｔｉｖｅ?ｃｏｎｔｒｏｌ；?７，?８??ｕｎｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ?ｐｌａｎｔ??４．２?转基因烟草的阳性苗超表达系鉴定??提取移栽成活的２５株转基因阳性苗的ＲＮＡ，通过跑胶检测其结构完整，如图３－??７，利用ｎａｎｏｄｒｏｐ测定其浓度后（浓度均在２００－６００?ｎｇ／ｕｌ），将ＲＮＡ总量调整为３?ｕｇ后进??行反转录成ｃＤＮＡ，再用烟草的ｕｂｉｑｕｔｉｎ作为内参进行扩增。用ｕｂｉｑｕｔｉｎ扩增出来的条??３１??


本文编号：3551698