虎奶菇Mn-SOD提

发布时间：2023-03-09 20:56

　　以虎奶菇菌丝为材料,提取、鉴定了虎奶菇锰超氧化物歧化酶,克隆虎奶菇锰超氧化物歧化酶基因。用液氮研磨、超声、硫酸铵沉淀和透析等方法提取虎奶菇Mn-SOD; WST-8法测定虎奶菇Mn-SOD酶活力; H₂O₂鉴定虎奶菇SOD的类型;用同源克隆、cDNA末端快速扩增技术和融合引物与巢式PCR等方法从虎奶菇中克隆锰超氧化物歧化酶基因。结果表明,虎奶菇Mn-SOD酶活力为1.66个酶活力单位。酶经过H₂O₂处理后仍然有活性,与未处理无明显差异,表明虎奶菇中SOD主要是Mn-SOD。克隆获得了虎奶菇锰超氧化物歧化酶基因PtMn-SOD,其DNA序列全长1025 bp,开放阅读框全长为663 bp,编码220个氨基酸。序列分析与系统进化树表明,PtMn-SOD与属于侧耳属的糙皮侧耳(登录号:MH645359.1)关系较近。预测该蛋白质分子量为24.54 kDa,蛋白等电点为7.86。PtMn-SOD蛋白定位于线粒体,在线粒体中发挥功效。

【文章页数】：8 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料与仪器
    1.2 实验方法
        1.2.1 虎奶菇Mn-SOD的提取及鉴定
            1.2.1. 1 虎奶菇Mn-SOD的提取
            1.2.1. 2 虎奶菇Mn-SOD的酶活力测定
            1.2.1. 3 虎奶菇Mn-SOD的鉴定
        1.2.2 虎奶菇Mn-SOD基因的克隆
            1.2.2. 1 基因组DNA的提取
            1.2.2. 2 总RNA的提取和cDNA第一条链的合成
            1.2.2. 3 虎奶菇Mn-SOD基因cDNA保守片段的克隆
            1.2.2. 4 虎奶菇Mn-SOD基因3'端cDNA片段的克隆
            1.2.2. 5 虎奶菇Mn-SOD基因5'端DNA片段的克隆
            1.2.2. 6 虎奶菇Mn-SOD基因的克隆
        1.2.3 虎奶菇Mn-SOD基因的生物信息学分析
            1.2.3. 1 虎奶菇Mn-SOD基因序列的生物信息学分析
            1.2.3. 2 虎奶菇Mn-SOD基因编码蛋白的生物信息学分析
2 结果与分析
    2.1 虎奶菇Mn-SOD提取及鉴定
        2.1.1 虎奶菇Mn-SOD提取
        2.1.2 虎奶菇Mn-SOD酶活的测定
        2.1.3 虎奶菇Mn-SOD的鉴定
    2.2 虎奶菇Mn-SOD基因的克隆
    2.3 虎奶菇Mn-SOD基因的生物信息学分析
        2.3.1 虎奶菇Mn-SOD基因序列的生物信息学分析
        2.3.2 虎奶菇Mn-SOD基因编码蛋白的生物信息学分析
3 结论



本文编号：3758280