大白菜春化相关基因Bra028171功能鉴定
发布时间：2022-12-21 23:45
春化是大白菜[Brassica campestris L.ssp.pekinensis（Lour.）Olsson]开花途径中一个重要的阶段,大白菜需要一定的低温诱导才能从营养生长转变为生殖生长,进而抽薹开花。在春化过程中有一系列基因发挥着作用,共同调节植物的开花进程。本试验所研究的未知基因Bra028171是本实验室前期的一个研究中,经过春化处理后发生甲基化变化的一个基因,Bra028171位于大白菜第4号染色体上。Bra028171的长度为786bp,是一段保守序列,该基因在拟南芥中有同源基因At5g38320,该基因功能同样未知。本试验通过克隆该基因,研究其亚细胞定位,探究此基因的表达模式以及构建了超表达和RNAi载体并转化到模式植物拟南芥中来初步分析此基因的功能,进而摸索探究该基因在大白菜春化过程中所发挥的作用。为大白菜抽薹开花的进程提供参考,同时为预防大白菜未熟抽薹的现象提供理论依据。试验结果归纳如下:（1）通过对Bra028171的序列分析,我们发现该基因在拟南芥中有一个同源基因At5g38320,该基因同样是未知基因。通过对Bra028171的生物信息学分析,我们得到了一些...
【文章页数】：57 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
英文摘要
1 前言
1.1 研究的目的与意义
1.2 国内外研究进展
1.2.1 大白菜春化作用的特点
1.2.2 高等植物成花的分子调控途径
1.2.3 Bra028171的来源
1.3 本实验技术路线
2 材料与方法
2.1 材料
2.1.1 植物材料
2.1.2 细菌植株和质粒载体
2.1.3 主要试剂和试剂盒
2.1.4 主要试验仪器和器材
2.1.5 试验所需软件
2.2 试验方法
2.2.1 Bra028171基因的克隆
2.2.2 Bra028171实时荧光定量PCR分析
2.2.3 Bra028171基因的亚细胞定位
2.2.4 Bra028171基因表达载体的构建
2.2.5 重组质粒的农杆菌转化
2.2.6 农杆菌花序侵染法转化
2.2.7 抗性植株的分子及形态学鉴定
3 结果与分析
3.1 Bra028171基因的克隆
3.1.1 大白菜DNA的提取
3.1.2 目的片段的获得与测序
3.2 Bra028171生物信息学分析
3.2.1 Bra028171序列分析
3.2.2 Bra028171顺式作用元件分析
3.3 Bra028171表达模式的分析
3.3.1 大白菜总RNA的提取
3.3.2 Bra028171在不同部位的表达分析
3.3.3 不同春化时间下Bra028171的表达量
3.4 Bra028171亚细胞定位分析
3.5 Bra028171植物表达载体的构建和农杆菌转化
3.5.1 Bra028171超表达载体的构建
3.5.2 Bra028171RNAi载体的构建
3.5.3 植物表达载体的农杆菌转化
3.6 Bra028171植物表达载体对拟南芥的遗传转化
3.6.1 T1代转基因拟南芥的筛选
3.6.2 转基因植株的分子检测
3.6.3 转基因拟南芥T2代的获得及表型分析与鉴定
4 讨论
4.1 Bra028171的序列分析
4.2 Bra028171表达模式分析
4.3 Bra028171亚细胞定位分析
4.4 Bra028171植物表达载体的构建和拟南芥的遗传转化
4.5 本研究的创新与不足
5 结论
致谢
参考文献
附录
攻读硕士学位期间发表的学术论文
【参考文献】：
期刊论文
[1]植物开花调控途径[J]. 刘永平,杨静,杨明峰. 生物工程学报. 2015(11)
[2]拟南芥开花时间调控的分子基础[J]. 张艺能,周玉萍,陈琼华,黄小玲,田长恩. 植物学报. 2014(04)
[3]植物细胞中瞬时表达系统的建立及研究进展[J]. 周丹丹,俞嘉宁. 中国农学通报. 2013(24)
[4]植物开花调控机理研究进展[J]. 李朝炜,朱昀. 生物学教学. 2011(06)
[5]拟南芥开花诱导途径分子机制研究进展[J]. 徐雷,贾飞飞,王利琳. 西北植物学报. 2011(05)
[6]高等植物CO基因研究进展[J]. 付建新,王翊,戴思兰. 分子植物育种. 2010(05)
[7]高等植物开花诱导研究进展[J]. 孙昌辉,邓晓建,方军,储成才. 遗传. 2007(10)
[8]植物开花时间调控的信号途径[J]. 曾群,赵仲华,赵淑清. 遗传. 2006(08)
[9]拟南芥开花时间调控的研究进展[J]. 张素芝,左建儒. 生物化学与生物物理进展. 2006(04)
[10]用绿色荧光蛋白和洋葱表皮细胞检测拟南芥rd29A基因启动子活性的方法[J]. 张俊莲,王蒂,张金文,陈正华. 植物生理学通讯. 2005(06)
硕士论文
[1]FT基因在桑树生长状态转变中的表达分析[D]. 刘立群.西北农林科技大学 2014
[2]连续春化繁殖导致大白菜冬性减弱的分子机理初探[D]. 王晓丽.东北农业大学 2013
[3]小黑杨FT-like基因的克隆、原核表达及植物超表达、RNAi表达载体的构建[D]. 王沙沙.东北林业大学 2011
本文编号：3723001
【文章页数】：57 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
英文摘要
1 前言
1.1 研究的目的与意义
1.2 国内外研究进展
1.2.1 大白菜春化作用的特点
1.2.2 高等植物成花的分子调控途径
1.2.3 Bra028171的来源
1.3 本实验技术路线
2 材料与方法
2.1 材料
2.1.1 植物材料
2.1.2 细菌植株和质粒载体
2.1.3 主要试剂和试剂盒
2.1.4 主要试验仪器和器材
2.1.5 试验所需软件
2.2 试验方法
2.2.1 Bra028171基因的克隆
2.2.2 Bra028171实时荧光定量PCR分析
2.2.3 Bra028171基因的亚细胞定位
2.2.4 Bra028171基因表达载体的构建
2.2.5 重组质粒的农杆菌转化
2.2.6 农杆菌花序侵染法转化
2.2.7 抗性植株的分子及形态学鉴定
3 结果与分析
3.1 Bra028171基因的克隆
3.1.1 大白菜DNA的提取
3.1.2 目的片段的获得与测序
3.2 Bra028171生物信息学分析
3.2.1 Bra028171序列分析
3.2.2 Bra028171顺式作用元件分析
3.3 Bra028171表达模式的分析
3.3.1 大白菜总RNA的提取
3.3.2 Bra028171在不同部位的表达分析
3.3.3 不同春化时间下Bra028171的表达量
3.4 Bra028171亚细胞定位分析
3.5 Bra028171植物表达载体的构建和农杆菌转化
3.5.1 Bra028171超表达载体的构建
3.5.2 Bra028171RNAi载体的构建
3.5.3 植物表达载体的农杆菌转化
3.6 Bra028171植物表达载体对拟南芥的遗传转化
3.6.1 T1代转基因拟南芥的筛选
3.6.2 转基因植株的分子检测
3.6.3 转基因拟南芥T2代的获得及表型分析与鉴定
4 讨论
4.1 Bra028171的序列分析
4.2 Bra028171表达模式分析
4.3 Bra028171亚细胞定位分析
4.4 Bra028171植物表达载体的构建和拟南芥的遗传转化
4.5 本研究的创新与不足
5 结论
致谢
参考文献
附录
攻读硕士学位期间发表的学术论文
【参考文献】：
期刊论文
[1]植物开花调控途径[J]. 刘永平,杨静,杨明峰. 生物工程学报. 2015(11)
[2]拟南芥开花时间调控的分子基础[J]. 张艺能,周玉萍,陈琼华,黄小玲,田长恩. 植物学报. 2014(04)
[3]植物细胞中瞬时表达系统的建立及研究进展[J]. 周丹丹,俞嘉宁. 中国农学通报. 2013(24)
[4]植物开花调控机理研究进展[J]. 李朝炜,朱昀. 生物学教学. 2011(06)
[5]拟南芥开花诱导途径分子机制研究进展[J]. 徐雷,贾飞飞,王利琳. 西北植物学报. 2011(05)
[6]高等植物CO基因研究进展[J]. 付建新,王翊,戴思兰. 分子植物育种. 2010(05)
[7]高等植物开花诱导研究进展[J]. 孙昌辉,邓晓建,方军,储成才. 遗传. 2007(10)
[8]植物开花时间调控的信号途径[J]. 曾群,赵仲华,赵淑清. 遗传. 2006(08)
[9]拟南芥开花时间调控的研究进展[J]. 张素芝,左建儒. 生物化学与生物物理进展. 2006(04)
[10]用绿色荧光蛋白和洋葱表皮细胞检测拟南芥rd29A基因启动子活性的方法[J]. 张俊莲,王蒂,张金文,陈正华. 植物生理学通讯. 2005(06)
硕士论文
[1]FT基因在桑树生长状态转变中的表达分析[D]. 刘立群.西北农林科技大学 2014
[2]连续春化繁殖导致大白菜冬性减弱的分子机理初探[D]. 王晓丽.东北农业大学 2013
[3]小黑杨FT-like基因的克隆、原核表达及植物超表达、RNAi表达载体的构建[D]. 王沙沙.东北林业大学 2011
本文编号：3723001
本文链接：https://www.wllwen.com/nykjlw/yylw/3723001.html
