山楂木质素合成相关转录因子MYB46的基因克隆及功能验证

发布时间：2023-02-19 13:09

　　山楂(Crataegus spp.),又称山里红,是蔷薇科(Rosaceae)中一种重要的落叶小乔木。山楂果实发育中最重要的一个过程是山楂果核的硬化,这与木质素的沉积有关。山楂种核被一层坚硬的、木质化的核皮(内果皮)所包裹,这影响其食用价值,也是加工过程中的一个难题。在我国山楂资源中,有一种非常重要的软核山楂资源,其果核质软,内果皮呈现半木质化,可随果肉一同食用。为探讨软核山楂形成的分子机制,本研究分别以硬核山楂和软核山楂为试材,通过高通量测序,筛选出MYB46基因,探究其与木质素合成的关系。主要研究如下：1.通过分析山楂转录组测序数据,筛选出被注释为MYB46转录因子的两个山楂基因,8_Unigene_BMK.95O3和8_Unigene_BMK.10344。分别从硬核山楂和软核山楂中挑选两个品种,以花后18d～30d的山楂果实为试材,利用qRT-PCR技术对上述两个基因的表达进行基因验证,表明8_Unigene_BMK.9503基因在硬核山楂中的表达量要明显的高于...

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【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
1 前言
    1.1 木质素的组成与分布及生物合成途径简介
    1.2 转录因子调控着植物木质素生物合成的途径
        1.2.1 MYB型转录因子对木质素合成的影响
        1.2.2 NAC转录因子对木质素生物合成的调控
        1.2.3 其他转录因子对木质素合成的调控
    1.3 本研究目的意义
2 材料与方法
    2.1 植物材料
    2.2 菌株与试剂
        2.2.1 菌株
        2.2.2 试剂
    2.3 培养基
    2.4 试验方法
        2.4.1 山楂叶片和果实的总RNA的提取与检测
        2.4.2 MYB46基因的克隆
        2.4.3 实时定量PCR
        2.4.4 农杆菌介导转化拟南芥及苹果‘GL-3’组培苗
    2.5 木质素含量的测定
3 结果与分析
    3.1 软核山楂和硬核山楂中MYB46基因转录水平分析
    3.2 山楂CpMYB46基因全长克隆与分析
        3.2.1 山楂嫩叶RNA质量及完整性分析
        3.2.2 PCR扩增结果
        3.2.3 软核山楂与硬核山楂中CpMYB46基因CDS序列分析
    3.3 山楂CpMYB46基因的功能验证
        3.3.1 CpMYB46过量表达载体的构建
        3.3.2 CpMYB46基因在拟南芥中的异位表达
        3.3.3 CpMYB46基因在苹果中的异位表达
4 讨论
    4.1 MYB46的功能
    4.2 MYB46基因序列差异对其功能的影响
    4.3 木质素含量对植物表型的影响
5 结论
参考文献
附录
致谢



本文编号：3746282