初榨葡萄籽油对改善高脂膳食小鼠脂代谢的影响

发布时间：2020-10-10 06:42

　　长期高脂膳食会诱导机体脂代谢紊乱和氧化还原状态失衡,进而产生一系列和脂代谢紊乱相关的慢性疾病,比如肥胖、心血管疾病、2型糖尿病等。初榨葡萄籽油富含多不饱和脂肪酸、V_E(生育酚和生育三烯酚)、植物甾醇、角鲨烯、多酚等功能活性成分,成为食用植物油研究的最热点的话题。研究表明初榨葡萄籽油具有抗氧化、降血脂、抗衰老、抗癌等生理作用,但关于初榨葡萄籽油对调节生物体内的生理功能的作用机制尚需深入研究。本文旨在控制能量摄入一致的前提下,探究初榨葡萄籽油对改善高脂膳食小鼠脂代谢调节的影响,对进一步加大葡萄籽资源的综合应用具有深远的意义。首先,满足能量摄入保持一致的前提下,将高脂饲料中的油脂全部替换为猪油、玉米油和初榨葡萄籽油,初步探究全替换初榨葡萄籽油对改善小鼠脂代谢紊乱的影响。36只C57BL/6J雄性小鼠随机分成3组:猪油组(Lard组);玉米油组(CO组);初榨葡萄籽油组(GSO组)。饲养期间分别测定小鼠葡萄糖耐量和胰岛素耐量。小鼠处死后,分别取小鼠的血清和肝脏,观察肝脏切片,测定小鼠血清中TC、TG、HDL-C、LDL-C、FFA含量以及肝组织ALT和AST活力。结果表明:和Lard组相比,GSO组小鼠的最终体重和体重增长量分别减少了8.3%和18.3%;血清中的TC、TG、LDL-C、FFA含量以及肝脏中的ALT和AST活力均有显著性的降低(p0.05)。此外,全替换的初榨葡萄籽油可以显著改善小鼠葡萄糖耐量和胰岛素耐量(p0.05)。肝脏形态学结果显示全替换的初榨葡萄籽油可以显著地降低肝脏脂肪的沉积,减少脂肪细胞的大小(p0.05)。其次,能量摄入保持一致的前提下,高脂饲料中的猪油成分保持不变,将植物油脂成分分别替换成猪油、玉米油和初榨葡萄籽油,探究部分替换的初榨葡萄籽油对改善高脂膳食小鼠脂代谢紊乱的影响。48只五周龄C57BL/6J雄性小鼠随机分为4组:正常对照组(ND组),玉米油组(CO60%组),初榨葡萄籽油组(GSO60%组),猪油组(Lard60%组)。每周检测小鼠的体重,饲养期间测定小鼠葡萄糖耐量、胰岛素耐量、空腹血糖以及小鼠的能量代谢状态。小鼠处死后,分别取小鼠的血清、脂肪和肝脏,观察肝脏切片,测定小鼠血清中的生化指标,肝脏中的抗氧化指标,ELISA法测定小鼠肝脏炎症因子和脂肪组织中瘦素和脂联素指标,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)分析小鼠肝脏中的PPAR-α、ACC-1、FAS、SREBP-1c、SCD-1和ACOX-1基因的表达,脂肪组织炎症因子IL-6、TNF-α和MCP-1基因的表达。结果表明:和Lard60%组相比,GSO60%组小鼠的体重以及体重增量分别减少了6.22%和12.97%;呼吸交换率(RER)、能量消耗、自主活动量、葡萄糖耐量和胰岛素耐量均有显著性的提高(p0.05);血清中TC、TG、LDL-C、FFA、胰岛素、胰高血糖素以及全血中的糖化血红蛋白水平均有显著性的降低(p0.05);肝脏中的CAT、SOD、GSH-PX活力显著性地升高(p0.05),MDA活力显著性地降低(p0.05);肝脏炎症因子IL-6和TNF-α水平显著性地降低(p0.05);脂肪组织中瘦素水平显著性地降低(p0.05),脂联素水平显著性地升高(p0.05)。肝脏HE染色和油红O染色结果表明部分替换的初榨葡萄籽油可以一定程度地改善高脂膳食小鼠肝细胞损伤,降低肝脏脂肪的沉积,减少脂肪细胞的大小。RT-qPCR实验结果显示部分替换的初榨葡萄籽油可以上调小鼠肝脏中PPAR-α基因的表达,下调ACC-1、FAS、SREBP-1c基因以及脂肪组织炎症因子IL-6、TNF-α和MCP-1基因的表达。最后,初步探究初榨葡萄籽油的脂肪酸、不皂化物和多酚对改善高脂饲料小鼠脂代谢紊乱的影响。45只C57BL/6J雄性小鼠随机分为5组:猪油组(Lard),精炼葡萄籽油组(GSE),精炼葡萄籽油和不皂化物组(GSE+UN),精炼葡萄籽油和多酚组(GSE+PO),精炼葡萄籽油、不皂化物和多酚组(GSE+UN+PO)。实验期间测定小鼠的糖耐量和空腹血糖,小鼠处死后测定小鼠血清中TC、TG、ALT、AST以及胰岛素水平。结果表明:和Lard组相比,初榨葡萄籽油中的不饱和脂肪酸、不皂化物和多酚功能成分均能有效地改善高脂膳食小鼠的体重,减少肝脏脂肪的堆积,降低小鼠血清TC、TG和胰岛素水平。此外,初榨葡萄籽油不皂化物和多酚成分还可以有效地改善小鼠的糖耐量,不皂化物在改善小鼠脂代谢紊乱作用效果要强于多酚。
【学位单位】：江南大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：TS221
【部分图文】：

标准曲线,豆甾醇,标准曲线,角鲨烯

Fig. 2-1 Standard curve of stigmasterol4 角鲨烯测定照 Nenadis 等[122]方法：称取植物油 0.5 g，经硅胶柱处理后，采中的角鲨烯含量。准确称取 20mg 角鲨烯溶于 100mL 的正己烷储备液，然后用正己烷逐级稀释储备液得到一系列的标准工作溶.5、25、50、100 和 200μg/mL。按选定的色谱条件，取 20μL 进样浓度(x) 进行线性回归，标准曲线如图 2-2 所示，得到线性回归方6，R2=0.999。

标准曲线,角鲨烯,标准曲线,正己烷

图 2-1 豆甾醇标准曲线Fig. 2-1 Standard curve of stigmasterol鲨烯测定 Nenadis 等[122]方法：称取植物油 0.5 g，经硅胶柱处理后，采的角鲨烯含量。准确称取 20mg 角鲨烯溶于 100mL 的正己烷备液，然后用正己烷逐级稀释储备液得到一系列的标准工作溶25、50、100 和 200μg/mL。按选定的色谱条件，取 20μL 进样度(x) 进行线性回归，标准曲线如图 2-2 所示，得到线性回归方R2=0.999。

曲线,没食子酸,饲料配方,曲线

图 2-3 没食子酸的标准曲线Fig. 2-3 standard curve of gallic acid换初榨葡萄籽油对小鼠脂代谢的影响验动物和饲料配方龄 SPF 级 C57BL/6J 小鼠 36 只，购于上海斯莱克实验动物有分成 3 组，每组 12 只。饲料配方参照 D12451[124]配制而成籽油和猪油替换 D12451 饲料配方中的食用油脂，得到相应的籽油（GSO）组和猪油（Lard）组的高脂饲料配方，如表 2矿物质的配方严格参照 AIN-93G[125]配制。高脂饲料中热化合物占 35%，脂肪占 45%。实验小鼠饲养于 SPF 级动物度控制在（23±2）℃，湿度 60%。每天喂食一次，分别给料，所有饲养操作均符合江南大学实验动物管理委员会工作

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