番茄SYTA克隆表达及番茄SYTA互作蛋白筛选

发布时间：2022-10-11 14:38

　　在动物及拟南芥基因组中,突触结合蛋白基因（synaptotagmin,SYT）是作为含有C2结构域的基因广泛存在。目前已发现大量包含C2结构域的蛋白质,其中大多数参与细胞信号转导或膜转运。SYT都包含五个结构域:囊泡内N–端结构域,跨膜结构域,胞质中C2A,C2B,C–端结构域,其中C2A,C2B是行使功能的主要结构域。拟南芥基因组中含有6个SYT同源基因,分别命名为SYTA–F。已报道拟南芥SYTA在拟南芥盐胁迫应答信号途径中起着重要调节作用。近期研究表明拟南芥SYTA能与TMV的运动蛋白相互作用,在沉默SYTA的拟南芥中TMV运动蛋白的扩散受到抑制。番茄作为茄科植物的代表,是研究蔬菜中果实发育和成熟过裎的典型植物。本研究以2012年完成的番茄基因组测序为基础,经比对有SYTA同源基因存在。为了明确番茄中SYTA的亚细胞定位及筛选预期互作的寄主蛋白,本研究以室内番茄幼苗为材料,克隆番茄SYTA同源基因,进行植物表达分析,并且在茄科植物烟草cDNA文库中用酵母双杂交筛选互作基因,测序比对,发现SYTA可与烟草铁氧还蛋白I（ferredoxin I,Fd–I）在酵母细胞内直接互作。研究结... 

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【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
    1.动物SYTS功能研究进展
        1.1 动物SYT相关亚型分类
        1.2 Synaptotagmin基因家族结构域
        1.3 SYT亚型亚细胞定位及组织分布
    2. 拟南芥SYT研究进展
        2.1 拟南芥中不同亚型分类
        2.2 拟南芥SYTA功能研究
    3. 酵母双杂交研究进展
        3.1 经典酵母双杂交系统
        3.2 其他酵母双杂交系统
        3.3 酵母双杂交主要应用
第二章 引言
第三章 番茄SYTA的克隆、分析和表达
    1.材料与方法
        1.1 试验时间与地点
        1.2 试验材料
        1.3 试验方法
    2.番茄SYTA克隆结果与分析
        2.1 番茄RNA提取
        2.2 番茄SYTA RT-PCR
        2.4 生物信息学分析
    3.番茄SYTA构建至绿色荧光载体植物表达结果与分析
        3.1 番茄SYTA亚克隆
        3.2 重组植物表达载体pPZP–SYTA–GFP农杆菌转化及SYTA–GFP融合蛋白表达
    4.讨论
第三章 番茄SYTA互作蛋白的筛选
    1.试验材料
    2.构建诱饵表达载体PSTT91-SYTA
        2.1 番茄SYTA与pSTT91双酶切
        2.2 重组载体连接
        2.3 电泳检测
        2.4 质粒提取
        2.5 番茄SYTA酵母双杂交系统中自激活及毒性验证
        2.6 利用GAL-4 酵母双杂交系统筛选烟草cDNA文库
        2.7 X-gal蓝斑实验分析筛选阳性克隆
        2.8 酵母L40感受态细胞的制备
        2.9 酵母双杂交技术的操作步骤
    3 结果与分析
        3.1 酵母双杂交诱饵表达载体pSTT91-SYTA的构建
        3.2 番茄SYTA自激活验证
        3.3 诱饵酵母表达载体筛选烟草cDNA文库
        3.4 筛库阳性克隆的测序分析
        3.5 番茄SYTA与Fd I全长蛋白酵母双杂交互作验证
    4.讨论
第五章 结论与展望
    1.结论
    2.展望
参考文献
附录
致谢
在校期间发表论文及参加课题


【参考文献】：
期刊论文
[1]普通烟草铁氧还蛋白Ⅰ的原核表达、抗体制备及在ToMV侵染烟草体内表达分析[J]. 孙现超,李勇,周常勇,青玲.  中国农业科学. 2010(19)
[2]麻疹病毒绒猴细胞受体基因的克隆及功能鉴定[J]. 李凌云,刘鑫,张鹏,齐义鹏,程明.  科学通报. 2002(16)

硕士论文
[1]拟南芥synaptotagmin家族组织定位及非生物胁迫表达谱研究[D]. 田文鹏.兰州大学 2011



本文编号：3690752