三株植物内生真菌和两株土样放线菌的次级代谢产物及其活性研究

发布时间：2020-04-29 13:25

【摘要】：从天然产物中筛选药物先导化合物是新药开发的重要途径。如今医药市场上使用的绝大多数的抗生素是来自于放线菌和真菌次级代谢产物。临床药物中,青霉素和头孢菌素等抗生素,以及他汀类降血脂药物等,均产生自真菌。链霉素、土霉素,抗肿瘤的博莱霉素、丝裂霉素,抗真菌的制霉菌素,抗结核的卡那霉素,等,均产生自放线菌。所以真菌和放线菌一直是临床小分子先导药物的重要来源。为了获得结构新颖和有活性的菌株代谢产物,本论文以不同生源环境中分离得到的真菌和放线菌为研究对象,对其进行次级代谢产物的结构及其活性研究。文中通过对菌株的发酵培养,HPLC分析筛选,选取产物丰富,且量又大的五株菌,分别是放线菌 KIB-Hjusi 和 KIB-H1666,以及真菌 KIB-H11545,KIB-H11590 和KIB-H11595。运用硅胶层析柱、凝胶层析柱(Sephadex LH-20)和HPLC等分离手段对菌株的次级代谢产物的初提物进行分离纯化,然后通过核磁共振及质谱等手段确定结构。研究结果,从KIB-Hjusi中分离获得10个化合物,其中有7个是吩嗪羧酸类化合物(Phenazine carboxylic acids),且有5个是新的吩嗪羧酸类化合物;从KIB-H1666中分离获得4个化合物,化合物13是新结构;从KIB-H11595中分离获得6个已知的蒽醌类(Anthraquinones)化合物;从KIB-H11545中分离获得3个已知萘酮类化合物(Dinaphthalenones);从KIB-H11590中分离获得4个已知结构的化合物。采用滤纸片法对化合物进行针对性的抗真菌实验评价,结果显示化合物13和14对所选的受试菌株(棉花枯萎病菌、青霉菌、黄瓜枯萎病菌、水稻纹枯病菌和玉米弯孢菌叶斑病菌)均有很强的抑菌活性,化合物15对青霉菌有抑菌效果,化合物19对棉花枯萎病菌有一定抑制作用,化合物20对青霉菌有一定抑菌效果,化合物21和22对棉花'枯萎病菌有一定的抗菌活性,化合物22还对棉花枯萎病菌有一定的抑制作用,化合物24和25对玉米弯孢菌叶斑病菌有一定的抗菌活性。
【图文】：

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获得的化合物的结构解析以及化合物活性测定实验结果。4.1 菌株的发酵及其初提物的制备三株目标真菌及两株目标放线菌的发酵和初提代谢产物的制备流程分别如图4-1和图 4-2。真菌 KIB-H11545，KIB-H11590 和 KIB-H11595，以及放线菌 KIB-H1666 和KIB-Hjusi 分别经活化后，大量发酵 20 L，通过乙酸乙酯和甲醇的萃取后，得到初提代谢产物浸膏，干燥恒重后，称量其质量。图 4-1 真菌的发酵及其初提物的制备流程图Figure 4-1. The separation process of fermentation and initial extracts preparation for fungus

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图 4-2 放线菌的发酵及其初提物的制备流程图Figure 4-2. The separation process of fermentation and initial extractpreparation for actinomycosis代谢产物的分离及结构鉴定 KIB-Hjusi 的分离及结构鉴定B-Hjusi 初提物浸膏，干燥恒重后的质量为 4.5 g，首先对的质量比约为 1：1.5），经硅胶柱层析进行划段（100 %体系进行洗脱），然后用分析 HPLC 和 TLC 点板分析划到分离初组分 10 段（Fr 1- Fr 10），，后再经凝胶柱层析（Se复划段，最后由制备型 HPLC 分离纯化，得到已解析的B-Hjusi 的分离流程如下图 4-3。
【学位授予单位】：西安石油大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：TQ465.92

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