基于GWAS定位的番茄灰霉菌抗性相关基因GW9和GW13的功能鉴定

发布时间：2022-10-20 14:40

　　本论文是基于对300多份番茄重测序材料接种灰霉菌,将其病斑面积与测序结果进行GWAS（Genome-wide association study）关联分析,候选出抗性基因。对初步候选的基因进行遗传转化,并对转化植株进行多次重复接病处理后,筛选出稳定抗性或感性基因,同时对其功能进行了鉴定。初步结果如下:1.对GWAS候选基因的T0代超量转基因材料进行接种鉴定,初步筛选出相对于对照偏感或偏抗的候选基因材料。2.对候选基因的T1、T2代进行重复抗性鉴定,进一步筛选出稳定抗、感材料GW13以及GW9。与对照相比,GW13超量表达植株表现偏抗的表型,而GW9超量表达植株表现出偏感的表型,其他方面并无明显差异的表型。3.分别分析GW9以及GW13两个基因在A57中受灰霉菌的诱导程度,结果表明两个基因在对灰霉菌较抗的TS材料中表达量均不同程度的提高,而在对灰霉菌较感的TS材料中表达量均不同程度的下降,说明两个基因都受到灰霉菌的诱导表达,但是具体机制并不清楚。4.对GW9和GW13两个基因SNP位点分析发现,在不同的抗感TS材料中,GW13编码框内有一个SNP位点的差异。GW9的编码框内并没有检测到S... 

【文章页数】：50 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
缩略语表
1.前言
    1.1 研究课题的由来
    1.2 文献综述
        1.2.1 植物免疫
        1.2.2 细胞自噬与植物免疫
        1.2.3 活性氧在植物抗性中的作用
        1.2.4 MAPK级联反应在植物体抗病过程中的作用
        1.2.5 铜胺氧化酶概述
        1.2.6 腺苷酸激酶概述
    1.3 研究目的与意义
2.材料与方法
    2.1 植物材料
    2.2 菌株及载体
    2.3 实验用工具酶、试剂盒及试剂
    2.4 转基因材料的抗性鉴定
        2.4.1 灰霉菌的保存与孢子制备
        2.4.2 转基因植株的抗性鉴定
        2.4.3 病斑面积统计
    2.5 候选基因的功能鉴定
        2.5.1 GWAS候选基因对灰霉菌抗性的重复鉴定
        2.5.2 干涉载体的构建
        2.5.3 干涉载体的遗传转化
        2.5.4 T0代干涉植株阳性检测
        2.5.5 T0代转基因植株表达量检测
        2.5.6 SNP位点的鉴定
        2.5.7 灰霉菌诱导表达谱
        2.5.8 基因在激素突变体中的表达量检测
        2.5.9 抗性途径标记基因的表达量检测
        2.5.10 GW9钓饵载体的构建
        2.5.11 单克隆测序对比分析互作候选基因
        2.5.12 酵母双杂点对点互作验证
        2.5.13 过氧化氢原位检测（DAB染色）
3 结果与分析
    3.1 GWAS候选基因的载体构建以及转基因材料的获得
    3.2 GWAS候选基因的抗性鉴定
        3.2.1 GW9转基因植株抗性鉴定及结果分析
        3.2.2 GW13转基因植株的抗性鉴定及结果分析
    3.3 转基因T0代植株表达量检测
    3.4 基因的功能鉴定
        3.4.1 GW9及GW13基因的结构分析
        3.4.2 灰霉菌诱导表达谱
        3.4.3 基因在激素突变体中的表达量检测
        3.4.4 GW9、GW13转基因材料中抗性标记基因的表达量分析
        3.4.5 SNP位点的鉴定
        3.4.6 GW9酵母双杂结果分析
        3.4.7 活性氧的检测
4.讨论
    4.1 GW9功能鉴定结果与讨论
    4.2 GW13功能鉴定结果与讨论
    4.3 实验后续工作预想
        4.3.1 关于GW9后续工作的设想
        4.3.2 关于GW13后续工作的设想
参考文献
附录
致谢



本文编号：3694721