两种鸢尾高效组培体系建立及遗传转化体系初探

发布时间：2022-12-11 20:39

　　溪荪（Iris sanguinea）与玉蝉花（I.ensata）是鸢尾科鸢尾属中非常耐寒的多年生草本植物,其花型奇特,观赏价值极高,在北方地区有着广阔的应用前景,为了今后开展基因工程育种,本课题组前期已开展了这两个种的组培体系构建,但在基因工程育种中高效的组培体系更有利于提高转基因材料的分化率,故本研究又尝试采用不同的外植体材料构建愈伤诱导率和分化率都比较高的组培体系,并尝试进行其遗传转化体系的建立,研究成果可为将来的分子育种工作奠定基础。主要研究成果如下:1.建立以玉蝉花根段为外植体的高效组培体系:选择成熟的玉蝉花种子,种子消毒后剥除种皮,将处理好的种子接入固体培养基MS+3.5 g/L琼脂中培养20d,获得无菌幼苗。将长有3-4片叶的幼苗接入固体培养基MS+活性炭1.0 g/L+4.0 g/L琼脂,培养20-25d,选择不定根中间带有幼嫩须根的部位作为外植体,须根切口处产生愈伤组织。愈伤诱导的最佳培养基为 MS+6-BA 1.0 mg/L+2,4-D 2.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L+7.0 g/L琼脂,诱导率为100.00%;愈伤增殖的最佳培养基为MS+6-BA0.2 ... 

【文章页数】：80 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
1 绪论
    1.1 鸢尾属植物组织培养研究进展
        1.1.1 组织培养组培途径
        1.1.2 组织培养组培影响因素
    1.2 单子叶植物遗传转化技术研究进展
        1.2.1 单子叶植物遗传转化概况
        1.2.2 农杆菌介导的遗传转化体系影响因素
    1.3 溪荪和玉蝉花研究现状
    1.4 本研究目的与意义
2 玉蝉花根段组织培养体系的建立
    2.1 试验材料
    2.2 试验方法
        2.2.1 无菌幼苗的获取
        2.2.2 外植体的获取
        2.2.3 愈伤诱导培养基的筛选
        2.2.4 愈伤增殖培养基的筛选
        2.2.5 抑制愈伤增殖的内生菌污染
        2.2.6 不定芽诱导培养基的筛选
        2.2.7 生根培养
        2.2.8 无菌苗移栽成活
        2.2.9 数据分析
    2.3 结果与分析
        2.3.1 不同琼脂量对玉蝉花生根的影响
        2.3.2 不同激素组合对愈伤诱导的影响
        2.3.3 不同激素配比对愈伤增殖的影响
        2.3.4 不同抑菌剂对愈伤增殖的内生菌污染抑制效果
        2.3.5 不同外源激素组合对分化不定芽的影响
        2.3.6 添加活性炭及生长素NAA对生根的影响
        2.3.7 组培苗的炼苗及移栽
    2.4 本章小节
3 溪荪组织培养体系的建立
    3.1 试验材料
    3.2 试验方法
        3.2.1 外植体的获取
        3.2.2 愈伤诱导培养基的筛选
        3.2.3 愈伤增殖及抑制愈伤增殖的内生菌污染
        3.2.4 不定芽诱导培养基的筛选
        3.2.5 生根培养
        3.2.6 无菌苗移栽成活
        3.2.7 数据分析
    3.3 结果与分析
        3.3.1 外植体对愈伤诱导率的影响
        3.3.2 愈伤增殖及抑菌剂对愈伤增殖的内生菌污染抑制效果
        3.3.3 不同激素组合对诱导不定芽的影响
        3.3.4 生根培养
        3.3.5 组培苗的炼苗及移栽
    3.4 本章小节
4 两种鸢尾遗传转化体系的初探
    4.1 试验材料
        4.1.1 受体材料
        4.1.2 菌株
        4.1.3 主要试剂
        4.1.4 培养基
    4.2 试验方法
        4.2.1 侵染材料的准备
        4.2.2 农杆菌侵染工作菌液的准备
        4.2.3 适合根段诱导愈伤的Carb浓度筛选
        4.2.4 适宜愈伤分化不定芽的Kana浓度筛选
        4.2.5 农杆菌介导侵染时间及共培养时间的筛选
        4.2.6 GUS化学组织染色检测
        4.2.7 数据分析
    4.3 结果与分析
        4.3.1 侵染后根段诱导愈伤的适宜Carb浓度的确定
        4.3.2 Kana浓度对愈伤分化的影响
        4.3.3 菌液侵染时间及共培养时间对诱导效率的影响
        4.3.4 GUS染色检测结果
    4.4 本章小节
5 讨论
    5.1 两种鸢尾组织培养体系的建立
    5.2 影响两种鸢尾遗传转化体系建立的因素
6 结论与建议
    6.1 结论
    6.2 建议
参考文献
攻读学位期间发表的学术论文
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]农杆菌介导谷子成熟胚遗传转化体系的建立与优化[J]. 李颜方,杜艳伟,张正,王高鸿,赵根有,赵晋锋,余爱丽.  作物杂志. 2019(03)
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[3]“Gros Michel”香蕉胚性细胞悬浮系及遗传转化体系的建立[J]. 邵秀红,吴少平,窦同心,邓贵明,盛鸥,毕方铖,胡春华,易干军,杨乔松.  分子植物育种. 2019(03)
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[5]玉蝉花愈伤组织的诱导及植株再生研究[J]. 王玲,唐彪,曹柏,宋红.  种子. 2018(06)
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[8]盐胁迫对溪荪叶片生长及生理特性的影响[J]. 戴胜玥,梁英辉,穆丹,岳俊丽,鲁佳,苏鹏,白海琳.  安徽农学通报. 2018(07)
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博士论文
[1]鸢尾属植物遗传多样性评价及干旱高温胁迫生理响应机制[D]. 郭彩霞.华中农业大学 2016

硕士论文
[1]SPGE技术优化及在溪荪花色调控相关基因表达研究中的应用[D]. 王恺.东北林业大学 2018
[2]两个品种铁线莲的组织培养及工厂化生产成本控制研究[D]. 黄鑫.东北林业大学 2018
[3]玉簪组织培养及试管苗内生菌污染控制研究[D]. 唐渊.宁夏大学 2015
[4]紫花玉簪愈伤组织的诱导及农杆菌介导遗传转化体系的建立[D]. 徐丽萍.吉林农业大学 2015
[5]六个有髯鸢尾品种离体快繁技术的研究[D]. 张芳.吉林农业大学 2012
[6]农杆菌介导的CBF1基因转化唐菖蒲的研究[D]. 王磊.东北农业大学 2009
[7]鸢尾属（Iris.L）部分植物组织培养及耐荫性的研究[D]. 李雪莹.南京林业大学 2006
[8]小麦不同外植体农杆菌转化体系研究[D]. 王艳丽.中国农业科学院 2006



本文编号：3719463