黄瓜嫩叶中葫芦素的制备及其抑菌活性研究

发布时间：2020-09-10 20:53

　　 葫芦素广泛分布于葫芦科属植物中,生物活性强,在提高细胞免疫机能,保肝、护肝等方面具有一定作用。临床医学上用于治疗慢性肝炎,尤其在肝癌方面具有辅助治疗的功效。黄瓜是葫芦科一年生植物,目前在中国种植广泛。黄瓜含有丰富的营养成分,黄瓜叶片则主要用于中药治疗儿童腹泻和痢疾。本论文以葫芦科甜瓜属黄瓜的鲜嫩叶为材料,进行黄瓜嫩叶中葫芦素的制备工艺以及纯化工艺的优化,并利用微生物实验探究葫芦素对细菌生长的抑制情况。主要结果如下:采用超声波辅助提取工艺在葫芦素的制备中分别考察超声波功率、提取时间、提取温度以及料液比四个因素对葫芦素提取量的影响。通过设计四因素三水平的正交实验表,得出最佳提取工艺为料液比1:11(g/mL)、提取时间20min、提取温度80℃、超声波功率50%(300W)。此工艺下葫芦素的提取量为10.568μg/mL。在葫芦素纯化工艺优化中,首先对S-8、AB-8、D-101、X-5、HPD-100、XAD-7六种型号大孔吸附树脂进行筛选,确定选用吸附-解吸效果均表现良好的D-101型树脂进行后续葫芦素纯化工艺的优化。在静态纯化工艺优化中,首先绘制吸附-解吸动力学曲线,确定静态吸附饱和时间为4h,解吸平衡时间为2.5h;再考察不同的洗脱剂浓度以及温度对纯化效果的影响。确定最佳洗脱剂浓度为70%乙醇溶剂,静态吸附温度40℃,解吸温度50℃。在动态纯化工艺优化部分,绘制泄漏曲线以及洗脱曲线,确定浓度为13.17μg/mL的待纯化葫芦素溶液最佳进样量为270mL,洗脱剂用量170mL为宜;考察不同的流动速度对树脂吸附-解吸纯化效果的影响,确定最佳的粗提液上样速度以及洗脱剂解吸速度同为2BV/h。结合静态及动态吸附-解吸的最佳工艺对葫芦素粗提液进行纯化,将纯化物经高效液相色谱分析,葫芦素的含量可达95.56%,纯度较高。采用牛津杯法进行黄瓜嫩叶中葫芦素的抑菌性研究。结果表明葫芦素对大肠杆菌及金黄色葡萄球菌的抑制效果尤为明显,最低抑菌浓度分别为11.17μg/mL和22.33μg/mL,对沙门氏菌生长的抑制稍弱于前两者,最低抑菌浓度为44.65μg/mL。自此葫芦素可由黄瓜嫩叶中制得,作为一种新型天然抑菌剂进行开发利用,也为探索其在抗癌、提高人体免疫力等领域的作用奠定理论基础。
【学位单位】：沈阳农业大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：TQ464
【部分图文】：

图 3-11 葫芦素标准品高效液相色谱图Fig.3-11 HPLC of Cucurbitacin standard图 3-12 葫芦素纯化物高效液相色谱图Fig.3-12 HPLC of Cucurbitacin purified product 3-11、3-12 可以看出，目标产物葫芦素在 10-15min 内有峰出现，且有拖尾现象（冯雪松等，2007）。葫芦素纯化物的高效液相色谱图中面积峰外其余六种物质含量极少，所得产品的纯度较好。章首先通过不同型号大孔树脂对葫芦素类化合物纯化的效果进行筛选

图 3-12 葫芦素纯化物高效液相色谱图Fig.3-12 HPLC of Cucurbitacin purified product-11、3-12 可以看出，目标产物葫芦素在 10-15min 内有峰出现，且拖尾现象（冯雪松等，2007）。葫芦素纯化物的高效液相色谱图中积峰外其余六种物质含量极少，所得产品的纯度较好。首先通过不同型号大孔树脂对葫芦素类化合物纯化的效果进行筛选素在吸附和解吸两方面都表现优异的大孔树脂进行葫芦素纯化工定选用 D-101 型大孔吸附树脂。吸附-解吸优化中，绘制静态动力学曲线，考察吸附时间及解吸时间吸葫芦素效果的影响。吸附过程随时间延长，树脂的吸附逐渐达到h 时，大孔树脂对葫芦素的吸附基本完全；解吸过程选用 70%乙醇直至时间达到 2.5h，洗脱剂对葫芦素的洗脱基本达到平衡。在考察附-解吸葫芦素的效果影响中确定了最佳吸附温度为 40℃，解吸

图 4-1 葫芦素对三种菌种生长的抑制影响 Inhibition of Cucurbitacin on the growth of thr表 4-4 葫芦素对菌种生长的抑制影响le 4-4 Inhibition of Cucurbitacin on the grow菌 种希氏大肠杆菌 金黄色葡萄球菌 沙3.0±0.5mm 10.0±0.5mm 7.3.0±0.5mm 9.0±0.5mm 6.2.0±0.5mm 9.0±0.5mm 7.菌种生长的抑制影响，葫芦素对金黄色葡萄球菌，大肠杆菌三种细菌对葫芦素的浓度变化较为敏感小或变化不明显。如图 4-2，大肠杆菌为 11.17μg/mL 的情况下仍可以表现出

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本文编号：2816316