春石斛类原球茎玻璃化超低温保存中程序性细胞死亡研究

发布时间：2024-05-14 18:58

　　超低温保存技术是最有效、安全的长期保存种质资源的方法,但某些物种在超低温保存后出现存活率低或不能再生长的情况。目前,动物和人类细胞、组织的超低温保存研究已经证实超低温诱导的程序性细胞死亡(PCD)是造成存活率下降的关键原因之一,但在植物中,超低温保存诱导的PCD研究还很少。因此,从PCD方面来揭示植物超低温保存损伤机制,可为植物超低温保存技术优化提供新的思路和方法,对种质资源保存具有重要意义。本文以繁殖率高、细胞基因型一致,但超低温保存后再生困难的春石斛’红梦幻’(Dendrobium nobile Lindl.’Hamana Lake Dream’)的类原球茎(PLBs)为材料,研究了玻璃化超低温保存中PCD的发生情况,明确PCD发生的关键环节,在此基础上,探讨一氧化氮(NO)和过氧化氢(H202)作为信号分子在超低温保存诱导的PCD中的作用机制。其主要研究结果如下:(1)春石斛’红梦幻’ PLBs在玻璃化超低温保存程序中的玻璃化溶液(PVS2)处理和液氮冷冻-解冻环节发生了 PCD,具体表现在形态和生化两方面:①PLBs经PVS2处理后出现质壁分离、细胞核变形、胞内小囊泡形成、核仁...

【文章页数】：169 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

图１．１采用差示扫描量热（ＤＳＣ）记录的ＰＶＳ２冷冻和解冻过程（Ｓａｋａｉ，Ｋｏｂａｙａｓｈｉ?ｅｔａｌ．，?１９９０）??Ｆｉｇｕｒｅ?１．１?ＤＳＣ?ｒｅｃｏｒｄ?ｏｆ?ＰＶＳ２?ｄｕｒｉｎｇ?ｃｏｏｉｎｇ?ａｎｄ?ｒｅｗａｎｎｉｎｇ?（Ｓａｋａｉ，?

是指高浓度的低温保护溶液过冷至极低温度，最终凝固成亚稳态玻璃的冷却速度结晶的物理过程（Ｆａｈｙ，Ｍａｃｆａｒｌａｎｅｅｔａｌ．，?１９８４），它是一种成的途径，当生物组织中的空间被玻璃化溶液填充时，就可以避免细冻时遭受冰晶损伤和其他额外的损伤，如组织塌陷、溶质浓缩、脱水度变化及组....

图1.4本研究的技术路线

图2.2玻璃化超低温保存各步骤中春石解‘红梦幻’PLBs组织切片

?春石斛类原球茎玻璃化超低温保存中程序性细胞死亡研究???ＰＶＳ２处理后ＰＬＢｓ组织细胞学特征见图２．２?ｄ：与前一步骤相比，ＰＶＳ２处理后??ＰＬＢｓ细胞收缩，质壁分离更是加重，分生组织处细胞核染色较深，核形状变得不规??则，核仁不可见。??经液氮冷冻－解冻处理和ｕｎｌｏａｄｉ....

图2.4未经任何处理的春石解‘红梦幻’PLBs超微结构

?春石斛类原球茎玻璃化超低温保存中程序性细胞死亡研宄???２．２．２．１春石斛新鲜ＰＬＢｓ（ＣＫ）的细胞超微结构??从图２．４可以看出，对照组ＰＬＢｓ细胞体积大，细胞膜与细胞壁紧紧贴合，液泡??占据细胞中较大空间，细胞质中含有较多淀粉粒，在细胞膜周围聚集分布。图２．４?ｂ??示大....

本文编号：3973360