草莓镶脉病毒移动蛋白P1和森林草莓叶绿素a/b结合蛋白LHC Ⅱ互作机制研究

发布时间：2022-07-16 14:23

　　草莓镶脉病毒（Strawberry vein banding virus,SVBV）属于花椰菜花叶病毒属,本实验室已证明SVBV P1蛋白是移动蛋白,在病毒的转移和扩散过程中起到关键作用,但P1蛋白如何与植物蛋白互作从而影响病毒的扩散目前还不清楚。本研究构建草莓cDNA酵母文库,以P1蛋白为诱饵从草莓cDNA文库筛选出与其互作的寄主因子。本研究以P1蛋白为诱饵蛋白筛选感染SVBV森林草莓的酵母cDNA文库,获得与其互作的寄主因子叶绿素a/b结合蛋白LHC Ⅱ,利用酵母双杂交实验（Y2H）、双分子荧光互补实验（BiFC）、pull-down实验、Co-IP实验验证P1蛋白和LHC Ⅱ蛋白互作,借助PVX运动缺陷型载体验证LHC Ⅱ蛋白能够促进P1蛋白协助病毒的胞间扩散,进一步探明SVBV与森林草莓互作的分子机理提供理论依据。1.利用酵母双杂交系统筛选与SVBV P1蛋白互作的寄主因子pGBK-P1诱饵蛋白质粒和森林草莓cDNA文库共转化酵母菌,涂布到SD/-Trp/-Leu和SD/-Trp/-Leu/-His/-Ade/-Gluc培养基上,选取长势良好的蓝色酵母斑,提取酵母质粒,转化,筛... 

【文章页数】：42 页

【学位级别】：硕士

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致谢
摘要
Abstract
文献综述
    1 草莓镶脉病毒研究现状
        1.1 草莓镶脉病毒主要特性及发生地区
        1.2 草莓镶脉病毒的全基因组及编码的蛋白和功能
        1.3 SVBV的研究情况
    2 在细胞间移动蛋白介导病毒运动的机制
        2.1 病毒移动蛋白与植物蛋白的互作
        2.2 利用酵母双杂交系统筛选与SVBV P1蛋白互作的寄主因子
    3 叶绿素a/b结合蛋白(LHC Ⅱ)的结构及生物学功能
        3.1 叶绿体蛋白参与病毒侵染过程
引言
材料和方法
    1 材料
        1.1 病毒材料来源
        1.2 模式植物
        1.3 菌种
        1.4 载体和质粒
        1.5 酶和常用试剂
    2 试验方法
        2.1 带毒草莓叶片总RNA的提取
        2.2 目的片段的PCR扩增
        2.3 PCR产物回收
        2.4 载体构建
        2.5 免疫共沉淀(pull-down)验证P1与LHC Ⅱ互作
        2.6 免疫共沉淀(Co-IP)验证P1与LHC Ⅱ互作(invivo)
结果与分析
    1 利用酵母双杂交系统筛选与SVBVP1蛋白互作的寄主因子
        1.1 P1蛋白的毒性和自激活的检测
        1.2 阳性酵母菌株的筛选
        1.3 PCR筛选酵母菌阳性克隆
        1.4 森林草莓中与SVBVP1蛋白互作的寄主因子
    2 SVBVP1蛋白和LHC Ⅱ蛋白的互作研究
        2.1 Real-timeRT-PCR分析森林草莓LHC Ⅱ基因的mRNA积累水平
        2.2 P1和LHC Ⅱ亚细胞定位及共定位
        2.3 酵母双杂(Y2H)验证P1与LHC Ⅱ互作
        2.4 双分子荧光互补(BiFC)验证P1与LHC Ⅱ互作
        2.5 免疫共沉淀(Pull-down)验证P1与LHC Ⅱ互作
        2.6 免疫共沉淀(Co-IP)验证P1与LHC Ⅱ互作
    3 P1与LHC Ⅱ互作对病毒侵染与扩散的机制研究
        3.1 P1蛋白超表达对本氏烟植株的影响
        3.2 LHC Ⅱ蛋白能协助P1蛋白,促进病毒局部扩散
讨论
    1 利用酵母双杂交系统筛选与SVBV P1蛋白互作的寄主因子
    2 Real-time RT-PCR分析森林草莓LHC Ⅱ基因的RNA积累水平
    3 P1和LHC Ⅱ亚细胞定位及共定位
    4 P1蛋白和LHC Ⅱ蛋白互作研究
    5 本氏烟的转化和P1转基因植株的获得
    6 LHC Ⅱ蛋白的表达能帮助P1蛋白促进病毒局部扩散
总结
参考文献
作者简介


【参考文献】：
期刊论文
[1]草莓镶脉病毒研究进展[J]. 肖敏,张志宏.  辽宁农业科学. 2005(04)



本文编号：3662677