黑果枸杞叶黄酮的分离纯化及其抗氧化活性研究

发布时间：2020-06-07 03:25

【摘要】：黑果枸杞(Lycium ruthenicum Murr.)是我国荒漠地区中一种极其重要的药食同源类植物,属于茄科枸杞属落叶多棘刺灌木。黑果枸杞叶中含有一定量的黄酮类物质,抗氧化性质显著,是研制抗心脑血管疾病等药物的主要活性成分。本课题主要对黑果枸杞叶进行研究,分别进行了黑果枸杞叶总黄酮的提取、精制、分离纯化的工艺优化,以及探究不同黄酮类化合物体在体外的抗氧化活性强弱程度,揭示其中的构效关系,得出如下结论:(1)对黑果枸杞叶总黄酮采用超声波-微波协同提取,并用响应面优化提取工艺,通过对微波功率、液料比、提取时间和乙醇浓度四个因素的考察,主次关系依次为:液料比乙醇浓度提取时间微波功率。最佳提取工艺为:微波功率175 W,超声功率为200 W,液料比18.9(mL/g),提取时间9.9 min,乙醇浓度69%。在此条件下提取得到的黑果枸杞叶总黄酮提取率为(0.997±0.015)%。(2)对提取的黑果枸杞叶粗总黄酮在AB-8型大孔树脂环境中进行进一步纯化。通过对上样浓度、上样液PH值和上样液流速三个因素的考察,各因素对黑果枸杞叶总黄酮吸附率的影响程度为:上样浓度上样液pH上样液流速,最佳吸附条件为上样浓度为1.0 mg/mL,上样液pH值为5.0,上样液流速为1 mL/min;通过对乙醇浓度、洗脱液流速和洗脱液体积三个因素的考察,各因素对黑果枸杞叶总黄酮解吸率的影响程度为:洗脱液浓度洗脱液体积洗脱液流速,最佳解吸条件为洗脱液浓度为90%浓度乙醇,洗脱液流速为1 mL/min,洗脱液体积为6 BV。该工艺的平均回收率是(76.74±1.47)%。(3)采用Sephadex LH-20型葡聚糖凝胶色谱柱,分离纯化精制后的黑果枸杞叶总黄酮,共获得4种黄酮类化合物。通过紫外检测和UPLC定性分析,鉴定出4种黄酮类化合物分别为芦丁、槲皮素、木犀草素和异鼠李素,含量分别为芦丁0.92%,槲皮素0.08%,木犀草素0.79%,异鼠李素0.84%。(4)通过体外抗氧化实验,对不同黄酮类化合物的结构与抗氧化性之间的构效关系进行分析,揭示黑果枸杞叶黄酮抗氧化活性的作用特点。总体来说,在5种评价体系中,各物质的浓度与抗氧化性质均表现出一定的线性关系,且抗氧化能力随浓度的增大有不同程度的增大。槲皮素和芦丁在5种评价体系中表现出较强的抗氧化性质,究其原因可能与其结构中的酚羟基数量和取代位置有关。
【图文】：

交互作用,提取时间,响应面,黑果枸杞

第二章黑果枸杞叶总黄酮提取工艺优化液料比与乙醇浓度为极显著因素（P<0.01），BD 交互极为显著（P<0.01），BC 交显著（0.01<P<0.05）。失拟项不显著（P>0.05），表明模型与实际情况拟合较好，用该方程进行试验分析是可行的。2.3.3.3 响应面图分析为进一步研究各因素之间交互作用的影响，通过 Design-Expert 绘制的黑果枸杞总黄酮提取率三维响应面进行分析。响应面曲面角度较小，说明能够适应一定程度条件的变化。等高线图中同一椭圆型区域内表示提取率相同，中心最高，越向边缘散越低，且椭圆曲线排列越密表明该因素对总黄酮提取率影响越大。同时等高线越近圆型，，说明两因素交互作用越弱，越接近椭圆型，说明交互作用越显著[87]。液料和提取时间、乙醇浓度两个因素之间的交互作用显著（图 2-6、图 2-7），提取时间微波功率之间交互作用较弱（图 2-8）。

交互作用

（a）（b）图 2-7 液料比和乙醇浓度对总黄酮提取率的交互作用Fig.2-7 Effect of interaction between liquid-soild ratio and ethanol concentration on the extraction rateof total flavonoids（a）（b）
【学位授予单位】：天津商业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：TQ464

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