茄子雄性不育花药蛋白质组差异研究及相关基因的克隆与表达分析
发布时间：2022-09-29 18:47
茄子（Solanum melongena L.）是人们日常生活中不可或缺的蔬菜之一,具有很强的杂种优势。利用杂种优势可以提高茄子产量、增强抗逆性、改良品质。雄性不育系作为母本生产杂种一代是利用茄子杂种优势的一种重要途径,其中花药不开裂是功能性雄性不育的表现形式之一。明确茄子雄性不育的发生机理,对利用杂种优势育种和创造茄子种质资源具有重要的理论意义与实践应用价值。本研究以茄子雄性不育系F16-5-6和可育系142为试验材料,采用双向电泳技术和质谱鉴定技术对这两个品种同一时期的花药进行了差异蛋白质组学研究分析。获得了可能与花药发育及茄子雄性不育相关的差异表达蛋白,并对其中一个差异表达蛋白COI1的编码基因及其途径中的两个基因JAZ1、MYC2进行了同源克隆、生物信息学及荧光定量PCR表达分析,从蛋白质水平和基因水平上探寻了茄子花药不开裂的可能原因,从而为今后进一步探索茄子功能性雄性不育机理的研究奠定了一定的基础。主要研究结果如下:1、采用蛋白双向凝胶电泳对茄子花药蛋白质进行分离,从分离的43个蛋白点中选取4个极显著差异蛋白点进行MALDI-TOF/TOF-MS/MS质谱鉴定分析,4个极显著...
【文章页数】：76 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 文献综述
1.1 植物花药开裂研究进展
1.1.1 植物花药开裂的细胞生物学机制
1.1.2 植物花药开裂的分子调控机制
1.2 蛋白质组研究概述
1.2.1 蛋白质组的概念及发展史
1.2.2 蛋白组学研究相关技术
1.2.3 蛋白组学在植物雄性不育方面的研究
1.2.4 茄子雄性不育差异蛋白质组学研究
1.3 茉莉酸信号转导途径相关基因的研究进展
第二章 引言
本试验采用技术路线如下
第三章 基于双向电泳的茄子花药开裂相关蛋白的鉴定
3.1 材料与方法
3.1.1 材料
3.1.2 方法
3.1.2.1 茄子花药总蛋白的提取
3.1.2.2 茄子花药总蛋白的纯化
3.1.2.3 茄子花药总蛋白的定量
3.1.2.4 茄子花药总蛋白的双向电泳
3.1.2.5 硝酸银染色方法
3.1.2.6 2-DE凝胶蛋白差异点分析
3.2 结果与分析
3.2.1 花药蛋白浓度定量
3.2.2 花药蛋白的双向电泳检测及质谱鉴定分析
3.2.2.1 花药蛋白双向电泳图谱比较
3.2.2.2 茄子花药差异表达蛋白点的质谱鉴定
3.3 讨论
第四章 茄子JA信号转导途径相关基因的克隆与分析
4.1 材料与方法
4.1.1 材料
4.1.2 方法
4.1.2.1 取材方法
4.1.2.2 茄子花药总RNA提取
4.1.2.3 茄子花药RNA的纯度和浓度检测
4.1.2.4 茄子第一链cDNA的获得
4.1.2.5 茄子JA信号转导途径相关基因的ORF区扩增
4.1.2.6 目的基因片段的回收
4.1.2.7 目的片段克隆载体的连接、转化及鉴定
4.1.2.8 茄子JA信号转导途径相关基因的序列分析
4.2 结果与分析
4.2.1 茄子花药总RNA提取纯度检测
4.2.2 茄子JA信号转导途径相关基因的ORF区克隆结果
4.2.3 茄子COI1、JAZ1、MYC2基因的生物信息学分析
4.2.3.1 COI1基因的编码蛋白的生物信息学分析
4.2.3.2 JAZ1基因的编码蛋白的生物信息学分析
4.2.3.3 MYC2基因的编码蛋白的生物信息学分析
4.3 讨论
第五章 茄子JA信号转导途径相关基因的表达分析
5.1 材料与方法
5.1.1 材料
5.1.2 方法
5.2 结果与分析
5.2.1 茄子花药总RNA的提取及纯度检测
5.2.2 茄子JA信号转导途径相关基因在茄子花药不同时期的表达分析
5.2.2.1 茄子COI1基因的定量表达分析
5.2.2.2 茄子JAZ1基因的定量表达分析
5.2.2.3 茄子MYC2基因的定量表达分析
5.3 讨论
第六章 结论
参考文献
附录
致谢
在学期间发表论文
在学期间参加的科研项目
【参考文献】：
期刊论文
[1]植物细胞核雄性不育相关bHLH转录因子研究进展[J]. 刘永明,张玲,周建瑜,曹墨菊. 遗传. 2015(12)
[2]辣椒胞质不育系与保持系花药的细胞学和蛋白质组学差异分析[J]. 吕晓菡,方献平,柴伟国,马俊平,周毅飞. 浙江大学学报(农业与生命科学版). 2015(01)
[3]甜菜雄性不育系及保持系花期蛋白差异分析[J]. 程大友,崔杰,牛佳,代翠红,白晨. 哈尔滨工业大学学报. 2014(10)
[4]蛋白质组学的应用研究进展[J]. 尹稳,伏旭,李平. 生物技术通报. 2014(01)
[5]白菜型冬油菜铁超氧化物歧化酶（Fe-SOD）基因的克隆及表达分析[J]. 曾秀存,孙万仓,孙佳,许耀照,方彦,史鹏辉,杨刚,孔德晶,武军艳,刘自刚. 中国农业科学. 2013(21)
[6]苜蓿雄性不育植株与可育植株现蕾初期花蕾蛋白质组比较[J]. 伊风艳,石凤翎,龙瑞才,王璐,熊梅,高翠萍. 西北植物学报. 2013(10)
[7]植物中MYC2转录因子功能研究进展[J]. 沈乾,陆续,张凌,高尔娣,唐克轩. 上海交通大学学报(农业科学版). 2012(06)
[8]烟草细胞质雄性不育系及其保持系的花蕾差异蛋白质分析[J]. 祁建民,马红勃,徐建堂,陈美霞,周东新,王涛,陈顺辉. 作物学报. 2012(07)
[9]T型小麦细胞质雄性不育系、保持系、恢复系胚根及其叶片蛋白质组中的差异蛋白分析[J]. 黄海泉,赵晔萍,荣德福. 湖南农业科学. 2011(19)
[10]植物蛋白质组学技术研究进展[J]. 张根连,范术丽,宋美珍,庞朝友,喻树迅. 生物技术通报. 2011(07)
硕士论文
[1]茄子茉莉酸生物合成途径相关基因的克隆与表达分析[D]. 郭航.西南大学 2015
[2]茄子功能性雄性不育的细胞学及内源激素变化研究[D]. 丁泽琴.西南大学 2014
[3]小麦生理型雄性不育旗叶质膜差异蛋白质组学研究[D]. 宋齐鲁.西北农林科技大学 2013
[4]大鼠机械性脑损伤动态变化的蛋白质组学研究[D]. 杨术旺.河北医科大学 2006
[5]茄子雄性不育的生化分析与分子生物学研究[D]. 牛友芽.湖南大学 2005
本文编号：3683117
【文章页数】：76 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 文献综述
1.1 植物花药开裂研究进展
1.1.1 植物花药开裂的细胞生物学机制
1.1.2 植物花药开裂的分子调控机制
1.2 蛋白质组研究概述
1.2.1 蛋白质组的概念及发展史
1.2.2 蛋白组学研究相关技术
1.2.3 蛋白组学在植物雄性不育方面的研究
1.2.4 茄子雄性不育差异蛋白质组学研究
1.3 茉莉酸信号转导途径相关基因的研究进展
第二章 引言
本试验采用技术路线如下
第三章 基于双向电泳的茄子花药开裂相关蛋白的鉴定
3.1 材料与方法
3.1.1 材料
3.1.2 方法
3.1.2.1 茄子花药总蛋白的提取
3.1.2.2 茄子花药总蛋白的纯化
3.1.2.3 茄子花药总蛋白的定量
3.1.2.4 茄子花药总蛋白的双向电泳
3.1.2.5 硝酸银染色方法
3.1.2.6 2-DE凝胶蛋白差异点分析
3.2 结果与分析
3.2.1 花药蛋白浓度定量
3.2.2 花药蛋白的双向电泳检测及质谱鉴定分析
3.2.2.1 花药蛋白双向电泳图谱比较
3.2.2.2 茄子花药差异表达蛋白点的质谱鉴定
3.3 讨论
第四章 茄子JA信号转导途径相关基因的克隆与分析
4.1 材料与方法
4.1.1 材料
4.1.2 方法
4.1.2.1 取材方法
4.1.2.2 茄子花药总RNA提取
4.1.2.3 茄子花药RNA的纯度和浓度检测
4.1.2.4 茄子第一链cDNA的获得
4.1.2.5 茄子JA信号转导途径相关基因的ORF区扩增
4.1.2.6 目的基因片段的回收
4.1.2.7 目的片段克隆载体的连接、转化及鉴定
4.1.2.8 茄子JA信号转导途径相关基因的序列分析
4.2 结果与分析
4.2.1 茄子花药总RNA提取纯度检测
4.2.2 茄子JA信号转导途径相关基因的ORF区克隆结果
4.2.3 茄子COI1、JAZ1、MYC2基因的生物信息学分析
4.2.3.1 COI1基因的编码蛋白的生物信息学分析
4.2.3.2 JAZ1基因的编码蛋白的生物信息学分析
4.2.3.3 MYC2基因的编码蛋白的生物信息学分析
4.3 讨论
第五章 茄子JA信号转导途径相关基因的表达分析
5.1 材料与方法
5.1.1 材料
5.1.2 方法
5.2 结果与分析
5.2.1 茄子花药总RNA的提取及纯度检测
5.2.2 茄子JA信号转导途径相关基因在茄子花药不同时期的表达分析
5.2.2.1 茄子COI1基因的定量表达分析
5.2.2.2 茄子JAZ1基因的定量表达分析
5.2.2.3 茄子MYC2基因的定量表达分析
5.3 讨论
第六章 结论
参考文献
附录
致谢
在学期间发表论文
在学期间参加的科研项目
【参考文献】：
期刊论文
[1]植物细胞核雄性不育相关bHLH转录因子研究进展[J]. 刘永明,张玲,周建瑜,曹墨菊. 遗传. 2015(12)
[2]辣椒胞质不育系与保持系花药的细胞学和蛋白质组学差异分析[J]. 吕晓菡,方献平,柴伟国,马俊平,周毅飞. 浙江大学学报(农业与生命科学版). 2015(01)
[3]甜菜雄性不育系及保持系花期蛋白差异分析[J]. 程大友,崔杰,牛佳,代翠红,白晨. 哈尔滨工业大学学报. 2014(10)
[4]蛋白质组学的应用研究进展[J]. 尹稳,伏旭,李平. 生物技术通报. 2014(01)
[5]白菜型冬油菜铁超氧化物歧化酶（Fe-SOD）基因的克隆及表达分析[J]. 曾秀存,孙万仓,孙佳,许耀照,方彦,史鹏辉,杨刚,孔德晶,武军艳,刘自刚. 中国农业科学. 2013(21)
[6]苜蓿雄性不育植株与可育植株现蕾初期花蕾蛋白质组比较[J]. 伊风艳,石凤翎,龙瑞才,王璐,熊梅,高翠萍. 西北植物学报. 2013(10)
[7]植物中MYC2转录因子功能研究进展[J]. 沈乾,陆续,张凌,高尔娣,唐克轩. 上海交通大学学报(农业科学版). 2012(06)
[8]烟草细胞质雄性不育系及其保持系的花蕾差异蛋白质分析[J]. 祁建民,马红勃,徐建堂,陈美霞,周东新,王涛,陈顺辉. 作物学报. 2012(07)
[9]T型小麦细胞质雄性不育系、保持系、恢复系胚根及其叶片蛋白质组中的差异蛋白分析[J]. 黄海泉,赵晔萍,荣德福. 湖南农业科学. 2011(19)
[10]植物蛋白质组学技术研究进展[J]. 张根连,范术丽,宋美珍,庞朝友,喻树迅. 生物技术通报. 2011(07)
硕士论文
[1]茄子茉莉酸生物合成途径相关基因的克隆与表达分析[D]. 郭航.西南大学 2015
[2]茄子功能性雄性不育的细胞学及内源激素变化研究[D]. 丁泽琴.西南大学 2014
[3]小麦生理型雄性不育旗叶质膜差异蛋白质组学研究[D]. 宋齐鲁.西北农林科技大学 2013
[4]大鼠机械性脑损伤动态变化的蛋白质组学研究[D]. 杨术旺.河北医科大学 2006
[5]茄子雄性不育的生化分析与分子生物学研究[D]. 牛友芽.湖南大学 2005
本文编号：3683117
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