DkMYB15在中国甜柿原花青素生物合成中的功能研究

发布时间：2022-04-28 22:14

　　柿单宁属缩合单宁（又称“原花青素”）是柿果中大量积累的次生代谢产物,也是其产生涩感的主要原因。已知柿原花青素生物合成涉及多个结构基因参与并受转录因子调控。目前有关原花青素生物合成调控的报道,多集中在MYB、b HLH和WD40三类转录因子上,且以三元蛋白复合体MBW的形式调控原花青素合成相关基因的转录表达。本研究以课题组前期通过转录组及蛋白质组测序筛选获得与中国甜柿可溶性单宁累积模式相关的MYB转录因子-Dk MYB15为研究对象,通过分析其在单宁累积中的作用及作用方式来探讨其在中国甜柿原花青素生物合成的的调控作用,从而为高、低单宁含量的柿种质创制提供科学依据。主要结果如下:1.Dk MYB15为R2R3-MYB转录因子,全长633 bp,编码211个氨基酸,其C端含有保守的EAR抑制基序;系统进化分析显示Dk MYB15与已报道的原花青素生物合成抑制子聚为一类,属抑制型MYB转录因子。Dk MYB15在非完全甜柿和日本甜柿中表达量较低,而在中国甜柿果实发育中后期显著上调表达,与中国甜柿可溶性单宁的累积呈负相关。2.烟草亚细胞定位结果显示Dk MYB15定位于细胞核;在活体柿叶片及柿果... 

【文章页数】：66 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略词表
1 前言
    1.1 课题的提出
    1.2 前人研究进展
        1.2.1 柿原花青素研究进展
        1.2.2 MYB转录因子与原花青素的合成
    1.3 研究目的和内容
2 材料与方法
    2.1 试验材料
    2.2 试验方法
        2.2.1 柿果单宁含量测定
        2.2.2 总RNA提取及c DNA合成
        2.2.3 实时定量PCR
        2.2.4 DkMYB15系统进化分析
        2.2.5 超表达载体构建
        2.2.6 柿果实瞬时遗传转化
        2.2.7 柿活体叶片瞬时遗传转化
        2.2.8 DkMYB15-GFP121 亚细胞定位载体构建
        2.2.9 酵母单杂交
        2.2.10 酵母双杂交
        2.2.11 双分子荧光互补
3 结果与分析
    3.1 DkMYB15转录因子的序列分析
    3.2 DkMYB15在不同脱涩类型柿品种中的表达模式
    3.3 DkMYB15的亚细胞定位
    3.4 瞬时超表达DkMYB15对柿果实圆片相关基因表达的影响
    3.5 瞬时超表达DkMYB15对柿果实圆片单宁含量的影响
    3.6 DkMYB15与Dkb HLH2 互作验证
        3.6.1 Dkb HLH2 转录因子表达模式及序列分析
        3.6.2 DkMYB15与Dkb HLH2 酵母双杂交验证
        3.6.3 DkMYB15与Dkb HLH2 双分子荧光互补验证
    3.7 共表达DkMYB15与Dkb HLH2 对柿叶片相关基因表达的影响
    3.8 共表达DkMYB15与Dkb HLH2 对柿叶片单宁含量的影响
    3.9 DkMYB15与Dk ANR的启动子互作验证
4 讨论
    4.1 DkMYB15抑制可溶性单宁的生物合成
    4.2 DkMYB15特异抑制单宁生物合成关键基因的表达
    4.3 DkMYB15与b HLH转录因子相互作用
5 进一步研究设想
参考文献
附录
简历及在学期间科研实践
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]原花青素的研究进展[J]. 张慧文,张玉,马超美.  食品科学. 2015(05)
[2]一种改良的植物DNA提取方法[J]. 李金璐,王硕,于婧,王玲,周世良.  植物学报. 2013(01)
[3]植物单宁化学结构分析方法研究进展[J]. 张亮亮,汪咏梅,徐曼,吴冬梅,陈笳鸿.  林产化学与工业. 2012(03)
[4]柿单宁在重金属吸附中的应用研究进展[J]. 谢枫,樊在军,张青林,郭大勇,罗正荣.  华中农业大学学报. 2012(03)
[5]柿子单宁对几种蛇毒中主要酶的抑制作用及其机理初探[J]. 顾海峰,梁晋鄂,李春美,张洁,窦宏亮.  中国农业科学. 2008(03)
[6]植物多酚研究与利用的意义及发展趋势[J]. 宋立江,狄莹,石碧.  化学进展. 2000(02)
[7]不同甘、涩类型柿果实单宁组成的差异及罗田甜柿单宁的特性[J]. 费学谦,周立红,龚榜初.  林业科学研究. 1999(04)
[8]植物单宁化学研究进展[J]. 狄莹,石碧.  化学通报. 1999(03)

博士论文
[1]基于转录组和蛋白质组测序的中国甜柿自然脱涩基因筛选及DkMYB14功能解析[D]. 陈文兴.华中农业大学 2019



本文编号：3649639