光周期途径相关基因AtCO在露地菊‘火焰’中的遗传转化
发布时间:2022-02-13 09:47
露地菊(Chrysanthemum morifolium)是菊科的多年生草本植物,也是重要的露地观赏花卉。根据菊花开花的早晚即花期的不同,可以将其划分为夏菊和秋冬菊。一般情况下夏菊的花期在夏季,但品种较单一,花型较小,观赏性较差。大部分菊花属于短日照植物,即在晚秋开花,这使得菊花的观赏性受到了季节的限制,导致其商品价值降低。常规调控花期的方法,如控制温度、光照时间等方法操作较为繁琐,不易控制,大大地提高了生产花卉的成本。利用基因工程技术可以高效获得具有目的性状的植株,降低生产成本。研究表明植物的花发育受到很多因素的影响,其中光周期是尤为重要的因素,CONSTANS(CO)基因是拟南芥光周期遗传调控途径中的关键因子。本研究主要以露地菊品种‘火焰’为植物材料,利用农杆菌介导的叶盘转化法导入具有控制植物开花时间功能的CO基因,利用甘露糖作为筛选介质并结合PCR等分子鉴定方法,获得阳性转化植株,进而调查阳性转化植株的开花情况,从中筛选早花露地菊品系,旨在通过简单易控的方法获得不同花期的菊花新品种。主要实验结果如下:1.植物表达载体的构建:从拟南芥中扩增获得CO基因全长序列。利用Gateway技...
【文章来源】:东北林业大学黑龙江省211工程院校教育部直属院校
【文章页数】:65 页
【学位级别】:硕士
【部分图文】:
图2-1拟南芥叶片总liNA的电泳图??2.4.2?基因全长的PCR扩增及序列测定??
?东北林业大学硕士学位论文???M?1?2??25〇bp?zff??lOObp?—?.-???图2-2?PC?R反应电泳检测??M:分子量标记D2000;?1,2:?CO基因的PCR条带??将纯化的PCR产物连接到pMD-T载体上,然后转化到大肠杆菌感受态细胞JM109??中。在含有X-Gal、IPTG、Amp的培养基上过夜培养,随即挑选]0个菌斑进行摇菌,??提取质粒,并进行菌液PCII鉴定。检测结果如图2-3可知,泳道1-5条带较亮,泳道6-??10条带较弱,但都得到了所要的特异片段,选取送测序。??Ml?23456?789?10??...…ill??■?.?:??:—?:??=?^??■■■■■■■■■■■■■■??克隆得到的目的基因序列序列与拟南芥CO基因(AT5G15840)序列经tblastx比对??后相似性为100%,表明己克隆得到拟南芥基因,可用于后续实验。??>A/C03-5??GCTCCCACACCATCAAACTTACTACATCTGAGTTATTATGTTGAAACAAGAGAGTAACGACATAGGTA??GTGGAGAGAACAACAGGGCACGACCCTGTGACACATGCCGGTCAAACGCCTGCACCGTGTATTGCCA??TGCAGATTCTGCCTACTTGTGCATGAGCTGTGATGCTCAAGTTCACTCTGCCAATCGCGTTGCTTCCCG??CCATAAACGTGTCCGGGTCTGCGAGTCATGTGAGCGTGCTCCGGCTGCTTTTTTGTGTGAGGCAGATG??ATGCCTCTCTATGCACA
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【参考文献】:
期刊论文
[1]Flowering responses to light and temperature[J]. Li Li,Xu Li,Yawen Liu,Hongtao Liu. Science China(Life Sciences). 2016(04)
[2]关于转基因安全性问题的几点思考[J]. 李斌,黄艳,杨阳. 科技创新导报. 2011(25)
[3]植物响应光周期的分子机制[J]. 宋萌萌. 太原城市职业技术学院学报. 2011(06)
[4]光周期诱导植物成花的分子调控机制[J]. 田素波,郭春晓,郑成淑. 园艺学报. 2010(02)
[5]CO基因的调控表达与植物光周期反应[J]. 吴连成,常丽丽,陈晓,库丽霞. 中国农学通报. 2010(02)
[6]转基因植物中标记基因研究概况[J]. 李俊,刘翠琼,尹伟伦,夏新莉. 植物学报. 2009(04)
[7]甘露糖阳性选择系统在水稻遗传转化中的应用研究进展[J]. 王彩芬,付永彩. 中国稻米. 2008(04)
[8]植物CO基因研究进展[J]. 樊丽娜,邓海华,齐永文. 西北植物学报. 2008(06)
[9]AP1基因转化地被菊品种‘玉人面’的研究[J]. 吕晋慧,吴月亮,孙磊,张启翔. 林业科学. 2007(09)
[10]转基因作物的安全标记基因[J]. 钱方,高志芳,滕木子,安利佳. 河南农业科学. 2007(07)
硕士论文
[1]以PMI基因为选择标记露地菊转PtDHAR基因体系的建立[D]. 王江.东北林业大学 2010
本文编号:3622970
【文章来源】:东北林业大学黑龙江省211工程院校教育部直属院校
【文章页数】:65 页
【学位级别】:硕士
【部分图文】:
图2-1拟南芥叶片总liNA的电泳图??2.4.2?基因全长的PCR扩增及序列测定??
?东北林业大学硕士学位论文???M?1?2??25〇bp?zff??lOObp?—?.-???图2-2?PC?R反应电泳检测??M:分子量标记D2000;?1,2:?CO基因的PCR条带??将纯化的PCR产物连接到pMD-T载体上,然后转化到大肠杆菌感受态细胞JM109??中。在含有X-Gal、IPTG、Amp的培养基上过夜培养,随即挑选]0个菌斑进行摇菌,??提取质粒,并进行菌液PCII鉴定。检测结果如图2-3可知,泳道1-5条带较亮,泳道6-??10条带较弱,但都得到了所要的特异片段,选取送测序。??Ml?23456?789?10??...…ill??■?.?:??:—?:??=?^??■■■■■■■■■■■■■■??克隆得到的目的基因序列序列与拟南芥CO基因(AT5G15840)序列经tblastx比对??后相似性为100%,表明己克隆得到拟南芥基因,可用于后续实验。??>A/C03-5??GCTCCCACACCATCAAACTTACTACATCTGAGTTATTATGTTGAAACAAGAGAGTAACGACATAGGTA??GTGGAGAGAACAACAGGGCACGACCCTGTGACACATGCCGGTCAAACGCCTGCACCGTGTATTGCCA??TGCAGATTCTGCCTACTTGTGCATGAGCTGTGATGCTCAAGTTCACTCTGCCAATCGCGTTGCTTCCCG??CCATAAACGTGTCCGGGTCTGCGAGTCATGTGAGCGTGCTCCGGCTGCTTTTTTGTGTGAGGCAGATG??ATGCCTCTCTATGCACA
GGT-3,??C?iiMV?35S?proinorer-i??IncZ?nlphn-i?「〇s?lint??35S?promoter^?\?I?intron??secouc,?exou??^?x-NospolvA??:UtB\2W^?vC—T-Border?(right)??C?a\I\7?35S?polyA—y?^??Cn\n^?35S?promorei—/j,?\??J?)??C'nM\'?35S?polyA—/??T-Bordei?(left)-^?Nw??图3-丨丨汉’A>imA丨3m-/W/-.iU('6>载体结构示意图??3.2试验试剂??BP反应试剂盒,LR反应试剂盒,ExTaq.?A7x/I和(购买于Thermo公司),??卡纳(Kana),TRYRTONE质粒小提取试剂盒(TIANprep?Mini?Plasmid?Kit)购买于??Tiangen公琼脂糖,TAE电泳缓冲液,溴化乙啶,溴酚蓝,大肠杆|;T尚株??(JM109)。??3.3试验方法??3.3.1利用attB-zl/CO-Fm引物进行目的基因PCR??菌液处理:取1()|aL?D夜和9〇|iL?dd?H^O于EP?If中,100变性5min,然In冰丨.收??置2.5分钟。??反应体系:20|iL??-15-??
【参考文献】:
期刊论文
[1]Flowering responses to light and temperature[J]. Li Li,Xu Li,Yawen Liu,Hongtao Liu. Science China(Life Sciences). 2016(04)
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[3]植物响应光周期的分子机制[J]. 宋萌萌. 太原城市职业技术学院学报. 2011(06)
[4]光周期诱导植物成花的分子调控机制[J]. 田素波,郭春晓,郑成淑. 园艺学报. 2010(02)
[5]CO基因的调控表达与植物光周期反应[J]. 吴连成,常丽丽,陈晓,库丽霞. 中国农学通报. 2010(02)
[6]转基因植物中标记基因研究概况[J]. 李俊,刘翠琼,尹伟伦,夏新莉. 植物学报. 2009(04)
[7]甘露糖阳性选择系统在水稻遗传转化中的应用研究进展[J]. 王彩芬,付永彩. 中国稻米. 2008(04)
[8]植物CO基因研究进展[J]. 樊丽娜,邓海华,齐永文. 西北植物学报. 2008(06)
[9]AP1基因转化地被菊品种‘玉人面’的研究[J]. 吕晋慧,吴月亮,孙磊,张启翔. 林业科学. 2007(09)
[10]转基因作物的安全标记基因[J]. 钱方,高志芳,滕木子,安利佳. 河南农业科学. 2007(07)
硕士论文
[1]以PMI基因为选择标记露地菊转PtDHAR基因体系的建立[D]. 王江.东北林业大学 2010
本文编号:3622970
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