笃斯越橘优系组培苗低温保存的初步研究
发布时间：2023-09-14 00:02
由于笃斯越橘果实营养价值较高、风味较好,又是重要的蓝莓野生资源,所以,近年来对笃斯越橘的研究越来越受到关注,但目前关于笃斯越橘的研究主要集中在驯化栽培、营养价值分析、抗寒分子机理等方面,而对其种质资源保护及保存方面的相关研究较少。组织培养是种质资源保存的一种重要方法。本试验以笃斯越橘优系SL-1单芽茎段为外植体材料,优化了SL-1的扩增体系;以笃斯越橘优系SL-1组培小苗为材料,探讨了保存温度、保存培养基、保存时间及保存条件对组培苗生长情况、成活率和复壮率的影响,并对复壮前后的低温保存组培苗进行了基因组DNA甲基化的MSAP技术分析,旨在建立一套完整的笃斯越橘组培苗低温保存体系,为以后的基因工程和分子育种奠定坚实的基础。主要的结果如下:(1)笃斯越橘优系的单芽茎段最佳诱导愈伤组织培养基为:WPM+TDZ0.5 mg/L+ZT2.0mg/L;单芽茎段最佳诱导分化苗培养基为:WPM+ZT3.0 mg/L+IBA0.3 mg/L;单芽茎段扩繁的最佳pH值为5.2;单芽茎段扩繁的最佳光照时间为14 h/d。(2)笃斯越橘优系组培苗最佳低温保存培养基为:WPM培养基+山梨醇20 g/L+蔗糖20...
【文章页数】：72 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
英文摘要
1 前言
1.1 蓝莓种质资源现状
1.2 蓝莓组织培养现状
1.3 种质资源组织培养保存研究进展
1.4 植物低温保存中生理调控机制
1.4.1 低温保存对植物组织细胞膜透性的影响
1.4.2 低温保存中植物组织叶绿体色素含量的变化
1.4.3 低温保存中植物组织含水量的变化
1.4.4 低温保存中植物组织渗透性调节物质含量的变化
1.4.5 低温保存中植物组织淀粉含量的变化
1.4.6 低温保存中植物组织保护酶活性的变化
1.5 基因组DNA甲基化的MSAP技术
1.5.1 MSAP技术原理
1.5.2 MSAP技术的应用
1.6 研究目的及意义
2 材料与方法
2.1 试验材料
2.2 试验方法
2.2.1 组培苗的培养
2.2.2 培养基和生长调节剂的配置方法
2.2.3 单芽茎段扩繁培养基及培养条件
2.2.4 组培苗低温保存培养基及培养条件
2.2.5 生长情况调查统计方法
2.2.6 低温保存中植株生理生化指标的检测方法
2.2.7 低温保存后植株的复壮方法
2.2.8 低温保存前后组培苗基因组DNA的甲基化MSAP检测方法
2.2.9 数据统计与分析
3 结果与分析
3.1 培养基及培养条件对单芽茎段诱导分化的影响
3.1.1 生长调节剂TDZ、ZT、IBA对单芽茎段组织诱导分化的影响
3.1.2 蔗糖对单芽茎段芽分化的影响
3.1.3 光照时间对单芽茎段分化的影响
3.1.4 pH值对单芽茎段分化的影响
3.2 低温保存的温度、培养基和培养环境的筛选
3.2.1 低温保存温度的筛选
3.2.2 低温保存中WPM和蔗糖浓度的筛选
3.2.3 低温保存中培养基中添加渗透调节物质的筛选
3.2.4 光照时间对低温保存的影响
3.3 低温保存中笃斯越橘优系的植物学特征和生理生化变化
3.3.1 植物学特征的变化
3.3.2 组织含水量的变化
3.3.3 膜透性的变化
3.3.4 叶绿体色素含量的变化
3.3.5 渗透性调节物质的变化
3.3.6 可溶性淀粉含量的变化
3.3.7 保护酶活性的变化
3.3.8 低温条件下笃斯越橘优系生理生化指标的相关系数矩阵分析
3.4 笃斯越橘优系组培苗低温保存后的复壮
3.5 基因组DNA的 MSAP技术分析
3.5.1 笃斯越橘优系基因组DNA的提取
3.5.2 连接产物的预扩增
3.5.3 选择性PCR扩增
3.5.4 CCGG位点甲基化水平分析
4 讨论
4.1 培养基及培养条件对外植体增殖的影响
4.2 添加渗透调节类物质对组培苗低温保存的影响
4.3 低温保存过程中的影响因素及生理生化检测
4.4 低温保存中基因组DNA甲基化水平及模式变化
5 结论
致谢
参考文献
附录
攻读硕士学位期间发表的学术论文
本文编号：3846159
【文章页数】：72 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
英文摘要
1 前言
1.1 蓝莓种质资源现状
1.2 蓝莓组织培养现状
1.3 种质资源组织培养保存研究进展
1.4 植物低温保存中生理调控机制
1.4.1 低温保存对植物组织细胞膜透性的影响
1.4.2 低温保存中植物组织叶绿体色素含量的变化
1.4.3 低温保存中植物组织含水量的变化
1.4.4 低温保存中植物组织渗透性调节物质含量的变化
1.4.5 低温保存中植物组织淀粉含量的变化
1.4.6 低温保存中植物组织保护酶活性的变化
1.5 基因组DNA甲基化的MSAP技术
1.5.1 MSAP技术原理
1.5.2 MSAP技术的应用
1.6 研究目的及意义
2 材料与方法
2.1 试验材料
2.2 试验方法
2.2.1 组培苗的培养
2.2.2 培养基和生长调节剂的配置方法
2.2.3 单芽茎段扩繁培养基及培养条件
2.2.4 组培苗低温保存培养基及培养条件
2.2.5 生长情况调查统计方法
2.2.6 低温保存中植株生理生化指标的检测方法
2.2.7 低温保存后植株的复壮方法
2.2.8 低温保存前后组培苗基因组DNA的甲基化MSAP检测方法
2.2.9 数据统计与分析
3 结果与分析
3.1 培养基及培养条件对单芽茎段诱导分化的影响
3.1.1 生长调节剂TDZ、ZT、IBA对单芽茎段组织诱导分化的影响
3.1.2 蔗糖对单芽茎段芽分化的影响
3.1.3 光照时间对单芽茎段分化的影响
3.1.4 pH值对单芽茎段分化的影响
3.2 低温保存的温度、培养基和培养环境的筛选
3.2.1 低温保存温度的筛选
3.2.2 低温保存中WPM和蔗糖浓度的筛选
3.2.3 低温保存中培养基中添加渗透调节物质的筛选
3.2.4 光照时间对低温保存的影响
3.3 低温保存中笃斯越橘优系的植物学特征和生理生化变化
3.3.1 植物学特征的变化
3.3.2 组织含水量的变化
3.3.3 膜透性的变化
3.3.4 叶绿体色素含量的变化
3.3.5 渗透性调节物质的变化
3.3.6 可溶性淀粉含量的变化
3.3.7 保护酶活性的变化
3.3.8 低温条件下笃斯越橘优系生理生化指标的相关系数矩阵分析
3.4 笃斯越橘优系组培苗低温保存后的复壮
3.5 基因组DNA的 MSAP技术分析
3.5.1 笃斯越橘优系基因组DNA的提取
3.5.2 连接产物的预扩增
3.5.3 选择性PCR扩增
3.5.4 CCGG位点甲基化水平分析
4 讨论
4.1 培养基及培养条件对外植体增殖的影响
4.2 添加渗透调节类物质对组培苗低温保存的影响
4.3 低温保存过程中的影响因素及生理生化检测
4.4 低温保存中基因组DNA甲基化水平及模式变化
5 结论
致谢
参考文献
附录
攻读硕士学位期间发表的学术论文
本文编号：3846159
本文链接：https://www.wllwen.com/nykjlw/yylw/3846159.html
