MdTAS4-siR81（-）靶向MdbHLH3调控苹果果皮花青苷形成机理研究及苹果WD40蛋白家族分析
发布时间：2023-01-25 21:21
花青苷含量决定了苹果果皮颜色,目前关于苹果花青苷的研究主要集中于转录水平,而在转录后水平的研究相对较少,小RNA主要在转录后水平发挥功能从而影响植物的表型。本研究首先从不套袋‘澳洲青苹’绿色果皮和套袋处理后红色果皮小RNA高通量测序结果中找出了差异表达的小RNA:MdTAS4-siR81（-）。并对MdTAS4-siR81（-）在果实着色中的功能进行了研究。WD40,bHLH,MYB复合物可通过调控结构基因影响花青苷的形成,目前MYB和bHLH转录因子家族已经在苹果中被全面鉴定,而WD40蛋白还没有相关报道,本研究对苹果新基因组中WD40基因进行了鉴定,分类,进化分析及表达分析。获得了以下结果:1.小RNA高通量测序结果中,不套袋‘澳洲青苹’绿色果皮中MdTAS4-siR81（-）显著高于套袋‘澳洲青苹’红色果皮。在‘澳洲靑苹’和‘新红星’着色过程中,MdbHLH3与花青苷含量有一个相同的变化趋势,而MdTAS4-siR81（-）与MdbHLH3有一个相反的变化趋势。5’RACE证明在‘澳洲靑苹’和‘新红星’中MdTAS4-siR81（-）均可靶向切割MdbHLH3。苹果果皮中瞬时过表...
【文章页数】：76 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
第一章 文献综述
1.1 花青苷合成途径
1.1.1 花青苷合成相关结构基因
1.1.2 花青苷合成相关调节基因
1.2 小RNA概述
1.2.1 小RNA的产生
1.2.2 小RNA作用机制
1.2.3 小RNA研究方法
1.2.4 小RNA的功能研究
1.2.5 小RNA生物学功能
1.3 WD40基因的研究
1.3.1 WD40基因的结构
1.3.2 WD40基因的功能
1.4 本研究的目的及意义
第二章 MdTAS4-siR81(-)靶向MdbHLH3调控苹果果皮花青苷的形成
2.1 试验材料
2.2 试验方法
2.2.1 花青苷及原花青素总量测定
2.2.2 实时荧光定量PCR
2.2.3 利用5’RACE验证TAS4-siR81(-)靶基因切割位点
2.2.4 小RNA过表达载体构建
2.2.5 瞬时转化苹果
2.2.6 拟南芥转化及筛选
2.3 结果与分析
2.3.1 转录组差异表达分析
2.3.2 果实着色中花青苷含量变化
2.3.3 果实着色过程中MdTAS4-siR81(-)和MdbHLH3表达模式
2.3.4 利用5’RACE验证MdTAS4-siR81(-)切割靶基因MdbHLH3
2.3.5 果皮中MdTAS4-siR81(-)和MdbHLH3瞬时过表达
2.3.6 MdTAS4-siR81(-)及靶基因MdbHLH3稳定转化拟南芥
2.4 讨论
2.4.1 果实着色过程中MdTAS4-siR81(-)和MdbHLH3的变化趋势
2.4.2 利用5’RACE验证MdTAS4-siR81(-)切割MdbHLH3
2.4.3 MdTAS4-siR81(-)靶向MdbHLH3调控花青苷形成
第三章 苹果WD40蛋白家族的鉴定及表达分析
3.1 试验材料
3.2 试验方法
3.2.1 苹果WD40基因鉴定及染色体定位
3.2.2 苹果WD40基因的分类及进化分析
3.2.3 苹果WD40基因的内含子/外显子结构
3.2.4 苹果WD40基因的共线性分析
3.2.5 苹果WD40基因的表达分析
3.2.6 数据统计及分析
3.3 结果
3.3.1 苹果WD40基因全基因组鉴定及染色体定位
3.3.2 苹果WD40蛋白的分类
3.3.3 苹果与拟南芥WD40基因的进化分析
3.3.4 苹果WD40基因家族的扩增模式
3.3.5 苹果与拟南芥中WD40基因的共线性分析
3.3.6 苹果WD40基因GO注释分析
3.3.7 苹果WD40基因在不同生长阶段的器官表达模式
3.3.8 苹果WD40基因对ABA,干旱,低温胁迫响应
3.4 讨论
3.4.1 苹果WD40基因家族的鉴定、分类以及进化分析
3.4.2 苹果WD40基因的扩增
3.4.3 苹果WD40基因与拟南芥WD40基因的共线性分析
3.4.4 苹果WD40基因GO分析
3.4.5 苹果WD40基因组织特异性表达以及对ABA,干旱,低温的响应
结论
参考文献
附录
致谢
作者简介
【参考文献】：
期刊论文
[1]黑枸杞花青苷的研究进展[J]. 李雯,陈小玲,刘彩芬,李新生,陈志远. 生物资源. 2017(03)
[2]microRNA定量检测方法研究现状[J]. 陈艳琳,王颖芳. 广东药学院学报. 2016(05)
[3]植物非编码RNA的研究进展与展望[J]. 王佳伟,毛颖波,戚益军. 中国基础科学. 2016(02)
[4]‘澳洲青苹’果实解袋后果皮花青苷合成的变化[J]. 孟蕊,王亚杰,张伯虎,武月妮,杨亚州,赵政阳. 食品科学. 2015(22)
[5]拟南芥At-pri-miR828基因的克隆及其对番茄的遗传转化[J]. 贾小云,于治芹,梁建萍,唐贵良,金雷皓,张莉,贺立恒,李润植. 园艺学报. 2013(12)
[6]拟南芥MicroRNA828负调控蔗糖诱导的花青素合成[J]. 谢烨,孙毅,李淡宁,黄继荣. 植物生理学报. 2013(02)
[7]植物小分子RNA研究进展[J]. 武亮,戚益军. 生命科学. 2010(07)
[8]32种果树microRNA的生物信息学预测与分析[J]. 宋长年,贾启东,王晨,李飞,章镇,房经贵. 园艺学报. 2010(06)
[9]小RNAs作用机制的研究进展[J]. 谢兆辉. 遗传. 2009(12)
[10]反式作用干扰小RNA[J]. 温剑,李思光,罗玉萍. 生命的化学. 2007(05)
博士论文
[1]miR168启动子功能特异性解析及microRNA在苹果果皮着色过程中的功能研究[D]. 曲东.西北农林科技大学 2016
[2]苹果高密度遗传连锁图谱构建与重要果实品质性状QTL定位[D]. 孙瑞.中国农业大学 2015
[3]玉米小分子RNA及其靶基因的鉴定与功能分析[D]. 康明明.中国农业大学 2014
[4]苹果MdTTG1、MdMYB9与MdMYB11基因调控花青苷合成的作用机制研究[D]. 安秀红.山东农业大学 2013
[5]苹果bHLH转录因子MdTTL1对低温诱导花青苷合成和果实着色的多途径调控[D]. 谢兴斌.山东农业大学 2011
硕士论文
[1]葡萄转录因子VqbZIP39及VlbZIP36基因功能研究[D]. 涂明星.西北农林科技大学 2016
[2]番茄SlMYBL基因的表达分析及功能研究[D]. 刘霞.重庆大学 2014
[3]“澳洲青苹”苹果解袋后果实中花青苷的合成及相关基因的表达调控分析[D]. 王立新.西北农林科技大学 2013
本文编号：3731806
【文章页数】：76 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
第一章 文献综述
1.1 花青苷合成途径
1.1.1 花青苷合成相关结构基因
1.1.2 花青苷合成相关调节基因
1.2 小RNA概述
1.2.1 小RNA的产生
1.2.2 小RNA作用机制
1.2.3 小RNA研究方法
1.2.4 小RNA的功能研究
1.2.5 小RNA生物学功能
1.3 WD40基因的研究
1.3.1 WD40基因的结构
1.3.2 WD40基因的功能
1.4 本研究的目的及意义
第二章 MdTAS4-siR81(-)靶向MdbHLH3调控苹果果皮花青苷的形成
2.1 试验材料
2.2 试验方法
2.2.1 花青苷及原花青素总量测定
2.2.2 实时荧光定量PCR
2.2.3 利用5’RACE验证TAS4-siR81(-)靶基因切割位点
2.2.4 小RNA过表达载体构建
2.2.5 瞬时转化苹果
2.2.6 拟南芥转化及筛选
2.3 结果与分析
2.3.1 转录组差异表达分析
2.3.2 果实着色中花青苷含量变化
2.3.3 果实着色过程中MdTAS4-siR81(-)和MdbHLH3表达模式
2.3.4 利用5’RACE验证MdTAS4-siR81(-)切割靶基因MdbHLH3
2.3.5 果皮中MdTAS4-siR81(-)和MdbHLH3瞬时过表达
2.3.6 MdTAS4-siR81(-)及靶基因MdbHLH3稳定转化拟南芥
2.4 讨论
2.4.1 果实着色过程中MdTAS4-siR81(-)和MdbHLH3的变化趋势
2.4.2 利用5’RACE验证MdTAS4-siR81(-)切割MdbHLH3
2.4.3 MdTAS4-siR81(-)靶向MdbHLH3调控花青苷形成
第三章 苹果WD40蛋白家族的鉴定及表达分析
3.1 试验材料
3.2 试验方法
3.2.1 苹果WD40基因鉴定及染色体定位
3.2.2 苹果WD40基因的分类及进化分析
3.2.3 苹果WD40基因的内含子/外显子结构
3.2.4 苹果WD40基因的共线性分析
3.2.5 苹果WD40基因的表达分析
3.2.6 数据统计及分析
3.3 结果
3.3.1 苹果WD40基因全基因组鉴定及染色体定位
3.3.2 苹果WD40蛋白的分类
3.3.3 苹果与拟南芥WD40基因的进化分析
3.3.4 苹果WD40基因家族的扩增模式
3.3.5 苹果与拟南芥中WD40基因的共线性分析
3.3.6 苹果WD40基因GO注释分析
3.3.7 苹果WD40基因在不同生长阶段的器官表达模式
3.3.8 苹果WD40基因对ABA,干旱,低温胁迫响应
3.4 讨论
3.4.1 苹果WD40基因家族的鉴定、分类以及进化分析
3.4.2 苹果WD40基因的扩增
3.4.3 苹果WD40基因与拟南芥WD40基因的共线性分析
3.4.4 苹果WD40基因GO分析
3.4.5 苹果WD40基因组织特异性表达以及对ABA,干旱,低温的响应
结论
参考文献
附录
致谢
作者简介
【参考文献】：
期刊论文
[1]黑枸杞花青苷的研究进展[J]. 李雯,陈小玲,刘彩芬,李新生,陈志远. 生物资源. 2017(03)
[2]microRNA定量检测方法研究现状[J]. 陈艳琳,王颖芳. 广东药学院学报. 2016(05)
[3]植物非编码RNA的研究进展与展望[J]. 王佳伟,毛颖波,戚益军. 中国基础科学. 2016(02)
[4]‘澳洲青苹’果实解袋后果皮花青苷合成的变化[J]. 孟蕊,王亚杰,张伯虎,武月妮,杨亚州,赵政阳. 食品科学. 2015(22)
[5]拟南芥At-pri-miR828基因的克隆及其对番茄的遗传转化[J]. 贾小云,于治芹,梁建萍,唐贵良,金雷皓,张莉,贺立恒,李润植. 园艺学报. 2013(12)
[6]拟南芥MicroRNA828负调控蔗糖诱导的花青素合成[J]. 谢烨,孙毅,李淡宁,黄继荣. 植物生理学报. 2013(02)
[7]植物小分子RNA研究进展[J]. 武亮,戚益军. 生命科学. 2010(07)
[8]32种果树microRNA的生物信息学预测与分析[J]. 宋长年,贾启东,王晨,李飞,章镇,房经贵. 园艺学报. 2010(06)
[9]小RNAs作用机制的研究进展[J]. 谢兆辉. 遗传. 2009(12)
[10]反式作用干扰小RNA[J]. 温剑,李思光,罗玉萍. 生命的化学. 2007(05)
博士论文
[1]miR168启动子功能特异性解析及microRNA在苹果果皮着色过程中的功能研究[D]. 曲东.西北农林科技大学 2016
[2]苹果高密度遗传连锁图谱构建与重要果实品质性状QTL定位[D]. 孙瑞.中国农业大学 2015
[3]玉米小分子RNA及其靶基因的鉴定与功能分析[D]. 康明明.中国农业大学 2014
[4]苹果MdTTG1、MdMYB9与MdMYB11基因调控花青苷合成的作用机制研究[D]. 安秀红.山东农业大学 2013
[5]苹果bHLH转录因子MdTTL1对低温诱导花青苷合成和果实着色的多途径调控[D]. 谢兴斌.山东农业大学 2011
硕士论文
[1]葡萄转录因子VqbZIP39及VlbZIP36基因功能研究[D]. 涂明星.西北农林科技大学 2016
[2]番茄SlMYBL基因的表达分析及功能研究[D]. 刘霞.重庆大学 2014
[3]“澳洲青苹”苹果解袋后果实中花青苷的合成及相关基因的表达调控分析[D]. 王立新.西北农林科技大学 2013
本文编号：3731806
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