番茄Trihelix转录因子家族基因在抗病反应中的功能研究
发布时间：2022-10-18 15:54
转录因子在植物调控对外界病原菌侵染的免疫反应中起重要作用。Trihelix转录因子,又称为GT因子,是一类植物特有的转录因子类型,在调控植物表皮毛形态建成、胚胎和种子发育、花瓣发育分化及应对各种非生物胁迫中起重要作用,但有关其在植物抗病反应中的作用及其机制所知甚少。本研究中,我们采用病毒诱导的基因沉默（VIGS）方法对Trihelix转录因了家族基因逐一沉默,通过对各沉默植株接种灰霉菌（Botrytiscinerea）和番茄丁香假单胞菌番茄致病变种（Pseudomonassyringae pv.tomato DC3000,PstDC3000）来探索 Trihelix 转录因子家族基因在番茄应对病原菌入侵时的抗病作用及其可能的机制。主要研究结果如下:（1）利用生物信息学方法在番茄数据库中搜索鉴定到36个Trihelix转录因子基因,克隆鉴定了其中的27个Trihelix转录因子基因。蛋白保守结构域分析表明,绝大多数都含有至少一个MybDNA结合域。（2）荧光实时定量PCR分析表明,番茄Trihelix转录因子基因在B.cinerea和PstDC3000侵染后呈现不同程度的诱导表达模式,大...
【文章页数】：101 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
致谢
摘要
Abstract
第一章 文献综述及研究背景
1.1 植物先大免疫研究进展
1.1.1 PAMPs/MAMPs触发的植物免疫(PTI)
1.1.2 效应子发的植物免疫(ETI)
1.2 ROS在植物中的研究进展
1.2.1 ROS在植物中产生的来源
1.2.1.1 ROS与植物信号转导
1.2.1.2 ROS与植物NADPH氧化酶
1.2.2 ROS与植物根发育
1.2.3 ROS与植物免疫
1.3 植物Trihelix转录因子家族的生物学功能及其研究进展
1.3.1 Trihelix转录因子的生化与结构特征
1.3.2 Trihelix转录因子家族及其特性
1.3.3 Trihelix转录因子在植物生长发育中的调控作用
1.3.4 Trihelix转录因子在植物应对非生物与生物胁迫反应中的作用
1.4 本研究的目的意义及主要内容
1.4.1 研究的目的意义
1.4.2 研究的要内容
第二章 材料与方法
2.1 试验材料
2.1.1 植物材料
2.1.2 植物培养与处理
2.1.3 菌株与载体
2.1.4 酶与各种生化试剂
2.1.5 引物
2.2 试验方法
2.2.1 Trihelix转录因子家族基因的鉴定与命名
2.2.2 DNA序列的测定及比对分析
2.3 基因cDNA克隆
2.4 总RNA的提取与反转录
2.5 荧光实时定量PCR(Real-timePCR)
2.6 VIGS载体构建和农杆菌转化
2.7 VIGS体系的构建
2.8 GFP过表达载体的构建
2.9 本氏烟瞬时表达体系的建立
2.10 总蛋白的提取
2.11 灰霉菌的培养
2.11.1 灰霉菌接种处理
2.11.2 灰霉菌病斑大小的统计
2.11.3 灰霉菌菌量测定
2.12 Pseudomonas syringae pv.tomato DC3000接种处理
2.13 ROS的测定
2.14 台酚蓝染色、DAB和NBT染色
2.15 亚细胞定位
第三章 Trhelix转录因子家族基因的鉴定、表达模式分析及抗病功能研究
3.1 Trhelix转录因子家族基因的鉴定和蛋白结构域分析
3.1.1 番茄Trihelix转录因子家族基因的克隆与鉴定
3.1.2 番茄Trihelix转录因子家族蛋白结构域分析
3.2 Trihelix转录因子家族基因在灰霉菌和丁香假单胞菌番茄致病变种诱导下的表达分析
3.3 Trhelix转录因子家族基因的抗病功能研究
3.3.1 接种灰霉菌的病害表型及病原菌生物量
3.3.2 本氏烟瞬时过表达4个Trihelix转录因子对灰霉菌的敏感性测定
3.3.3 4个Trihelix转录因子家族基因接种PstDC3000的病害表型及病原菌生物量
3.4 4个Trihelix转录因子家族基因的抗病机理分析
3.4.1 SIGT7/SIGT13/SIGT14/SIGT15沉默植株在chitooctaose与flg22诱导下的ROS检测
3.4.2 SIGT7/SIGT13/SIGT14/SIGT15沉默植株在灰霉菌诱导下的过氧化氢与超氧阴离子积累情况
3.4.3 SIGT7/SIGT13/SIGT14/SIGT15沉默植株在灰霉菌诱导时PR基因的表达分析
3.5 SIGT7、SIGT13、SIGT14和SIGT15亚细胞定位
第四章 小结与讨论
参考文献
附录 本文的引物序列
【参考文献】：
期刊论文
[1]植物光信号传导途径中重要调控基因概述[J]. 丁超,张树伟,王新胜,吴霞,杨帆,马纪农,李燕娥,马燕斌. 山西农业科学. 2015(12)
本文编号：3692614
【文章页数】：101 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
致谢
摘要
Abstract
第一章 文献综述及研究背景
1.1 植物先大免疫研究进展
1.1.1 PAMPs/MAMPs触发的植物免疫(PTI)
1.1.2 效应子发的植物免疫(ETI)
1.2 ROS在植物中的研究进展
1.2.1 ROS在植物中产生的来源
1.2.1.1 ROS与植物信号转导
1.2.1.2 ROS与植物NADPH氧化酶
1.2.2 ROS与植物根发育
1.2.3 ROS与植物免疫
1.3 植物Trihelix转录因子家族的生物学功能及其研究进展
1.3.1 Trihelix转录因子的生化与结构特征
1.3.2 Trihelix转录因子家族及其特性
1.3.3 Trihelix转录因子在植物生长发育中的调控作用
1.3.4 Trihelix转录因子在植物应对非生物与生物胁迫反应中的作用
1.4 本研究的目的意义及主要内容
1.4.1 研究的目的意义
1.4.2 研究的要内容
第二章 材料与方法
2.1 试验材料
2.1.1 植物材料
2.1.2 植物培养与处理
2.1.3 菌株与载体
2.1.4 酶与各种生化试剂
2.1.5 引物
2.2 试验方法
2.2.1 Trihelix转录因子家族基因的鉴定与命名
2.2.2 DNA序列的测定及比对分析
2.3 基因cDNA克隆
2.4 总RNA的提取与反转录
2.5 荧光实时定量PCR(Real-timePCR)
2.6 VIGS载体构建和农杆菌转化
2.7 VIGS体系的构建
2.8 GFP过表达载体的构建
2.9 本氏烟瞬时表达体系的建立
2.10 总蛋白的提取
2.11 灰霉菌的培养
2.11.1 灰霉菌接种处理
2.11.2 灰霉菌病斑大小的统计
2.11.3 灰霉菌菌量测定
2.12 Pseudomonas syringae pv.tomato DC3000接种处理
2.13 ROS的测定
2.14 台酚蓝染色、DAB和NBT染色
2.15 亚细胞定位
第三章 Trhelix转录因子家族基因的鉴定、表达模式分析及抗病功能研究
3.1 Trhelix转录因子家族基因的鉴定和蛋白结构域分析
3.1.1 番茄Trihelix转录因子家族基因的克隆与鉴定
3.1.2 番茄Trihelix转录因子家族蛋白结构域分析
3.2 Trihelix转录因子家族基因在灰霉菌和丁香假单胞菌番茄致病变种诱导下的表达分析
3.3 Trhelix转录因子家族基因的抗病功能研究
3.3.1 接种灰霉菌的病害表型及病原菌生物量
3.3.2 本氏烟瞬时过表达4个Trihelix转录因子对灰霉菌的敏感性测定
3.3.3 4个Trihelix转录因子家族基因接种PstDC3000的病害表型及病原菌生物量
3.4 4个Trihelix转录因子家族基因的抗病机理分析
3.4.1 SIGT7/SIGT13/SIGT14/SIGT15沉默植株在chitooctaose与flg22诱导下的ROS检测
3.4.2 SIGT7/SIGT13/SIGT14/SIGT15沉默植株在灰霉菌诱导下的过氧化氢与超氧阴离子积累情况
3.4.3 SIGT7/SIGT13/SIGT14/SIGT15沉默植株在灰霉菌诱导时PR基因的表达分析
3.5 SIGT7、SIGT13、SIGT14和SIGT15亚细胞定位
第四章 小结与讨论
参考文献
附录 本文的引物序列
【参考文献】：
期刊论文
[1]植物光信号传导途径中重要调控基因概述[J]. 丁超,张树伟,王新胜,吴霞,杨帆,马纪农,李燕娥,马燕斌. 山西农业科学. 2015(12)
本文编号：3692614
本文链接：https://www.wllwen.com/nykjlw/yylw/3692614.html
