柑橘体细胞融合创制三倍体无核新种质及融合再生植株的遗传鉴定

发布时间：2024-04-10 04:46

　　柑橘在我国农业经济上具有重要地位,柑橘的优质丰产是其在国际柑橘市场上的核心竞争力。无核一直是柑橘育种追求的目标性状。细胞融合技术,为柑橘无核育种提供了一条快捷的途径,即通过融合单倍体(n)原生质体与二倍体(2n)原生质体获得三倍体。基于这一思路,本研究利用‘早金’甜橙单倍体愈伤系与其它6个二倍体有核柑橘品种的叶肉或愈伤亲本融合,旨在获得综合双亲优点的三倍体新种质。另外,本研究采用SSR分子标记对实验室前期获得的一批融合再生植株进行了倍性和遗传分析。主要研究结果如下:1.单倍体愈伤原生质体+二倍体叶肉原生质体融合创制三倍体。以‘早金’甜橙单倍体愈伤系Fa为亲本,分别与6个二倍体种间良种的叶肉原生质体融合。各组合融合产物在后期培养过程中均逐渐死亡,经多次(每个组合至少3次)尝试都未再生成功,表明单倍体愈伤原生质体与二倍体叶肉原生质体融合较难再生。2.单倍体愈伤原生质体+二倍体愈伤原生质体融合创制三倍体。分别以‘早金’甜橙单倍体愈伤系Fa、Ec为亲本,与‘默科特’橘橙(MCK)愈伤组织原生质体融合,得到Fa+MCK组合的再生愈伤组织,倍性测定为二倍体与四倍体的混倍体,得到Ec+MCK组合的再...

【文章页数】：68 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
缩略词表
第一章 文献综述
    1 引言
    2 前人研究进展
        2.1 柑橘无核育种研究进展
            2.1.1 柑橘无核机理
            2.1.2 无核柑橘获得途径
                2.1.2.1 自然途径获得无核种质
                2.1.2.2 人工途径获得无核种质
                    2.1.2.2.1 三倍体无核种质的获得途径
                    2.1.2.2.2 其它无核种质的获得途径
        2.2 细胞融合在柑橘无核育种中的应用
            2.2.1 创制三倍体体细胞杂种
                2.2.1.1 配子（n）—体细胞(2n)融合创制三倍体
                2.2.1.2 体细胞（n）——体细胞（2n）融合创制三倍体
            2.2.2 创制二倍体胞质杂种转移CMS性状
            2.2.3 细胞融合创制异源四倍体
        2.3 原生质体融合后代的鉴定
            2.3.1 倍性鉴定
                2.3.1.1 形态学鉴定
                2.3.1.2 细胞学鉴定
            2.3.2 遗传物质的来源鉴定
                2.3.2.1 RFLP
                2.3.2.2 RAPD
                2.3.2.3 AFLP
                2.3.2.4 SSR
    3 本研究的目的和内容
第二章 柑橘体细胞融合创制三倍体无核新种质
    1 引言
    2 实验材料与方法
        2.1 实验材料
            2.1.1 单倍体愈伤 + 二倍体叶肉融合模式
            2.1.2 单倍体愈伤 + 二倍体愈伤融合模式
        2.2 实验方法
            2.2.1 实验材料准备
            2.2.2 柑橘原生质体的分离与纯化
            2.2.3 柑橘原生质体活力测定
            2.2.4 原生质体融合
            2.2.5 融合细胞培养
            2.2.6 融合产物倍性分析
    3 实验结果及分析
        3.1 单倍体愈伤 + 二倍体叶肉融合模式
            3.1.1 原生质体的分离、纯化
            3.1.2 原生质体融合
            3.1.3 融合产物培养情况
        3.2 单倍体愈伤 + 二倍体愈伤融合模式
            3.2.1 原生质体分离、纯化
            3.2.2 原生质体融合情况
            3.2.3 融合产物培养情况
                3.2.3.1 ‘早金’甜橙单倍体愈伤Fa + ‘默科特’橘橙愈伤
                3.2.3.2 ‘早金’甜橙单倍体愈伤Ec + ‘默科特’橘橙愈伤
            3.2.4 倍性测定
    4 小结与讨论
        4.1 不同融合组合再生情况的差异分析
            4.1.1 单倍体愈伤 + 二倍体叶肉融合未再生的原因分析
                4.1.1.1 遗传差异的原因
                4.1.1.2 培养条件的影响
            4.1.2 单倍体愈伤 + 二倍体愈伤的融合再生情况的讨论
                4.1.2.1 Fa+MCK、Ec+MCK再生产物形态上的比较
                4.1.2.2 Fa+MCK、Ec+MCK再生产物生胚能力上的比较
第三章 再生植株的鉴定
    1 引言
    2 实验材料与方法
        2.1 实验材料
        2.2 实验方法
            2.2.1 再生植株倍性分析
            2.2.2 分子标记分析核基因组和细胞质基因组
                2.2.2.1 融合材料全基因组DNA的提取
                2.2.2.2 PCR扩增
                2.2.2.3 聚丙烯酰胺凝胶电泳
                2.2.2.4 SSR分析核基因组和胞质基因组来源
    3 实验结果及分析
        3.1 G1 + ‘卡特’夏橙
            3.1.1 植株再生及倍性鉴定
            3.1.2 分子标记分析核基因组及胞质基因组来源
        3.2 G1 + ‘Itabori’甜橙
            3.2.1 植株再生及倍性鉴定
            3.2.2 分子标记分析核基因组及胞质基因组来源
        3.3 G1 + ‘默科特’橘橙
            3.3.1 植株再生及倍性鉴定
            3.3.2 分子标记分析核基因组及胞质基因组来源
    4 小结与讨论
        4.1 核基因组鉴定结果复杂性的原因
            4.1.1 融合细胞的变异与复杂性
            4.1.2 其它因素
        4.2 关于胞质基因组鉴定结果的讨论
参考文献
附录Ⅰ 部分果实图片
附录Ⅱ BH3培养基配方
附录Ⅲ 分子鉴定所用引物序列信息
致谢



本文编号：3950173