正北芪多糖提纯及抗炎活性的研究

发布时间：2020-04-10 10:30

【摘要】：植物多糖,一种广泛存在于植物体内的天然大分子多糖,具有极其重要的生物活性。黄芪多糖是我国大宗药材黄芪的主要活性成分之一,在黄芪的不同药材基源中,尤以产自山西省北部至内蒙古自治区中南部的正北芪(蒙古黄芪)Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge.var.monghulicus(Bge.)Hsiao 多糖含量最高,疗效最佳,因而备受业界推崇。众多研究表明,黄芪多糖可改善由溃疡性结肠炎引发的肠粘膜损伤、膜通透性改变等病理变化,有效治疗溃疡性结肠炎。本文以正北芪为原料,采用超声辅助-水提法提取正北芪粗多糖,通过响应面分析法优化提取工艺并得到最佳工艺参数,经除杂分离纯化后得到正北芪多糖;通过一系列理化检验和特征分析,探究正北芪多糖的理化性质和结构特性;通过对动物实验指标的测定比较,研究正北芪多糖的部分活性功能。主要结果如下:(1)选取超声时间、水浴时间、超声功率、料液比四个因素,在单因素实验基础上采用响应面分析法优化提取工艺。经响应面实验得到最佳工艺参数:超声时间46 min、超声功率414 W、水浴时间41 min、料液比为1:23(g/mL),在此条件下正北芪粗多糖提取率为(20.77±0.12)%。(2)将最优条件提取得到的正北芪粗多糖,通过木瓜蛋白酶-Sevage联用法除去其中蛋白质,经DEAE-52纤维素柱分离,收集洗脱峰面积最大的组分,用Sephadex G-100柱纯化,洗脱曲线呈单一对称峰。经测定,纯化后的正北芪多糖含量为96.82%。(3)将纯化后的正北芪多糖进行理化性质鉴定,结果表明:正北芪多糖为淡黄色絮状固体,易溶于水,不溶于甲醇、乙醇、丙酮、氯仿、正丁醇等有机溶剂;纯化后的正北芪多糖中有糖类存在,不含有还原性糖、淀粉、蛋白质,是一类均一多糖;高效液相色谱分析结果表明,正北芪多糖的单糖组成为甘露糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、葡萄糖、阿拉伯糖,各单糖物质的量比为5.97:1.05:1:8.41:24.15;红外光谱分析结果表明,纯化后的正北芪多糖符合多糖的典型结构。(4)利用不同剂量正北芪多糖治疗由5%葡聚糖硫酸钠(DSS)水溶液诱导的溃疡性结肠炎小鼠,实验证明,正北芪多糖高剂量组(0.7 mg/mL)可以显著降低患病小鼠的疾病活动指数(DAI)评分、恢复结肠长度及改善和修复结肠组织损坏;显著降低患病小鼠结肠组织中髓过氧化物酶(MPO)、一氧化氮合酶(NOS)活力和一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)水平,增加结肠组织中超氧化物歧化酶(SOD)活力;显著降低患病小鼠血清中白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的浓度以及二胺氧化酶(DAO)、D-乳酸(D-LA)水平。由此证明,日常饮用0.7 mg/mL正北芪多糖溶液7 d可以有效治疗小鼠由5%DSS诱导的溃疡性结肠炎。
【图文】：

Ｆｉｇ．邋２．１邋ＳＥＭ邋ｒｅｓｕｌｔｓ邋ｏｆ邋ｔｈｅ邋ｓｌｉｃｅｓ邋ｏｆ邋Ａｓｔｒａｇａｌｉ邋ｒａｄｉｘ邋ｄｒｙ邋ｐｒｏｄｕｃｔ邋（ａ．邋Ｃｒｏｓｓ邋ｓｅｃｔｉｏｎ邋ｏｆ邋ｘｙｌｅｍ；邋ｂ．逡逑Ｌｏｎｇｉｔｕｄｉｎａｌ邋ｓｅｃｔｉｏｎ邋ｏｆ邋ｘｙｌｅｍ；邋ｃ．邋Ｃｒｏｓｓ邋ｓｅｃｔｉｏｎ邋ｏｆ邋ｐｈｌｏｅｍ；邋ｄ．邋Ｌｏｎｇｉｔｕｄｉｎａｌ邋ｓｅｃｔｉｏｎ邋ｏｆ邋ｐｈｌｏｅｍ）逡逑通过图２．１可以看出，多糖颗粒主要存在于正北芪初皮部。正北芪含有大量纤维逡逑组织，传统热水提取法无法将黄芪内部的多糖颗粒完全溶解，利用超声波细胞破碎仪逡逑可将黄芪粉末破碎更加完全，从而提高多糖提取率。逡逑２．２．２正北芪多糖粗提取逡逑原材料的处理：将正北芪洗净切段，烘干至恒温后将其放入磨粉机磨粉，过６０逡逑目筛得到粉末，置于干燥容器中保存备用。逡逑将磨粉后的正北芪粉末加入一定量的蒸馏水，使用超声波细胞破碎仪将其充分破逡逑碎，之后在４０°Ｃ条件下水浴一定时间。水浴结束后将不溶物与液体一并转入离心管，逡逑４０００ｒ／ｍｉｎ条件下离心１５ｍｉｎ，，取上清液于干净的烧杯或离心管中，边搅拌边向其中逡逑加入５倍体积无水乙醇

之后迅速加入浓硫酸５邋ｍＬ，摇勾，静置５邋ｍｉｎ，沸水浴１５邋ｍｉｎ，取出后冰浴５邋ｍｉｎ。逡逑以空白为对照，４９０邋ｎｍ处测定吸光度值（ＯＤ）；以葡萄糖溶液浓度（ｎｇ／ｍＬ）为横逡逑坐标、吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线，如图２．２所示。逡逑１．０－逡逑Ｐ逡逑Ｅ逡逑｜邋（１．８－邋■逡逑Ｓ邋（，６．逡逑０．０逦Ｉ逦１逦１逦１逦１逦１逦＞逡逑０．００逦２．００逦４．００逦６．００逦８．００逦１０．００邋１２．００邋１４．００逡逑葡萄糖浓度Ｗｇ／＇ｍＬ）逡逑图２．２葡萄糖标准曲线逡逑Ｆｉｇ．邋２．２邋Ｇｌｕｃｏｓｅ邋ｓｔａｎｄａｒｄ邋ｃｕｒｖｅ逡逑线性回归方程：Ａ＝０．０６１２Ｃ—０．０］６；相关系数：於＝０．９９７８，式中Ｃ邋（ｐｇ／ｍＬ）为逡逑葡萄糖溶液浓度，Ａ是对应的吸光度值，标准仙线如图。逡逑ＩＩ逡逑
【学位授予单位】：北京林业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：TQ281;TS201.4

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本文编号：2622116