核桃内果皮木质素代谢相关基因克隆及表达分析
发布时间：2022-12-17 22:11
核桃露仁现象使核桃不便于采后漂洗,在运输、贮藏等过程中其内果皮也容易破碎,使裂果率、虫果率和种仁受污染的机率都增高,严重影响了核桃的外观品质和销售。木质素是核桃内果皮的主要成分,因此研究与木质素代谢相关的基因对核桃露仁现象机理的研究有着重要的意义。本研究利用新疆特有露仁核桃种质资源‘温138’核桃为研究对象,以‘纸皮’核桃作为对照,从其内果皮中克隆到苯丙氨酸解氨酶（PAL）、4-香豆酸辅酶A连接酶（4CL）以及肉桂酰辅酶A还原酶（CCR）3种基因的cDNA片段。并利用实时荧光定量PCR技术,对这3种基因在核桃硬核期的不同发育时期内,在核桃内果皮中的表达量进行分析。1.核桃PAL基因的克隆及表达分析（1）通过RT-PCR方法克隆得到的‘温138’核桃及‘纸皮’核桃PAL基因的cDNA片段,分别命名为WJ-PAL与ZJ-PAL。WJ-PAL含有600bp的最大开放阅读框（ORF）,可编码200个氨基酸,与黑核桃（AJ278454.1）的同源性达到89%。ZJ-PAL含有690bp的最大开放阅读框（ORF）,可编码230个氨基酸,与黑核桃（AJ278454.1）的同源性为96%。（2）WJ-...
【文章页数】：105 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略词表
前言
第1章 绪论
1.1 核桃果皮的研究
1.1.1 核桃果皮的结构
1.1.2 核桃果皮的发育过程
1.1.3 核桃内果皮的研究
1.2 木质素的研究进展
1.2.1 木质素的结构组成
1.2.2 木质素的生物合成途径
1.2.3 木质素代谢相关基因的研究
1.2.4 植物木质素研究展望
1.3 研究目的及意义
1.4 主要研究内容和技术路线
第2章 PAL、4CL与CCR基因的克隆及生物信息学分析
2.1 试验材料
2.1.1 植物材料
2.1.2 菌株和载体
2.1.3 实验药品及试剂
2.1.4 实验仪器
2.2 试验方法
2.2.1 总RNA的提取
2.2.2 cDNA第一链的合成
2.2.3 PAL、4CL及CCR基因克隆
2.2.4 PCR扩增目的片段产物回收
2.2.5 目的片段与T-载体的连接
2.2.6 E.coil热击感受态细胞的制备（CaCL2法）
2.2.7 连接产物热击转化与涂板及菌液培养
2.2.8 质粒提取
2.2.9 酶切鉴定
2.2.10 生物信息学分析
2.3 结果与分析
2.3.1 核桃内果皮总RNA的提取
2.3.2 PAL基因的克隆
2.3.3 PAL基因生物信息学分析
2.3.4 4CL基因的克隆
2.3.5 4CL基因生物信息学分析
2.3.6 CCR基因的克隆
2.3.7 CCR基因生物信息学分析
2.4 讨论
第3章 PAL、4CL及CCR基因的表达分析
3.1 试验材料
3.1.1 植物材料
3.1.2 主要药品及试剂
3.1.3 主要仪器
3.2 试验方法
3.2.1 总RNA提取
3.2.2 cDNA第一链的合成
3.2.3 引物设计
3.2.4 PAL、4CL及CCR基因Real-Time PCR
3.3 结果与分析
3.3.1 PAL基因
3.3.2 4CL基因
3.3.3 CCR基因
3.4 讨论
全文结论
参考文献
致谢
作者简介
【参考文献】：
期刊论文
[1]茶树‘紫娟’肉桂酰辅酶A还原酶基因（CCR）克隆及序列分析[J]. 陈林波,宋维希,李晓霞,夏丽飞,周萌,梁名志,焉文光. 西北农业学报. 2016(01)
[2]无核小枣木质素合成基因Zj4CL的克隆和表达分析[J]. 裴艳梅,王金鑫,彭建营. 植物遗传资源学报. 2016(01)
[3]核桃硬壳发育期内果皮木质素与相关酶活性的变化[J]. 文菁,赵书岗,王红霞,张志华,李夕勃. 园艺学报. 2015(11)
[4]象草PpCCR基因正、反义表达载体的构建及对烟草的转化[J]. 彭小群,张博雅,刘洁雯,王亚,解新明. 草业科学. 2015(10)
[5]苎麻肉桂酰辅酶A还原酶基因cDNA序列的克隆与分析[J]. 唐映红,陈建荣,刘芳,袁有美,郭清泉,昌洪涛. 作物学报. 2015(09)
[6]苯丙氨酸解氨酶在诱导黄瓜幼苗抗寒性中的作用[J]. 董春娟,李亮,曹宁,尚庆茂,张志刚. 应用生态学报. 2015(07)
[7]RNAi沉默Fa4CL基因对草莓果实花色苷代谢的影响[J]. 张蕾,林晓,罗赟,汪佳易,徐川,王红清. 果树学报. 2015(03)
[8]不同抗倒性甜荞茎秆木质素合成关键酶基因的表达分析[J]. 胡丹,刘星贝,汪灿,杨浩,李鹤鑫,阮仁武,袁晓辉,易泽林. 中国农业科学. 2015(09)
[9]作物中4-香豆酸辅酶A连接酶的遗传进化分析[J]. 李珊珊,张微,孙莉莉,胡宝忠,常缨. 作物杂志. 2015(02)
[10]砀山酥梨4CL基因家族的全基因组鉴定与分析[J]. 曹运鹏,方志,李姝妹,闫冲冲,丁庆庆,程曦,林毅,郭宁,蔡永萍. 遗传. 2015(07)
本文编号：3720741
【文章页数】：105 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略词表
前言
第1章 绪论
1.1 核桃果皮的研究
1.1.1 核桃果皮的结构
1.1.2 核桃果皮的发育过程
1.1.3 核桃内果皮的研究
1.2 木质素的研究进展
1.2.1 木质素的结构组成
1.2.2 木质素的生物合成途径
1.2.3 木质素代谢相关基因的研究
1.2.4 植物木质素研究展望
1.3 研究目的及意义
1.4 主要研究内容和技术路线
第2章 PAL、4CL与CCR基因的克隆及生物信息学分析
2.1 试验材料
2.1.1 植物材料
2.1.2 菌株和载体
2.1.3 实验药品及试剂
2.1.4 实验仪器
2.2 试验方法
2.2.1 总RNA的提取
2.2.2 cDNA第一链的合成
2.2.3 PAL、4CL及CCR基因克隆
2.2.4 PCR扩增目的片段产物回收
2.2.5 目的片段与T-载体的连接
2.2.6 E.coil热击感受态细胞的制备（CaCL2法）
2.2.7 连接产物热击转化与涂板及菌液培养
2.2.8 质粒提取
2.2.9 酶切鉴定
2.2.10 生物信息学分析
2.3 结果与分析
2.3.1 核桃内果皮总RNA的提取
2.3.2 PAL基因的克隆
2.3.3 PAL基因生物信息学分析
2.3.4 4CL基因的克隆
2.3.5 4CL基因生物信息学分析
2.3.6 CCR基因的克隆
2.3.7 CCR基因生物信息学分析
2.4 讨论
第3章 PAL、4CL及CCR基因的表达分析
3.1 试验材料
3.1.1 植物材料
3.1.2 主要药品及试剂
3.1.3 主要仪器
3.2 试验方法
3.2.1 总RNA提取
3.2.2 cDNA第一链的合成
3.2.3 引物设计
3.2.4 PAL、4CL及CCR基因Real-Time PCR
3.3 结果与分析
3.3.1 PAL基因
3.3.2 4CL基因
3.3.3 CCR基因
3.4 讨论
全文结论
参考文献
致谢
作者简介
【参考文献】：
期刊论文
[1]茶树‘紫娟’肉桂酰辅酶A还原酶基因（CCR）克隆及序列分析[J]. 陈林波,宋维希,李晓霞,夏丽飞,周萌,梁名志,焉文光. 西北农业学报. 2016(01)
[2]无核小枣木质素合成基因Zj4CL的克隆和表达分析[J]. 裴艳梅,王金鑫,彭建营. 植物遗传资源学报. 2016(01)
[3]核桃硬壳发育期内果皮木质素与相关酶活性的变化[J]. 文菁,赵书岗,王红霞,张志华,李夕勃. 园艺学报. 2015(11)
[4]象草PpCCR基因正、反义表达载体的构建及对烟草的转化[J]. 彭小群,张博雅,刘洁雯,王亚,解新明. 草业科学. 2015(10)
[5]苎麻肉桂酰辅酶A还原酶基因cDNA序列的克隆与分析[J]. 唐映红,陈建荣,刘芳,袁有美,郭清泉,昌洪涛. 作物学报. 2015(09)
[6]苯丙氨酸解氨酶在诱导黄瓜幼苗抗寒性中的作用[J]. 董春娟,李亮,曹宁,尚庆茂,张志刚. 应用生态学报. 2015(07)
[7]RNAi沉默Fa4CL基因对草莓果实花色苷代谢的影响[J]. 张蕾,林晓,罗赟,汪佳易,徐川,王红清. 果树学报. 2015(03)
[8]不同抗倒性甜荞茎秆木质素合成关键酶基因的表达分析[J]. 胡丹,刘星贝,汪灿,杨浩,李鹤鑫,阮仁武,袁晓辉,易泽林. 中国农业科学. 2015(09)
[9]作物中4-香豆酸辅酶A连接酶的遗传进化分析[J]. 李珊珊,张微,孙莉莉,胡宝忠,常缨. 作物杂志. 2015(02)
[10]砀山酥梨4CL基因家族的全基因组鉴定与分析[J]. 曹运鹏,方志,李姝妹,闫冲冲,丁庆庆,程曦,林毅,郭宁,蔡永萍. 遗传. 2015(07)
本文编号：3720741
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