山葡萄VamF3H基因及其启动子的克隆与表达分析

发布时间：2023-12-09 10:28

　　山葡萄的浆果可用于酿造葡萄酒,是葡萄酒工业的主要原料。影响葡萄酒质量的关键因素是葡萄果皮的颜色,而葡萄果皮颜色又取决于花色苷的组成与含量,在花色苷生物合成过程中,F3H基因是黄烷酮与花青素代谢途径的关键基因。本研究是以山葡萄‘双丰’品种为材料,成功克隆了F3H基因的cDNA序列,并对其进行了生物信息学分析、采用荧光定量PCR技术分析了在山葡萄果实成熟过程中7个不同时期的F3H基因的表达量,同时克隆了该基因启动子,并预测了它的顺式作用元件。实验结果表明：1. VamF3H基因全长1398 bp, ORF为1092 bp,能编码363个氨基酸。分子量为40.81 KDa,等电点(PI)值为5.37。不具有信号肽,不含有跨膜结构域,属于不稳定亲水蛋白。氨基酸序列同欧亚种葡萄(FQ389950)、圆叶葡萄(KF040970)和美国蔓藤(JX087441)等的F3H类基因的同源性较高。2.实时荧光定量结果表明,F3H基因在山葡萄果皮成熟过程中各时期的表达水平不同,F3H在转色前期不表达,后期F3H的表达量随果实成熟度增加而逐渐增加,完熟期又明显降低。3.F3H基因启动子序列中具有典型的CAAT ...

【文章页数】：47 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
第一章 绪论
    1.1 山葡萄花色苷概述
        1.1.1 山葡萄的简介
        1.1.2 花色苷的种类
        1.1.3 花色苷的结构
        1.1.4 花色苷类色素的主要生理功能
        1.1.5 花色苷的生物合成途径
    1.2 黄烷酮3-羟化酶
    1.3 植物启动子的研究进展
        1.3.1 植物基因启动子的结构
        1.3.2 植物启动子的类型
        1.3.3 植物基因启动子的克隆方法
    1.4 本研究的目的及意义
第二章 山葡萄F3H基因的克隆与表达分析
    2.1 材料与方法
        2.1.1 试验材料
        2.1.2 试验方法
    2.2 结果与分析
        2.2.1 山葡萄F3H基因cDNA全长的克隆及序列分析
        2.2.2 山葡萄F3H基因序列的生物信息学分析
        2.2.3 山葡萄VamF3H基因的实时荧光定量表达分析
    2.3 讨论
        2.3.1 F3H基因克隆
        2.3.2 F3H基因表达
第三章 山葡萄总DNA的提取及VamF3H启动子的克隆
    3.1 山葡萄总DNA提取方法的比较
        3.1.1 材料与方法
        3.1.2 结果与分析
    3.2 山葡萄VamF3H基因启动子区域获得及分析
        3.2.1 材料与方法
        3.2.2 结果与分析
        3.2.3 讨论
第四章 结论
参考文献
致谢辞



本文编号：3871388