番茄S1MPK1互作蛋白S1SKI的功能研究
发布时间：2024-05-14 18:38
番茄(Solanum lycopersicum)是常见的温室栽培蔬菜。但是,高温、干旱、高盐等非生物胁迫因素对番茄的产量和生长发育产生了极大的影响。因此研究番茄耐非生物胁迫的机制对于提高番茄的逆境栽培以及育种效率具有非常重要的意义。促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)级联能够影响植物对于生物胁迫和非生物胁迫的耐受性。MAPK级联是典型的三级联模式,主要包括MAPKKK(MAPK激酶激酶)、MAPKK(MAPK激酶)和MAPK。MAPK主要是通过磷酸化特定的下游底物来激活下游的细胞应答。研究MAPK的互作蛋白对于理解MAPK信号转导至关重要。本实验室前期研究结果表明,番茄S1MPK1(促分裂原活化蛋白激酶)在逆境胁迫过程中发挥重要作用,但是其具体的分子基础和生理机制并不清楚。本研究前期通过Y2H筛选能够和S1MPK1相互作用的蛋白,发现一个未经报道的新蛋白ID(Solyc03g117670)命名为S1SKI。为了进一步深入探究番茄S1SKI的功能及作用机理,本研究对S1MPK1和SlSKI的相互作用进一步进行验证,并且通过转化拟南芥获得过表达SlSKI材料,以探讨SlSKI对于非生物胁迫的响...
【文章页数】：76 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
符号说明
第一章 文献综述
1 MAPK级联简介
2 植物MAPK级联的功能
3 MAPK在拟南芥中的研究进展
4 MAPK在番茄中的研究进展
5 MAPK相互作用蛋白的研究进展
5.1 MAPK相互作用蛋白的研究方法
5.2 MAPK下游底物的研究进展
5.3 MAPK非底物的互作蛋白研究进展
6 研究目的和意义
第二章 SlMPK1与SlSKI的互作验证
1 前言
1.1 酵母双杂交技术的原理及应用
1.2 蛋白纯化和pull-down技术的原理及应用
1.3 体外磷酸化技术的原理及应用
1.4 实验室前期研究
2 实验材料
2.1 菌种及载体
2.2 实验仪器及耗材
2.3 相关试剂配制
3 实验方法
3.1 Pull-down实验验证互作
3.2 体外磷酸化实验
3.3 酵母双杂交互作验证
4 实验结果
4.1 PGEX-4T-1-SlSKI重组质粒载体构建
4.2 蛋白纯化
4.3 Pull-down
4.4 体外磷酸化
4.5 SlSKI片段截取
4.6 pGBKT7/SlSKI1-7载体构建
4.7 pGADT7/SlMPK1与pGBKT7/SlSKI酵母菌落鉴定
4.8 SlSKI自激活检测
4.9 pGADT7/SlMPK1与pGBKT7/SlSKI互作验证
5 小结
第三章 SlSKI在拟南芥中的功能研究
1 前言
2 实验材料
2.1 拟南芥种子
2.2 实验仪器及试剂
2.3 培养基配制
3 实验方法
3.1 过表达载体pBI121-SlSKI载体构建
3.2 拟南芥异源过表达
3.3 过表达SlSKI拟南芥株系萌发统计
3.4 过表达SlSKI拟南芥株系根长实验
3.5 过表达SlSKI拟南芥株系高温下胚轴实验
3.6 过表达SlSKI拟南芥株系高温抗氧化生理测定
4 实验结果
4.1 过表达载体构建
4.2 过表达材料获得
4.3 NaCl对过表达SlSKI拟南芥生长的影响
4.4 山梨醇对过表达SlSKI拟南芥生长的影响
4.5 ABA对过表达SlSKI拟南芥生长的影响
4.6 高温对过表达SlSKI拟南芥生长的影响
4.7 高温胁迫下过表达SlSKI拟南芥抗氧化酶活性的变化
5 小结
第四章 SlSKI在番茄中的功能研究
1 前言
2 实验材料
2.1 植物材料
2.2 菌种及载体
2.3 酶和相关试剂
2.4 激素
2.5 培养基配置
2.6 番茄营养液配方
3 实验方法
3.1 组织定位
3.2 SlSKI过表达载体构建
3.3 RNA干扰载体构建
3.4 CRISPR-Cas9载体构建
3.5 番茄组培
4 实验结果
4.1 SlSKI组织表达分析
4.2 SlSKI的逆境应答表达分析
4.4 SlSKI过表达载体构建
4.5 干扰载体双酶切鉴定
4.6 CRISPR-Cas9载体测序
4.7 组培过程
4.8 过表达阳性鉴定
4.9 CRISPR-Cas9阳性苗鉴定
4.10 RNA干扰阳性苗鉴定
4.11 RNA干扰阳性苗半定量鉴定
5 小结
第五章 总结与讨论
参考文献
在学期间发表的学术论文与研究成果
致谢
本文编号：3973340
【文章页数】：76 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
符号说明
第一章 文献综述
1 MAPK级联简介
2 植物MAPK级联的功能
3 MAPK在拟南芥中的研究进展
4 MAPK在番茄中的研究进展
5 MAPK相互作用蛋白的研究进展
5.1 MAPK相互作用蛋白的研究方法
5.2 MAPK下游底物的研究进展
5.3 MAPK非底物的互作蛋白研究进展
6 研究目的和意义
第二章 SlMPK1与SlSKI的互作验证
1 前言
1.1 酵母双杂交技术的原理及应用
1.2 蛋白纯化和pull-down技术的原理及应用
1.3 体外磷酸化技术的原理及应用
1.4 实验室前期研究
2 实验材料
2.1 菌种及载体
2.2 实验仪器及耗材
2.3 相关试剂配制
3 实验方法
3.1 Pull-down实验验证互作
3.2 体外磷酸化实验
3.3 酵母双杂交互作验证
4 实验结果
4.1 PGEX-4T-1-SlSKI重组质粒载体构建
4.2 蛋白纯化
4.3 Pull-down
4.4 体外磷酸化
4.5 SlSKI片段截取
4.6 pGBKT7/SlSKI1-7载体构建
4.7 pGADT7/SlMPK1与pGBKT7/SlSKI酵母菌落鉴定
4.8 SlSKI自激活检测
4.9 pGADT7/SlMPK1与pGBKT7/SlSKI互作验证
5 小结
第三章 SlSKI在拟南芥中的功能研究
1 前言
2 实验材料
2.1 拟南芥种子
2.2 实验仪器及试剂
2.3 培养基配制
3 实验方法
3.1 过表达载体pBI121-SlSKI载体构建
3.2 拟南芥异源过表达
3.3 过表达SlSKI拟南芥株系萌发统计
3.4 过表达SlSKI拟南芥株系根长实验
3.5 过表达SlSKI拟南芥株系高温下胚轴实验
3.6 过表达SlSKI拟南芥株系高温抗氧化生理测定
4 实验结果
4.1 过表达载体构建
4.2 过表达材料获得
4.3 NaCl对过表达SlSKI拟南芥生长的影响
4.4 山梨醇对过表达SlSKI拟南芥生长的影响
4.5 ABA对过表达SlSKI拟南芥生长的影响
4.6 高温对过表达SlSKI拟南芥生长的影响
4.7 高温胁迫下过表达SlSKI拟南芥抗氧化酶活性的变化
5 小结
第四章 SlSKI在番茄中的功能研究
1 前言
2 实验材料
2.1 植物材料
2.2 菌种及载体
2.3 酶和相关试剂
2.4 激素
2.5 培养基配置
2.6 番茄营养液配方
3 实验方法
3.1 组织定位
3.2 SlSKI过表达载体构建
3.3 RNA干扰载体构建
3.4 CRISPR-Cas9载体构建
3.5 番茄组培
4 实验结果
4.1 SlSKI组织表达分析
4.2 SlSKI的逆境应答表达分析
4.4 SlSKI过表达载体构建
4.5 干扰载体双酶切鉴定
4.6 CRISPR-Cas9载体测序
4.7 组培过程
4.8 过表达阳性鉴定
4.9 CRISPR-Cas9阳性苗鉴定
4.10 RNA干扰阳性苗鉴定
4.11 RNA干扰阳性苗半定量鉴定
5 小结
第五章 总结与讨论
参考文献
在学期间发表的学术论文与研究成果
致谢
本文编号：3973340
本文链接：https://www.wllwen.com/nykjlw/yylw/3973340.html
